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骨髓间充质干细胞的分离鉴定及向血管内皮细胞诱导分化过程中microrna126的表达

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第二军医大学学报 2013年第12期34卷 1350-1354页

作者：吴弘徐晓晶吴峰储国俊赵仙先秦永文第二军医大学长海医院心血管内科上海200433 生物芯片上海国家工程研究中心上海201203 上海伯豪生物技术有限公司上海201203

目的建立分离大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）及将其定向诱导分化为血管内皮细胞（endothelialcells，EDCs）的方法，并通过观察micrornal26的表达规律初步探索其在定向分化中的调控作用。方法通过反复贴壁及人工... 详细信息

目的建立分离大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）及将其定向诱导分化为血管内皮细胞（endothelialcells，EDCs）的方法，并通过观察micrornal26的表达规律初步探索其在定向分化中的调控作用。方法通过反复贴壁及人工分选方法进行大鼠骨髓MSCs的体外分离纯化及扩增，运用免疫荧光法检测MSCs中CD34、CDl05和CD73的表达。应用MEF诱导分化培养液将MSCs定向诱导分化为EDCs，采用qRT—PCR法检测细胞诱导分化过程不同时间点EDCs特征基因CD34、血管内皮钙黏蛋白（VE—cadherin）及调控小RNA分子micrornal26的表达。结果经分离纯化的骨髓MSCsCD34呈阴性表达，CDl05呈强阳性表达，CD73呈阳性表达，证实骨髓MSCs分离成功，且细胞均一性较好，占细胞总数的90％以上。MSCs定向诱导为EDCs早期分化过程中，在诱导前期第1～4天，VE-cadherin和CD34基因呈阴性表达；第5～6天VE-cadherin和CD34表达显著；第7～9天，VE-cadherin呈持续阳性表达，而CD34于第7天下降，第8～9天又呈阳性表达。micrornal26在分化过程中的表达趋势与CD34一致。结论成功建立了骨髓MSCs的分离方法及定向诱导分化为EDCs的方法；micrornal26在MSCs向EDCs的定向分化过程中可能起一定的调控作用。

关键词：骨髓间充质干细胞内皮细胞细胞分化 microrna126

microrna126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的影响

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MicroRNA126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的影响

作者：何亚非郑州大学

学位级别：硕士

背景:糖尿病是一种复杂的代谢紊乱性疾病,血糖代谢紊乱是其主要特征。研究表明,葡萄糖的代谢紊乱可能与高血糖代谢记忆、炎症反应以及线粒体功能异常有关,但有关糖尿病的具体发病机制,到目前仍不明确。Micro RNAs(mi RNAs)是一类序列短... 详细信息

