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功能化单壁碳纳米管/nr2b-shrna干扰质粒复合物的制备及其用于慢性疼痛的基因治疗

中国疼痛医学杂志 2013年第4期19卷 220-224页

作者：甘丽阎雪彬章饶香黄东中南大学湘雅三医院麻醉科长沙410013 中南大学材料科学与工程博士后流动站长沙410083

目的：评价鞘内注射功能化单壁碳纳米管shrna干扰质粒复合物对福尔马林炎性痛小鼠的基因沉默效果。方法：先将整合了nr2b目的基因的pYr-1.1-hU6-EGFP（带绿色荧光）质粒进行扩增,抽提,消毒浓缩,浓度纯度测定,以获得高纯度、高浓度的nr2b... 详细信息

目的：评价鞘内注射功能化单壁碳纳米管shrna干扰质粒复合物对福尔马林炎性痛小鼠的基因沉默效果。方法：先将整合了nr2b目的基因的pYr-1.1-hU6-EGFP（带绿色荧光）质粒进行扩增,抽提,消毒浓缩,浓度纯度测定,以获得高纯度、高浓度的nr2b-shrna干扰质粒;将难溶于水的单壁碳纳米管用表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAb）和超声振荡法制备成功能化单壁碳纳米管（f-SWNT）混悬液,通过凝胶成像系统检测功能化单壁碳纳米管与nr2b-shrna的结合情况;选取雄性清洁级成年C57bL/6小鼠40只,体重18~23 kg,随机分为5组（n=8）：空白组（C组）,假手术组（S组）,实验组（A组）,阳性对照组（P组）,阴性对照组（N组）;分别行鞘内注射,7天后建立福尔马林炎性痛小鼠模型,测定术后1 h自发痛行为学改变,取脊髓L4~6节段采用RT-PCR法检测nr2bmRNA表达。结果：获得能够稳定表达的nr2b-shrna干扰质粒;表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAb）修饰单壁碳纳米管能形成较稳定的功能化单壁碳纳米管混悬液;功能化单壁碳纳米管能与nr2b-shrna干扰质粒很好地结合,其结合最佳质量比为1：3.5;对于福尔马林所致的Ⅰ相急性痛,所有组间的急性期伤害性反应无差别（P〉0.05）,阳性对照组（P组）和实验组（A组）小鼠对福尔马林所致的Ⅱ相持续痛的伤害性反应显著降低（P〈0.02）;阳性对照组（P组）和实验组（A组）小鼠脊髓nr2bmRNA表达均低于其他对照组（P〈0.05）。结论：功能化单壁碳纳米管能与nr2b-shrna干扰质粒很好地结合形成功能化单壁碳纳米管/nr2b-shrna干扰质粒复合物;鞘内注射功能化单壁碳纳米管用作基因载体能有效转染nr2b-shrna干扰质粒复合物行nr2b基因沉默,抑制小鼠脊髓nr2b基因表达,减轻福尔马林Ⅱ相痛行为学。

关键词： nr2b-shrna干扰质粒单壁碳纳米管十六烷基三甲基溴化铵 NMDA 受体2b亚基炎性痛

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