检索结果-南通市图书馆

作者：郭田田昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]对云南省大理市片形吸虫的种类进行分子鉴定,并对其部分线粒体DNA序列进行研究,旨在从分子水平上揭示我国云南省大理市片形吸虫的种类、遗传结构及生物学特性。[方法]1、收集成虫样品及形态学鉴定：片形吸虫成虫取自云南省大理... 详细信息

[目的]对云南省大理市片形吸虫的种类进行分子鉴定,并对其部分线粒体DNA序列进行研究,旨在从分子水平上揭示我国云南省大理市片形吸虫的种类、遗传结构及生物学特性。[方法]1、收集成虫样品及形态学鉴定：片形吸虫成虫取自云南省大理市病牛的肝胆管内,根据体形、肩部特征、虫体的长宽比例、肠管的分支等形态学特点将其初步分成两种,即肝片形吸虫与巨片形吸虫。2、基因组DNA的提取及鉴定：取一个虫体的1/3,用生理盐水反复进行冲洗,再用超纯水反复冲洗4-5次,置于一已消毒的1.5m1的离心管中。用组织剪尽可能的将虫体剪成碎块后再用组织研磨仪进行充分研磨,加入Buffer GL 180μl、Proteinase K 20μl、RNase A10μl,将得到的组织混合液置于56℃水浴箱中过夜,按照TaKaRa MiniBest Universal Genomic DNA Extraction KitVer.5.0试剂盒说明书提取基因组DNA,并用紫外分光光度计检测其纯度,于-20℃冰箱保存。3、PCR扩增及测序：用PCR扩增技术对片形吸虫核糖体ITS-2及线粒体cox1、nadl、nad5基因序列进行扩增,并将PCR产物送至昆明硕擎生物科技公司进行测序。4、序列分析及构建系统进化树：用DNAStar7.0软件将得到的序列与已报道的片形吸虫核糖体ITS-2线粒体cox1、nadl、nad5基因序列进行相似性比较,并用MegAlign软件对线粒体cox1、nadl、nad5基因序列构建系统进化树。[结果]1、以核糖体ITS-2作为遗传标记将来自云南省大理市的6个片形吸虫样品鉴定为两种,即肝片形吸虫和巨片形吸虫。2、获得了云南省大理市片形吸虫线粒体cox1、nadl、nad5片段的基因序列,经分子Marker(DL2000)和测序鉴定,三个基因片段大小分别为385bp、380bp、303bp,与预期目的基因大小相符。3、序列相似性分析显示各序列片形吸虫的种间分歧度分别为6.5%-7.4%、8.7%-9.4%、13.2%-14.8%;种内分歧度分别为0.3%-1.0%、0-2.6%、0.3%-3.6%。4、三个基因片段的分子进化树显示：云南省大理市肝片形吸虫样品与GeneBank中已发表的其它不同地域肝片形吸虫种株较紧密的聚集在一起,没有明显的分化;巨片形吸虫样品与其它不同地域巨片形吸虫种株较紧密的聚集在一起,分化不明显,但肝片形吸虫和巨片形吸虫种问分化则比较明显,且系统进化树显示结果与序列分析结果一致。[结论]1、云南省大理市至少存在肝片形吸虫与巨片形吸虫两种片形吸虫。2、云南省大理市片形吸虫存在着不同程度的遗传变异,其种内变异不明显,种间分化则比较显著。

关键词：片形吸虫 ITS-2 cox1 nad1 nad5

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水稻粉质胚乳突变体F29的基因克隆及功能分析

水稻粉质胚乳突变体F29的基因克隆及功能分析

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作者：毕梦蕾南京农业大学

学位级别：硕士

水稻（Oryza sativaL.）是世界上最重要的粮食作物之一,全球约有50%的人口以稻米为主食,提高水稻产量和品质至关重要。水稻在生长发育过程中主要以淀粉的形式储存能量,而胚乳能积累大量的淀粉。胚乳异常突变体是研究水稻淀粉合成的优良... 详细信息