背景:糖尿病是一种复杂的代谢紊乱性疾病,血糖代谢紊乱是其主要特征。研究表明,葡萄糖的代谢紊乱可能与高血糖代谢记忆、炎症反应以及线粒体功能异常有关,但有关糖尿病的具体发病机制,到目前仍不明确。Micro RNAs(mi RNAs)是一类序列短小的、进化上高度保守的、非编码的RNA,由20-25个单核苷酸组成。mi RNAs通过与靶基因3’非编码区结合,导致m RNA降解或直接抑制m RNA的翻译,对基因转录后进行调控,从而参与许多生理病理过程的精细调节。研究发现,mi RNAs在细胞增殖和凋亡、炎症反应、信号传导、细胞代谢以及肿瘤的发生发展过程中起到至关重要的作用。大量的实验证据[1]表明,mi RNAs在维持机体葡萄糖的稳态和糖尿病的发展中有重要的调节作用。Anna Zampetaki等人发现在糖尿病患者的血浆中micro RNA126(mi R-126)的相对表达量明显降低,提出mi R-126能准确鉴别糖尿病高危者和健康人,可以作为糖尿病疾病发展的标志物。同时,我课题组在前期研究发现,mi R-126在1型和2型糖尿病患者血浆中水平降低,其表达水平与炎症反应以及脂代谢紊乱等多种糖尿病危险因素相关。肝脏是人体主要的葡萄糖代谢场所,在糖尿病的发生发展中起着至关重要的作用。mi R-126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的具体作用如何呢?本研究针对改变chang liver细胞mi R-126的表达量,以探讨mi R-126表达水平改变时对细胞胰岛素反应的敏感性和葡萄糖代谢的影响,以进一步了解糖尿病的发病机理。材料和方法:*** liver细胞分为3组,正常对照组、negative control FAM(NC-FAM)组、micro RNA inhibitor NC-FAM(IN-NC-FAM)组,分别用不同浓度10、20、40、80n M在lipofectamine2000(Lip2000)作用下转染细胞,确定最佳转染条件。2.将chang liver细胞分为6组,分别为micro RNA126 mimic(mi R-126)组、negative control(NC)组、micro RNA126 inhibitor(In-mi R-126)组、micro RNA inhibitor negative control(In-NC)组、lipofectamine2000(Lip2000)组和正常细胞对照组,按照上述优化的转染条件将对应的人工合成的核苷酸序列转染入相应的细胞组。3.实时荧光定量聚合酶联反应(q RT-PCR)检测各组细胞mi R-126表达水平。4.将步骤2中各组细胞转染后培养48h,用人工合成胰岛素(100n M)刺激12小时,用GOD-POD法测上清葡萄糖浓度,BCA法测板下层细胞蛋白浓度,蒽酮法测定细胞糖原含量,乳酸测定试剂盒测定乳酸生成量,丙酮酸激酶测试盒测定丙酮酸激酶活力,用糖原含量/蛋白含量(μmol·mg-1)表示细胞糖原合成量;在乳酸作用下,用上清葡萄糖生成量/蛋白浓度(mmol·mg-1)的值表示细胞糖异生量;在高糖环境(葡萄糖浓度11.1mmol/L)下,用乳酸生成量/蛋白浓度(mmol·mg-1)的值和丙酮酸激酶活力/蛋白浓度(U/gprot)表示细胞糖酵解量,从而观察mi R-126在正常肝细胞含量不同时,对细胞葡萄糖利用率、糖原合成、糖异生以及糖酵解作用的影响。结果:1.在无血清无抗生素的培养基中,转染6小时,荧光显微镜下观察,FAM标记的无意对照序列(NC-FAM、IN-NC-FAM)能够有效转染人正常肝细胞,且呈浓度依赖性,确定80n M为适宜转染浓度。2.q RT-PCR结果显示:mi R-126组与其他各组相比较,mi R-126组mi R-126相对表达量明显高于其余的各实验组以及对照组,差异具有统计学意义(P126组、NC组、In-NC组、lip2000组与正常对照组相比较mi R-126的相对表达量变化无统计学意义(P>0.05)。3.将各核苷酸序列转染至对应细胞后,mi R-126组较正常对照组葡萄糖消耗量下降(33.66±2.55 vs 59.12±4.03 P126组与正常对照组相比糖异生量增加(17.05±0.88 vs 13.05±0.41P126组与正常对照组相比较糖异生量下降(7.41±1.

关键词： microrna126 人正常肝细胞株葡萄糖代谢糖尿病

平喘方对支气管哮喘小鼠肺组织microrna126与GATA-3表达的影响

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中成药 2013年第11期35卷 2324-2328页

作者：刘斐虞坚尔白莉上海中医药大学附属市中医医院上海200071

目的通过观察平喘方(麻黄、苦杏仁、紫苏子、桃仁、莱菔子、黄芩等)对支气管哮喘模型小鼠肺组织中microrna126与GATA-3表达的影响,阐释平喘方改善气道炎症的作用机制。方法采用10%鸡卵白蛋白腹腔注射致敏和5%卵白蛋白雾化吸入激发,建立B... 详细信息

