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Akt2抑制剂促进大鼠根尖周炎症微环境中巨噬细胞的极化:基于降低mir-155-5p的表达

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南方医科大学学报 2023年第4期43卷 568-576页

作者：李敬怡杨思圆韩振江天乐朱耀周子航周静萍皖南医学院口腔医学院//皖南医学院口腔疾病研究中心安徽芜湖241000

目的通过构建大鼠慢性根尖周炎模型,探讨Akt2抑制剂对根尖周组织巨噬细胞极化的影响及其相关因素。方法随机选取32只健康SD大鼠,其中28只作为实验组,通过髓腔开放法建立大鼠根尖周炎模型,在模型构建过程中分别在下颌第一磨牙左右侧髓腔... 详细信息

目的通过构建大鼠慢性根尖周炎模型,探讨Akt2抑制剂对根尖周组织巨噬细胞极化的影响及其相关因素。方法随机选取32只健康SD大鼠,其中28只作为实验组,通过髓腔开放法建立大鼠根尖周炎模型,在模型构建过程中分别在下颌第一磨牙左右侧髓腔内注射生理盐水和Akt2抑制剂。另外4只为健康对照组,不做任何处理。于开髓后第7、14、21、28天随机处死7只实验组和1只健康对照组大鼠后,分离下颌骨获取样本。X线和苏木精-伊红(HE)染色观察根尖周组织炎症浸润情况;免疫组织化学(IHC)染色观察Akt2、巨噬细胞及炎症介质的表达与定位,逆转录-聚合酶链反应(RT-pCR)观察Akt2、CD86、CD163、炎症介质(IL-6、IL-10)、mir-155-5p及C/EBpβ的mRNA表达,分析对巨噬细胞极化的影响。结果X线和苏木精-伊红染色结果显示:髓腔开放21 d后大鼠根尖周表现明显的慢性炎症,确认慢性大鼠根尖周炎模型构建成功。IHC染色和RT-pCR结果表明:与健康对照组相比,髓腔开放21 d后实验组大鼠根尖周炎组织中Akt2、CD86、CD163、mir-155-5p、C/EBpβ、及IL-10表达显著增高(p5),与生理盐水组相比,Akt2抑制剂组大鼠根尖周组织中Akt2、CD86、mir-155-5p和IL-6的表达水平以及CD86+M1型/CD163+M2型巨噬细胞比值显著降低(p5),而CD163、C/EBpβ和IL-10的表达水平明显增高(p5)。结论抑制Akt2可减缓大鼠根尖周炎症进展,促进大鼠根尖周炎症微环境中巨噬细胞向M2型极化;Akt2抑制剂可能通过降低mir-155-5p表达,激活Akt信号通路中转录因子C/EBpβ的表达,从而影响巨噬细胞极化。

关键词：根尖周炎 Akt2 巨噬细胞极化 mir-155-5p C/EBpβ

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脂多糖刺激巨噬细胞分泌含mir-155-5p的外泌体促进肝星状细胞的活化及迁移

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南方医科大学学报 2023年第6期43卷 994-1001页

作者：林嘉宜娄安妮李旭南方医科大学南方医院急诊科广东广州510515 海南医学院急救与创伤研究教育部重点实验室海南海口571199

目的探索脂多糖(LpS)刺激下的巨噬细胞来源的外泌体对肝星状细胞的激活及迁移能力的影响及分子机制。方法以100 ng/mL丙二醇甲醚醋酸(pMA)处理人THp-1巨噬细胞24 h,诱导其分化为巨噬细胞,给予脂多糖刺激后收集巨噬细胞的培养上清,运用... 详细信息