水稻（Oryza sativaL.）是世界上最重要的粮食作物之一,全球约有50%的人口以稻米为主食,提高水稻产量和品质至关重要。水稻在生长发育过程中主要以淀粉的形式储存能量,而胚乳能积累大量的淀粉。胚乳异常突变体是研究水稻淀粉合成的优良材料,对水稻胚乳发育异常的粉质突变体进行基因的克隆与功能研究具有十分重要的意义。本研究通过对水稻品种宁粳4号进行EMS诱变,获得一个粉质突变体F29。通过图位克隆和基因初步功能分析,具体结果如下:1、F29纯合突变体成熟种子呈全粉质且不能发育成完整植株,30天左右枯萎死亡。突变体成熟种子千粒重显著降低,TTC染色等实验表明成熟种子胚缺乏活力。突变体胚乳生长发育滞后,半薄切片显示花后12天发育中胚乳的淀粉颗粒发育迟缓,扫描电镜观察成熟种子横切面皱缩且淀粉颗粒排列疏松,空隙较大。2、用该突变体杂交配组后代进行图位克隆,精细定位结果显示该基因定位在1号染色体长臂150 kb的区间内。通过RiceXPro、NCBI等网站预测,发现区间内有一个编码PPR蛋白的基因,基因号为Os01g0908800。对该基因进行测序,发现该基因编码区的第三个碱基G突变为A,起始密码子ATG突变为ATA,导致该基因不能被正常翻译。该基因全长1521 bp,有且仅有一个外显子,编码一个P家族的PPR蛋白,由8个PPR基序组成。将其命名为OsNPPR2（Nuclear PPR2）。3、该基因编码的PPR蛋白在野生型宁粳4号中呈组成型表达,在水稻原生质体和烟草表皮细胞瞬时表达中显示该基因编码的PPR蛋白定位在细胞核。因为在前人研究中,大多数PPR蛋白都是定位在线粒体和叶绿体中,因此该PPR蛋白较为特殊。4、突变体种子萌发约30天后枯萎死亡。荧光定量PCR、Western Blot以及凝胶电泳结果显示,编码线粒体复合体Ⅰ（Mitochondrial Complex 1）亚基nad1的RNA剪接出现问题。nad1基因的第一个内含子中714bp没有被剪切掉,因此导致nad1不能正常行使功能。对突变体开花后9天发育中胚乳的线粒体进行透射电镜观察,证实了线粒体结构存在缺陷。本研究中发现了一个新的水稻中定位在细胞核的PPR蛋白,并证实该蛋白对水稻的生长发育尤为重要。但该蛋白定位在细胞核核中是如何参与影响线粒体功能的具体途径还有待进一步的研究。

关键词：水稻 PPR蛋白线粒体 nad1 RNA剪接

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新疆部分地区绵羊包虫病血清学调查及其病原分子鉴定

新疆部分地区绵羊包虫病血清学调查及其病原分子鉴定

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作者：薛文塔里木大学

学位级别：硕士

为了解新疆部分地区绵羊包虫病流行情况,掌握优势流行株基因型,本研究采用组织病理学观察和ELISA法对新疆部分地区绵羊的血液样本进行包虫抗体检测,同时采用PCR法扩增细粒棘球绦虫线粒体基因组cox1基因和nad1基因片段,对扩增产物测序和... 详细信息