目的通过观察平喘方(麻黄、苦杏仁、紫苏子、桃仁、莱菔子、黄芩等)对支气管哮喘模型小鼠肺组织中microrna126与GATA-3表达的影响,阐释平喘方改善气道炎症的作用机制。方法采用10%鸡卵白蛋白腹腔注射致敏和5%卵白蛋白雾化吸入激发,建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型。40只雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组和平喘方组,每组10只,治疗4周后采集小鼠肺组织,用光学显微镜观察小鼠肺组织的病理学改变。用聚合酶链式反应测定肺组织中microrna126与GATA-3 mRNA的表达量。结果平喘方可以有效降低microrna126,负向调控GATA-3的表达量,减轻支气管哮喘模型小鼠的症状,其作用与地塞米松组相当。结论平喘方对microrna126的干预可能是降低GATA-3的一个切入点,从而达到抑制TH2过度表达,改善气道炎症。

关键词：支气管哮喘平喘方 microrna126 GATA-3

microrna126与结肠癌关系研究进展

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生命的化学 2019年第2期39卷 333-337页

作者：陈静文柳蔚邓晓卓蒋安蓉喻玲玲三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室宜昌443002

microrna是一类高度保守的非编码RNA,在诱导调控肿瘤发生发展方面的研究已有了众多的成果。microrna126被认为是一种肿瘤抑制因子,对多种肿瘤的增殖、迁移、侵袭及预后等起着显著的抑制作用,microrna126在大部分肿瘤组织中呈低表达,并... 详细信息

microrna是一类高度保守的非编码RNA,在诱导调控肿瘤发生发展方面的研究已有了众多的成果。microrna126被认为是一种肿瘤抑制因子,对多种肿瘤的增殖、迁移、侵袭及预后等起着显著的抑制作用,microrna126在大部分肿瘤组织中呈低表达,并且与肿瘤的发生发展呈负相关,在肿瘤的诊断、治疗及预后判断等方面具有潜在价值。本文主要对近年来microrna126在结肠癌中的发生发展研究新进展作一综述,为结肠癌新诊断和治疗策略的制订提供基础理论依据。

关键词： microrna126 结肠癌靶基因肿瘤标志物

microrna126在重度子痫前期内皮祖细胞的表达及其差异性表达的意义

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microRNA126在重度子痫前期内皮祖细胞的表达及其差异性表达的意义

血清microrna126和microrna1检测对心衰诊断价值的研究

中华医学会第十次全国妇产科学术会议产科会场（产科学组、妊高症学组）

作者：邹丽刘艳颜婷华中科技大学同济医学院附属协和医院

目的研究正常妊娠者和重度子痫前期者脐血中血管内皮祖细胞(EPCs)数量和功能变化,以及对血管新生和血管再生起重要作用的基因microrna126在两者脐血血管内皮祖细胞(EPCs)中的表达差异。方法 1.细胞培养和鉴定:分离、培养正常妊娠患者脐... 详细信息

目的研究正常妊娠者和重度子痫前期者脐血中血管内皮祖细胞(EPCs)数量和功能变化,以及对血管新生和血管再生起重要作用的基因microrna126在两者脐血血管内皮祖细胞(EPCs)中的表达差异。方法 1.细胞培养和鉴定:分离、培养正常妊娠患者脐血EPCs,利用细胞形态学和EPCs特异性FITC-UEA-I和Dil-ac-LDL免疫荧光吞噬功能检测鉴定。2.体外模型的建立:收集正常妊娠患者和

关键词：重度子痫前期 microrna126 内皮祖细胞

来源： cnki会议评论

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现代检验医学杂志 2018年第3期33卷 18-20,23页