目的探索脂多糖(LpS)刺激下的巨噬细胞来源的外泌体对肝星状细胞的激活及迁移能力的影响及分子机制。方法以100 ng/mL丙二醇甲醚醋酸(pMA)处理人THp-1巨噬细胞24 h,诱导其分化为巨噬细胞,给予脂多糖刺激后收集巨噬细胞的培养上清,运用超速离心法提取外泌体并加以鉴定。荧光定量pCR(qRT-pCR)检测外泌体中mir-155-5p的表达。采用Transwell共培养体系观察巨噬细胞分泌的外泌体对肝星状细胞LX2增殖、氧化应激、迁移和I型胶原等纤维化标志物表达的影响。同时,LX2转染mir-155-5p-mimics及mir-155-5p-inhibitors分别过表达和干扰mir-155-5p,从正反两方面去验证mir-155-5p对LX2功能的影响。Western blot检测SOCS1以及其下游信号通路蛋白的表达。结果与对照相比,经脂多糖刺激后巨噬细胞的外泌体处理的LX2细胞增殖迁移能力增强,氧化应激水平和I型胶原等纤维化标志物的表达明显增高(p5)。巨噬细胞经脂多糖处理后分泌的外泌体中mir-155-5p的表达显著增高(pmir-155-5p过表达的LX2中增殖和迁移能力增强,氧化应激水平和I型胶原等纤维化标志物的表达明显增高(p5);而干扰mir-155-5p表达发挥相反的作用。进一步研究表明mir-155-5p抑制SOCS1的表达,促进p-Smad2/3、Smad 2/3和RhoA蛋白表达(p5)。结论脂多糖刺激下巨噬细胞来源的外泌体mir-155-5p促进肝星状细胞的活化、迁移、氧化应激及胶原生成。

关键词：脂多糖巨噬细胞外泌体 mir-155-5p 肝星状细胞肝纤维化

mir-155-5p靶向下调SOCS1减轻脂多糖诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞炎症损伤

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第3期39卷 220-229页

作者：周海燕周俐红张彩霞周立韩玉华新乡市中心医院(新乡医学院第四临床学院)神经内二科河南新乡453000 新乡医学院人体解剖学教研室河南新乡453000

目的探讨微小RNA-155-5p(mir-155-5p)对脂多糖(LpS)诱导SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经炎症损伤的影响。方法采用人SH-SY5Y细胞,设立mir-155-5p过表达及其阴性对照(mir-155-5p mimic组、mimic-NC组)和mir-155-5p低表达及其阴性对照(mir-155-5p inhibitor组、inhibitor-NC组),将LpS处理上述各组转染成功细胞24 h,并设置未转染SH-SY5Y细胞的对照组和LpS处理组(LpS组)。噻唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录pCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10 mRNA水平和mir-155-5p表达,Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、磷酸化核因子κB p65/核因子κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MApK/p38 MApK)蛋白水平。采用mir-155-5p模拟物(mir-155-5p mimic)、mir-155-5p抑制物(mir-155-5p inhibitor)调节SH-SY5Y细胞mir-155-5p表达,生物信息学预测mir-155-5p与细胞因子信号传送阻抑物1(SOCS1)靶向关系并进行荧光素酶实验验证。构建mir-155-5p与SOCS1均下调的SH-SY5Y细胞(mir-155-5p inhibitor/si-SOCS1组),采用上述方法检测细胞活性、细胞凋亡、炎性细胞因子mRNA表达以及SOCS1蛋白表达和p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MApK/p38 MApK比值。结果与对照组相比,LpS组SH-SY5Y细胞活性、Bcl2蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达降低,细胞凋亡率、c-caspase-3和BAX蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平升高,mir-155-5p表达量和p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38 MApK/p38 MApK比值升高。与LpS组相比,mir-155-5p inhibitor组SH-SY5Y细胞活性、Bcl2蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达升高,mir-155-5p表达量、细胞凋亡率、c-caspase-3和BAX蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MApK/p38 MApK比值降低。与LpS组相比,mir-155-5p mimic组SH-SY5Y细胞活性、Bcl2蛋白表达、IL-10 mRNA水平、SOCS1蛋白表达降低,mir-155-5p表达量、细胞凋亡率、c-caspase-3和BAX蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MApK/p38 MApK比值增加。mir-155-5p与SOCS1具有靶向关系,与mir-155-5p inhibitor组相比,mir-155-5p inhibitor/si-SOCS1组细胞活性、IL-10 mRNA水平降低,细胞凋亡率、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MApK/p38 MApK比值、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平升高。结论抑制mir-155-5p表达可减轻LpS诱导的神经炎症损伤,可能与靶向下调SOCS1表达有关。

关键词：神经炎症损伤炎症 SH-SY5Y细胞 mir-155-5p 细胞因子信号传送阻抑物1(SOCS1) 细胞活力细胞凋亡炎症因子

mir-155-5p在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响

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中国妇产科临床杂志 2019年第1期20卷 13-15页