为了解新疆部分地区绵羊包虫病流行情况,掌握优势流行株基因型,本研究采用组织病理学观察和ELISA法对新疆部分地区绵羊的血液样本进行包虫抗体检测,同时采用PCR法扩增细粒棘球绦虫线粒体基因组cox1基因和nad1基因片段,对扩增产物测序和分析,明确巴州、昌吉、吐鲁番、乌鲁木齐、伊犁5个地区流行株基因型。1.采用ELISA法检测新疆21个县(区、县级市)共计886份绵羊血清样本。结果显示:新疆部分地区绵羊包虫病血清个体阳性率为10.2%(90/886),场群流行率为21.9%(67/306),不同地区的绵羊包虫病血清个体阳性率差异性较大(P10.6%(28/263)和10.0%(62/623),不具有统计学差异(P>0.05),而场群流行率分别为68.4%(13/19)、18.8%(54/287),差异显著(P11.9%(58/487),东疆次之9.7%(13/134),北疆为7.2%(19/265),且北疆地区和南疆地区包虫病的场群流行率均比较高,分别为25.4%(15/59)、22.5%(46/204),东疆地区相对较低,为14.0%(6/43)。研究结果提示,新疆地区绵羊包虫病感染仍较为普遍。2.显微镜观察法对新疆地区部分屠宰场收集的绵羊肝包囊样本进行组织病理学观察,包囊附近肝细胞可见大量嗜酸性粒细胞,肝细胞周围出现炎性细胞浸润,肝细胞明显萎缩,细胞体积明显缩小,部分细胞变性坏死。3.采用PCR法检测新疆部分地区规模化屠宰场羊肝脏组织内经肉眼观察鉴定为细粒棘球蚴的包囊样本96份,全部提取DNA后,基于细粒棘球蚴绦虫cox1基因位点和nad1基因位点PCR法扩增和测序。结果显示:基于cox1基因位点,扩增出目的条带的有81份样本84.4%(81/96),存在15个单倍型(Hap＿1-Hap＿15),均属细粒棘球蚴G1基因型(n=81);基于nad1基因位点,扩增出目的条带的有67份样本69.8%(67/96),存在19个单倍型(Hap＿1-Hap＿19),序列鉴定出两种基因型,分别为细粒棘球蚴G1基因型(n=66)和G3基因型(n=1)。综上所述,研究发现新疆地区羊源细粒棘球蚴呈现遗传多样性分布特征,G1基因型为优势感染基因型,同时在吐鲁番市高昌区发现感染G3基因型,研究结果为我国羊包虫病的防治提供了基础数据。

关键词：包虫病细粒棘球绦虫基因型 cox1 nad1

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人体混合感染巨片吸虫和巨片吸虫与肝片吸虫的中间型

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昆明医科大学学报 2018年第4期39卷 40-46页

作者：张勇白庭富庄杉杉李树德田明王文林昆明医科大学第六附属医院暨玉溪市人民医院肝胆外科云南玉溪653100 新平县人民医院外科云南新平653400 昆明医科大学基础医学院病原生物学系云南昆明650500 昆明医科大学基础医学院生物化学系云南昆明650500 昆明医科大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学系云南昆明650500

目的通过线粒体nad1和细胞核ITS1序列,对从云南省玉溪地区一女性片形吸虫病患者体内取出的2条片形吸虫成虫进行虫种鉴定,获知寄生于人体的片形吸虫种类.方法片形吸虫标本保存于75%乙醇溶液,提取全基因组DNA,PCR扩增线粒体基因nadH脱氢... 详细信息

目的通过线粒体nad1和细胞核ITS1序列,对从云南省玉溪地区一女性片形吸虫病患者体内取出的2条片形吸虫成虫进行虫种鉴定,获知寄生于人体的片形吸虫种类.方法片形吸虫标本保存于75%乙醇溶液,提取全基因组DNA,PCR扩增线粒体基因nadH脱氢酶亚基1(nad1)和细胞核r DNA的第一内转录间隔区(ITS1)序列,正反引物双向测序.所测序列与Gen Bank中Fasciola属相关同源序列组成DNA数据集,进行ITS1单倍型分析和构建nad1的NJ系统发育树.结果测得片形吸虫标本的ITS1和nad1序列长度分别是422 bp和542bp.2条片形吸虫标本的nad1序列完全一致,属于***(Fg型).但是ITS1单倍型不一致,标本YXGD01在该基因中属于***(Fg型),标本YXGD02属于***(Fh型).基于nad1 DNA数据集构建的NJ系统发育树,明显分为***和*** 2个类群.结论基于线粒体nad1和细胞核ITS1序列,从云南省玉溪地区一片形吸虫病患者体内取出的2条片形吸虫属于不同类型,标本YXGD01鉴定为***,标本YXGD02可能是***与***杂交生成的中间型个体,但需要更多的实验证据.