作者：浩日瓦娜日罕周红董莉内蒙古医科大学附属医院检验科呼和浩特010050

目的探讨血液中microrna-126(miR-126)和microrna-1(mir-1)在心衰患者中的诊断及预后评估价值。方法选择2015年9月~2017年1月心内科住院病人心梗后心衰患者(AMI组)45例,扩心病心衰患者(DCM组)30例,健康体检者(健康对照组)20例,采用定量... 详细信息

目的探讨血液中microrna-126(miR-126)和microrna-1(mir-1)在心衰患者中的诊断及预后评估价值。方法选择2015年9月~2017年1月心内科住院病人心梗后心衰患者(AMI组)45例,扩心病心衰患者(DCM组)30例,健康体检者(健康对照组)20例,采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其血清中miR-126和miR-1的相对含量,进行统计学分析。结果(1)患者组与对照组的miR-126和miR-1分别为0.76±0.012vs 1.01±0.145和0.54±0.09vs 1.27±0.649,与对照组比较,患者组显著低于对照组,差异具有统计学意义(t=72.14,38.05,均P0.005)。(2)患者组中miR-126,miR-1与NTproBNP,cTnT,心胸比均呈负相关,与LVEF呈正相关,相关系数分别为:-0.427,-0.578;-0.716,-0.534;-0.311,-0.631;0.557和0.435,均P126和miR-1诊断心衰的ROC曲线下面积为0.52和0.51,最佳cutoff值分别为0.549和0.53,灵敏度为55%和65.3%,特异度为85%和78.2%,准确度为87.1%和90.2%,联合检测NTproBNP和cTnT诊断心衰的灵敏度、特异度分别为69.3%和92.6%。(4)血清miR-1,miR-126水平与患者1年主要不良心脏事件(MACE)及死亡率无关,相对危险度为(2.35,0.53,P>0.005)。结论用ROC曲线分析的结果表明,miR-126和miR-1对于心衰具有诊断价值,联合NTproBNP和cTnT对心衰诊断和治疗更有意义,但不能用于心衰病因的区分,且对患者1年的预后及不良事件预测无意义。

关键词： microrna126 microrna1 心肌梗死扩心病心衰

肿瘤抑制因子microrna126的研究进展

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中华消化病与影像杂志（电子版） 2011年第1期1卷 50-54页

作者：公绪华陈超朱樑第二军医大学附属长征医学消化内科上海200003

大量研究表明,microrna作为一种重要的转录后基因调控元件,在多种疾病尤其是肿瘤的发生发展中发挥重要作用。microrna126被认为是一种肿瘤抑制因子,在多种肿瘤如胃癌、结肠癌、肺癌、宫颈癌以及乳腺癌等肿瘤中有明显的抑制作用。此外mic... 详细信息

大量研究表明,microrna作为一种重要的转录后基因调控元件,在多种疾病尤其是肿瘤的发生发展中发挥重要作用。microrna126被认为是一种肿瘤抑制因子,在多种肿瘤如胃癌、结肠癌、肺癌、宫颈癌以及乳腺癌等肿瘤中有明显的抑制作用。此外microrna126在其他疾病如哮喘、血管炎症等也有着重要作用。本文对microrna126的最新研究进展作一综述。

关键词： microrna126 胃癌结肠癌肺癌乳腺癌转移哮喘血管炎症

Negative Association of Circulating microrna-126 with High-sensitive C-reactive Protein and Vascular Cell Adhesion Molecule-1 in Patients with Coronary Artery Disease Following Percutaneous Coronary Intervention

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Chinese Medical Journal 2016年第23期129卷 2786-2791页

作者： Jun-Nan Wang You-You Yan Zi-Yuan Guo Ya-Juan Jiang Lu-Lu Liu Bin Liu Department of Cardiology The Second Hospital of Jilin University Changchun Jilin 130041 China