作者：曾庆谢莺张庆华华中科技大学同济医院附属武汉中心医院 430014

目的探讨mir-155-5p在宫颈癌组织中的表达,以及其对宫颈癌细胞侵袭和迁移的影响。方法检测正常宫颈组织中mir-155-5p和宫颈癌组织的表达水平,采用荧光实时定量pCR方法检测;通过向宫颈癌细胞Hela细胞系中转染mir-155-5p mimic和inhibito... 详细信息

目的探讨mir-155-5p在宫颈癌组织中的表达,以及其对宫颈癌细胞侵袭和迁移的影响。方法检测正常宫颈组织中mir-155-5p和宫颈癌组织的表达水平,采用荧光实时定量pCR方法检测;通过向宫颈癌细胞Hela细胞系中转染mir-155-5p mimic和inhibitor干扰内源mir-155-5p的表达,采用CCK-8法检测各组宫颈癌细胞增殖能力的变化,应用Transwell小室实验检测各组Hela细胞体外侵袭能力的差异,以及划痕实验对Hela细胞迁移能力进行评估。结果相比于正常组宫颈组织,宫颈癌组织中mir-155-5p的表达显著升高,相比于正常组差异有统计学意义(p 5);Hela细胞体外转染实验结果发现,降低细胞内源mir-155-5p的表达,细胞的增殖活性、侵袭以及转移能力会被抑制,而提高内源mir-155-5p的表达,细胞的增殖活性、侵袭以及转移能力会显著提高,相比于对照组差异有统计学意义(p 5)。结论 mir-155-5p在宫颈癌组织中高表达,其可能通过提高宫颈癌细胞的增殖活性、侵袭与迁移能力在宫颈癌的发生发展过程中起着重要的生理功能。

关键词：宫颈癌 mir-155-5p 作用机制

mir-155-5p在食管鳞癌中的表达及其功能

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医学研究生学报 2016年第3期29卷 252-256页

作者：姜志标王洪斌曹子昂南方医科大学附属上海奉贤区中心医院心胸外科上海医学硕士研究生201499 上海仁济医院心胸外科上海200127

目的 mirNA在癌症的发生、转移、侵袭、血管生成等方面起着重要的调控作用。文中通过检测mir-155-5p在食管鳞癌中的表达,研究其在食管鳞癌发生、发展中的功能。方法收集上海仁济医院及奉贤区中心医院胸外科手术的20例食管鳞癌组织及其... 详细信息

目的 mirNA在癌症的发生、转移、侵袭、血管生成等方面起着重要的调控作用。文中通过检测mir-155-5p在食管鳞癌中的表达,研究其在食管鳞癌发生、发展中的功能。方法收集上海仁济医院及奉贤区中心医院胸外科手术的20例食管鳞癌组织及其距病变部位5 cm以上的正常组织,采用实时荧光定量q pCR法检测20对癌组织和相应癌旁组织中mir-155-5p的表达差异。将合成的mir-155-5p类似转染物、抑制剂及阴性对照质粒瞬时转染食管鳞癌细胞Eca109中,利用CCK8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,利用细胞划痕实验检测细胞迁移。结果食管鳞癌组织中mir-155-5p表达明显高于相应癌旁组织,差异有统计学意义(529.42%vs 100%,p5)。划痕实验表明,过表达mir-155-5p时,食管鳞癌细胞的迁移能力增强。类似转染物转染的细胞凋亡率[(5.43±3.09)%]较抑制剂[(5.28±1.98)%]及阴性对照[(5.67±1.99)%]差异均无统计学意义(p>0.05)。结论 mir-155-5p在食管鳞癌组织中的表达明显上调,具有食管鳞癌早期诊断的潜在价值;上调mir-155-5p的表达对Eca109增殖和凋亡未见明显影响,但显著促进了Eca109细胞的迁移,提示mir-155-5p的表达变化可能与食管鳞癌早期转移有关。

关键词：食管鳞癌 mir-155-5p Eca109 增殖凋亡迁移

lncRNA-CASC2/mir-155-5p/ApC分子轴调控非霍奇金淋巴瘤发展进程的分子机制

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中国实验血液学杂志 2020年第6期28卷 1939-1945页