关键词：巨片吸虫肝片吸虫中间型混合感染 ITS1 nad1 云南省

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The genetic variation of Angiostrongylus cantonensis in the People’s Republic of China

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Infectious Diseases of Poverty 2017年第1期6卷 1100-1110页

作者： Shan Lv Yi Zhang Peter Steinmann Jurg Utzinger Xiao-Nong Zhou National Institute of Parasitic Diseases Chinese Center for Disease Control and PreventionShanghai 200025People’s Republic of China Swiss Tropical and Public Health Institute P.O.BoxCH-4002 BaselSwitzerland University of Basel P.O.BoxCH-4003 BaselSwitzerland

Background:The People’s Republic of China(***)is the presumptive home range of the rat lungworm Angiostrongylus cantonensis,a major aetiological agent of human eosinophilic *** present a study of the genetic variation of *** in *** aim was to deepen the current knowledge pertaining to its origin and global spread from a molecular ***:Adult *** were collected in the frame of a national survey and identified based on morphological *** chain reaction(PCR)was employed to amplify the target DNA sequences(cytochrome c oxidase subunit I(cox1),nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase subunit 1(nad1)and internal transcribed spacer(ITS)).The PCR product of cox1 was directly submitted to sequencing,while clone sequencing was used for nad1 and *** identity of the samples was verified by comparing the sequences to those of accepted *** *** specific composition of substitutions in each gene was analysed,and the genotypes were compared based on the complete cox1,nad1 and ITS ***:We characterised the complete mitochondrial genes cox1 and nad1 of 130 specimens and obtained 357 nuclear sequences containing two complete ITS(ITS1 and ITS2)and 5.8S rRNA of the same *** specimens were genetically confirmed as *** major groups(i.e.I and II)were identified according to the phylogeny of cox1 *** I could be further categorised into six distinct *** half of the specimens(47.7%)belong to the clade Ia and 22.3%to the group *** former was widely distributed across the study region.A variable number of repeat units in three microsatellites was observed,resulting in considerable length variation in *** variation of ITS sequences was found in a large proportion of the *** showed a striking difference between mitochondrial DNA and ***:Our results demonstrate that *** is the only rat lung

关键词： Angiostrongylus cantonensis Genetics cox1 nad1 Internal transcribed spacer People’s Republic of China

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我国片形吸虫线粒体基因组部分序列多态性的研究

我国片形吸虫线粒体基因组部分序列多态性的研究

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中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：董世娟朱兴全黄维义林瑞庆钱德兴宋慧群华南农业大学兽医学院广西大学动物科学技术学院贵州省兽医防疫检疫总站

用γ33P对引物进行标记,对76株片形吸虫的线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基1基因部分序列(pcox1)和nadH脱氢酶亚基1基因部分序列(pnad1)进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(SSCP)分析,结果76株虫体均成功地扩增出约450bp的pcox1基因片段和约... 详细信息

用γ33P对引物进行标记,对76株片形吸虫的线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基1基因部分序列(pcox1)和nadH脱氢酶亚基1基因部分序列(pnad1)进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(SSCP)分析,结果76株虫体均成功地扩增出约450bp的pcox1基因片段和约200bp的pnad1基因片段;SSCP分析显示出不同地区或同一地区的不同样品在pcox1和pnad1的SSCP带型上存在多态性:测序结果显示我国片形吸虫pcox1序列和pnad1序列均种内变异不明显,种间变异显著,两段基因的测序结果互相支持。表明cox1序列和had1序列可以作为片形吸虫种内和种间遗传多态性研究的标记。

关键词：片形吸虫 cox1 nad1 PCR-SSCP 多态性

来源： cnki会议评论

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