Background： Percutaneous coronary intervention （PCI） causes endothelial damage, resulting in an inflammatory response with elevation of markers such as high-sensitive C-reactive protein （hs-CRP） and vascular cell adhesion molecule-1（VCAM-1）, which are associated with restenosis after PCI. Evidence suggests that microrna-126 （miR-126） plays an important role in vascular inflammation, but its correlation with PCl-mediated inflammation has not been investigated. In this study, we investigated the effect of PCI on circulating miR-126 and inflammation markers such as hs-CRP and VCAM-1. Methods： We enrolled 130 patients with coronary artery disease （CAD） in the Second Hospital of Jilin University from October 2015 to December 2015. Among them, 82 patients with CAD, defined as at least one major epicardial vessel with 〉70% stenosis who planned to undergo PCI, were divided into acute coronary syndrome （ACS） group （46 patients） and stable angina （SA） group （36 patients）. Forty-eight patients confirmed by coronary angiography without PCI were used as controls. The plasmas of all patients were collected prior to PCI and at 30 min, 24 h, and 72 h after PCI. The plasma VCAM-1 and hs-CRP were detected by enzyme-linked immunosorbent assay, and the miR-126 was evaluated by quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction. Results： Plasma concentrations of hs-CRP and VCAM-I in patients with either ACS （n = 46） or SA （n = 36） were significantly higher than in controls （n = 48）（P 〈 0.01） prior to PCI, and increased further at 24 h and 72 h after PCI, compared with prior PCI. Moreover, VCAM-1 was positively correlated with balloon time and pressure. In contrast, the plasma concentration of miR-126 was significantly lower in patients with CAD than in controls, and further decreased with time post-PCl. A negative correlation was observed between miR-126 and hs-CRP and VCAM-1 at 72 h after PCI. Conclusion： There was a negative correlation of miR-126 with the PCI-induced marke

关键词： High-sensitivity C-reactive Protein microrna126 Percutaneous Coronary Intervention Vascular Cell Adhesion Molecule- 1

基于miR126/VCAM-1通路的肾衰泄浊汤干预CKD AS机制研究

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时珍国医国药 2024年第5期35卷 1138-1141页

作者：刘庚鑫张格第郭敏袁文萋罗富里晏子友江西中医药大学江西南昌330004 江西中医药大学附属医院江西南昌330000

目的观察肾衰泄浊汤对CKD As大鼠microrna126/VCAM-1通路的调控,探讨肾衰泄浊汤干预CKD As的作用机制。方法将48只大鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,氯沙坦组,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组,除假手术组外其余各组通过5/6肾切除同时... 详细信息

目的观察肾衰泄浊汤对CKD As大鼠microrna126/VCAM-1通路的调控,探讨肾衰泄浊汤干预CKD As的作用机制。方法将48只大鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,氯沙坦组,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组,除假手术组外其余各组通过5/6肾切除同时予高脂饮食复制CKD As大鼠动物模型。氯沙坦组给予氯沙坦钾片混悬液20mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组分别给予6.0g·kg^(-1)·d^(-1)、12.0g·kg^(-1)·d^(-1)、24.0g·kg^(-1)·d^(-1)中药汤液灌胃,假手术组与模型组给予等体积生理盐水灌胃,持续8周后处死取材。观察记录大鼠体重及精神状态;全自动生化分析仪器检测大鼠肾功能(Scr、BUN)、血脂(TC、TG)水平;HE、Masson染色法进行主动脉组织病理学观察;RT-PCR测定miRNA126 mRNA表达水平;Western Blot法检测血管细胞黏附因子(VCAM-1)蛋白表达水平。结果与假手术组相比,CKD As模型大鼠术后2周体重减轻明显(P126 mRNA表达下降,(P126 mRNA表达水平较模型组上升(P126/VCAM1参与CKD As病理损害过程,肾衰泄浊汤可通过调控miRNA126/VCAM1表达,减轻炎性反应,延缓CKD As进展。

关键词：肾衰泄浊汤慢性肾脏病动脉粥样硬化 microrna126