作者：郑春娇吴智明王彦双侯云修海南医学院第二附属医院检验科海南海口570311

目的:探讨lncRNA-CASC2(CASC2)/mir-155-5p/ApC分子轴对非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgikn lymphoma,NHL)发展进程的影响。方法:qRT-pCR检测CASC2和mir-155-5p在NHL细胞系中的表达;双荧光素酶基因报告验证mir-155-5p与CASC2和ApC之间的靶向关系;MTT、Transwell和流式细胞术检测CASC2/mir-155-5p/ApC分子轴对NK-92细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果:CASC2在NHL细胞系中低表达,过表达CASC显著抑制NK-92细胞增殖和侵袭,促进NK-92细胞凋亡;双荧光素酶基因报告验证显示mir-155-5p与CASC2和ApC之间均具有靶向关系;回复实验证实,同时敲降mir-155-5p和CASC2或ApC能够恢复敲降mir-155-5p对NK-92细胞生物学行为的抑制作用。结论:过表达CASC2能够抑制NK-92细胞增殖、侵袭和诱导凋亡,其机制可能是通过靶向mir-155-5p,上调ApC的表达。

关键词： lncRNA-CASC2 mir-155-5p 腺瘤性大肠肝菌非霍奇金淋巴瘤增殖侵袭

mir-155-5p通过下调SOX4抑制胃癌细胞增殖和侵袭机制

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世界华人消化杂志 2016年第23期24卷 3476-3481页

作者：庄伟武警浙江省总队嘉兴医院消化科浙江省嘉兴市314000

目的:探究mi R-155-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的机制.方法:采用实时定量pCR检测胃癌中mi R-155-5p的表达.采用m i m i c s-m i R-155-5p转染胃癌细胞,然后利用荧光素酶检测和Western blot检测mi R-155-5p在胃癌细胞的增殖和侵袭.结果:mi... 详细信息

目的:探究mi R-155-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的机制.方法:采用实时定量pCR检测胃癌中mi R-155-5p的表达.采用m i m i c s-m i R-155-5p转染胃癌细胞,然后利用荧光素酶检测和Western blot检测mi R-155-5p在胃癌细胞的增殖和侵袭.结果:mi R-155-5p在胃癌细胞中比正常组细胞显著下调(p5).体外过表达mi R-155-5p,可抑制胃癌细胞的增殖和侵袭,反之,下调mi R-155-5p促进胃癌细胞增殖和侵袭.SOX4与mi R-155-5p表达负相关,下调SOX4较未处理组胃癌细胞增殖侵袭受到抑制(p5).结论:mi R-155-5p可能通过下调SOX4抑制胃癌细胞的增殖和侵袭.mi R-155-5p可能在将来作为GC治疗的潜在治疗靶点.

关键词：胃癌 mir-155-5p 性别决定区高迁移率族蛋白4 增殖侵袭

mir-155-5p靶向IKBKE在THp-1细胞抗新生隐球菌免疫反应中的机制研究

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miR-155-5p靶向IKBKE在THP-1细胞抗新生隐球菌免疫反应中的机制研...

作者：王一霖中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

新生隐球菌是一种环境致病菌,可以感染人类和许多哺乳动物的肺部、皮肤黏膜、肝脏、骨骼等全身器官,但最常侵犯中枢神经系统,引起具有致死性威胁的隐球菌性脑膜炎。据估计,仅2014年就新增223100隐球菌性脑膜炎病例,其中73%发生在非洲[1... 详细信息

