功能化单壁碳纳米管/NR2B-shRNA干扰质粒复合物的制备及其用于慢性疼痛的基因治疗

作     者：甘丽 阎雪彬 章饶香 黄东 GAN Li;YAN Xue-Bin;ZHANG Rao-Xiang;HUANG Dong

作者机构：中南大学湘雅三医院麻醉科长沙410013 中南大学材料科学与工程博士后流动站长沙410083 

出 版 物：《中国疼痛医学杂志》 (Chinese Journal of Pain Medicine)

年 卷 期：2013年第19卷第4期

页      面：220-224页

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金(项目编号:81172546) 中南大学研究生科研创新项目(项目编号:2011ssxp198) 湖南省科技厅科技计划项目(项目编号:2010WK3021) 

主　　题：NR2B-shRNA干扰质粒 单壁碳纳米管 十六烷基三甲基溴化铵 NMDA 受体2B亚基 炎性痛 

摘      要：目的：评价鞘内注射功能化单壁碳纳米管shRNA干扰质粒复合物对福尔马林炎性痛小鼠的基因沉默效果。方法：先将整合了NR2B目的基因的pYr-1.1-hU6-EGFP（带绿色荧光）质粒进行扩增,抽提,消毒浓缩,浓度纯度测定,以获得高纯度、高浓度的NR2B-shRNA干扰质粒;将难溶于水的单壁碳纳米管用表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）和超声振荡法制备成功能化单壁碳纳米管（f-SWNT）混悬液,通过凝胶成像系统检测功能化单壁碳纳米管与NR2B-shRNA的结合情况;选取雄性清洁级成年C57BL/6小鼠40只,体重18~23 kg,随机分为5组（n=8）：空白组（C组）,假手术组（S组）,实验组（A组）,阳性对照组（P组）,阴性对照组（N组）;分别行鞘内注射,7天后建立福尔马林炎性痛小鼠模型,测定术后1 h自发痛行为学改变,取脊髓L4~6节段采用RT-PCR法检测NR2BmRNA表达。结果：获得能够稳定表达的NR2B-shRNA干扰质粒;表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）修饰单壁碳纳米管能形成较稳定的功能化单壁碳纳米管混悬液;功能化单壁碳纳米管能与NR2B-shRNA干扰质粒很好地结合,其结合最佳质量比为1：3.5;对于福尔马林所致的Ⅰ相急性痛,所有组间的急性期伤害性反应无差别（P〉0.05）,阳性对照组（P组）和实验组（A组）小鼠对福尔马林所致的Ⅱ相持续痛的伤害性反应显著降低（P〈0.02）;阳性对照组（P组）和实验组（A组）小鼠脊髓NR2BmRNA表达均低于其他对照组（P〈0.05）。结论：功能化单壁碳纳米管能与NR2B-shRNA干扰质粒很好地结合形成功能化单壁碳纳米管/NR2B-shRNA干扰质粒复合物;鞘内注射功能化单壁碳纳米管用作基因载体能有效转染NR2B-shRNA干扰质粒复合物行NR2B基因沉默,抑制小鼠脊髓NR2B基因表达,减轻福尔马林Ⅱ相痛行为学。