新生隐球菌是一种环境致病菌,可以感染人类和许多哺乳动物的肺部、皮肤黏膜、肝脏、骨骼等全身器官,但最常侵犯中枢神经系统,引起具有致死性威胁的隐球菌性脑膜炎。据估计,仅2014年就新增223100隐球菌性脑膜炎病例,其中73%发生在非洲[1]。与欧美、非洲等地区隐球菌性脑膜炎主要发生在AIDS人群不同的是,我国主要发生无已知免疫功能缺陷看似免疫功能正常的人群,但该人群相比免疫功能缺陷的病人治疗周期更长,更困难,给病人和社会带来的经济负担更重[2]。隐球菌性脑膜炎患者如不及时治疗,86%的人在一年内死亡,即使现代充分治疗的情况下,死亡率仍有20%-30%左右[3]。因此,如何有效防治新生隐球菌中枢神经系统感染,是我们目前急需解决的问题。THp-1细胞(人单核巨噬细胞)是人体固有免疫系统的重要组成部分,在外界因素刺激下可被激活为经典激活巨噬细胞(M1型)和替代激活巨噬细胞(M2型):M1型细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)等炎症因子,具有很强的杀菌作用;M2型巨噬细胞分泌转化生长因子-β(TGF-β)、精氨酸酶1(Arg1)、白细胞介素-10(IL-10)等炎症因子,可抑制炎症反应[4]。在新生隐球菌性脑膜炎患者中,M1型细胞有助于清除病原体,而M2型细胞介导免疫逃逸[5],因此促进THp-1细胞向M1型极化有助于治疗隐球菌性脑膜炎。Micro RNA(mirNA)是一类长度约为20～24 nt非编码小RNA分子,主要在转录后水平调节靶基因表达,参与细胞分化、信号转导、免疫应答、肿瘤发生等多种生命活动。mir-155-5p位于人类21号染色体上B-cell Integration Cluster(bic)基因的第三个外显子内,可通过靶向降解目的基因m RNA发挥其功能作用。有研究发现其在人肺癌、甲状腺癌、宫颈癌、胰腺癌等实体瘤中高表达,与肿瘤细胞的增殖分化相关[6];另有研究表明mir-155-5p参与免疫细胞的发育分化,在活化的巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞和树突状细胞中表达明显增加,并在免疫应答中发挥着重要的作用[7]。IKBKE是一种编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的基因,是IκB激酶家族(IKKs)家族新近发现的成员,可参与肿瘤发生发展和免疫细胞的活化、增殖、分化及凋亡[8]。有研究发现其可通过调节核转录因子-κB(NF-κB)信号转导途径,在固有免疫系统中发挥重要作用[9]。通过前期mirnada网站预测,我们发现mir-155-5p和IKBKE基因有结合位点,而mir-155-5p和IKBKE基因均参与细胞炎症反应,因此我们猜测mir-155-5p通过靶向降解IKBKE m RNA在THp-1细胞抗新生隐球菌免疫反应中发挥着作用。一、新生隐球菌诱导THp-1细胞后mir155-5p、IKBKE、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达变化更换细胞液,调整好THp-1细胞的生长状态,加入pMA将细胞分化为巨噬细胞,用灭活的新生隐球菌按照数量5:1加入细胞培养瓶中,分别干预0h、3h、6h、9h、12h,取各自时间点的上清和细胞,保存于-80℃冰箱。将上清解冻,用酶联免疫吸附法(Elisa)测定上清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;用Trizol法提取细胞RNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(q pCR)测定mir155-5p和IKBKE的表达倍数变化。我们研究发现在新生隐球菌干预下,THp-1细胞中mir-155-5p表达增加,其中在6h达到峰值,IKBKE含量降低,在3h、6h、9h有统计学差异,TNF-α、IL-1β和IL-6的表达量随时间明显增加。二、双荧光素酶报告系统验证mir-155-5p和IKBKE的靶向关系根据mirnada网站预测结果,mir-155-5p可靶向降解IKBKE m RNA,为了进一步验证该靶向关系,我们进行了双荧光素酶报告实验:将实验分为6组,分别是海肾荧光素酶(p RL)质粒+mimics NC、p RL质粒+mir-155-5p、p RL质粒+IKBKE 3'UTR+mimics NC、p RL质粒+IKBKE 3'UTR+mir-155-5p、p RL质粒+IKBKE 3'UTRmut+mimics NC、p RL质粒+IKBKE 3'UTR-mut+mimics NC。将生长良好的细胞分入24-well培养板培养,根据分组转染质粒。24h后使用荧光显微镜观察目的荧光标记基因的表达情况,然后使用“Dual-Luciferase?Reporter Assay System(E1910,promega)”试剂盒处理细胞、进行荧光素酶表达检测。我们研究发现实验组较对照组荧光值降低了30%,表明mir-155-5p可靶向降解IKBK

关键词：新生隐球菌 THp-1细胞 mir-155-5p IKBKE 免疫反应

mir-155-5p/QKI5在糖尿病小鼠心肌纤维化中的作用

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miR-155-5p/QKI5在糖尿病小鼠心肌纤维化中的作用

作者：周子默湖北科技学院

学位级别：硕士

目的:明确mi R-155-5p及RNA结合蛋白QKI5在糖尿病心肌中的表达水平变化,探讨mi R-155-5p/QKI5在糖尿病心肌纤维化中作用,为解析糖尿病心肌病发病机制提供新的理论基础。方法:(1)生物信息学分析:GEO数据库中查找到了糖尿病心衰病人心肌... 详细信息

目的:明确mi R-155-5p及RNA结合蛋白QKI5在糖尿病心肌中的表达水平变化,探讨mi R-155-5p/QKI5在糖尿病心肌纤维化中作用,为解析糖尿病心肌病发病机制提供新的理论基础。方法:(1)生物信息学分析:GEO数据库中查找到了糖尿病心衰病人心肌组织样本中micro RNA表达谱数据,下载相关数据并分析mi R-155在糖尿病心衰病人心肌中的表达差异;通过Target Scan7.2、mi RDB在线数据库预测人源和鼠源mi R-155的下游靶点,选取两个数据库的交集靶基因,行GO富集分析(2)体外实验:(1)选取MCFs作为体外实验的细胞器,将细胞进行分组,分别为Vector,Vector+HG,QKI5,QKI5+HG;NC,NC+HG,si QKI5,si QKI5+HG,向MCFs中分别细胞转染过表达质粒载体QKI5(2 ug)和si QKI5(10 n M),24h后给予高糖(35 m M),再放入培养箱24 h做后续实验处理。Western blot检测CollagenⅠ,CollagenⅢ,QKI5,α-SMA等相关蛋白水平的变化,q RT-pCR检测转染过表达QKI5后的CollagenⅠ,α-SMA的m RNA水平的变化。(2)如前者一样,将细胞进行分组,为NC,NC+HG,Mimic,Mimic+HG,Inh,Inh+HG,再分别向MCFs进行细胞转染mi R-155-5p mimic和mi R-155-5p inhibitor,24 h后给予高糖,再放入培养箱培养继续24 h,然后留作后续实验。Western blot检测相关蛋白如CollagenⅠ,CollagenⅢ,QKI5,α-SMA等蛋白水平变化。最后Ed U免疫荧光检测质粒过表达QKI5和mi R-155-5p inhibitor对细胞增殖的影响。(3)体内实验:选取小鼠C57BL/6,糖尿病模型组(DM,n=20)高糖高脂饮食4周后,单剂量一次性STZ(100 mg·kg)腹腔注射,随机血糖高于16.7 mg·L确定为糖尿病模型成功,正常对照组(Con,n=10)采用正常饮食,等剂量柠檬酸盐缓冲液腹腔注射,成模10周后,用1%戊巴比妥钠(80 mg·kg)麻醉,开胸取心脏,生理盐水灌注,所取的心脏组织在滤纸上吸水之后,放置于-80℃冰箱,用于后续实验。HE染色和天狼猩红染色观察糖尿病心肌组织病理变化,q RT-pCR检测糖尿病小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ,QKI5,α-SMA m RNA表达水平。Western blot检测糖尿病心肌组织中的QKI5的表达水平的变化以及纤维化相关标志物CollagenⅠ,CollagenⅢ,α-SMA的表达水平的变化。结果:(1)生物信息学分析:非编码RNA表达谱(GSE26887)分析显示,在糖尿病心肌病中,心脏mi R-155相较于正常组显著上调。micro RNA靶点预测软件显示mi R-155的下游靶基因交集有195个,发现了QKI5也在下游靶点中,并且因此作为mi R-155的下游靶基因的研究对象。GO富集分析显示了QKI5在生物体内的生物过程。(2)体外实验:(1)在转染进入细胞的过表达QKI5和si QKI5后,与对照组相比,Western blot检测出CollagenⅠ,CollagenⅢ,α-SMA在高糖诱导下都有升高,当有过表达QKI5干预时,CollagenⅠ,CollagenⅢ的表达显著下调,当沉默了QKI5表达时,上述蛋白表达水平均明显上调,而RNA结合蛋白QKI5在高糖干预下,表达大大下降;与高糖组相比,当过表达QKI5和高糖同时存在时,CollagenⅠ表达水平明显下调。q RT-pCR结果表明,在高糖诱导下,CollagenⅠ和α-SMA的m RNA含量都显著增加。(2)在对细胞进行分别瞬时转染mi R-155-5p mimic和mi R-155-5p inhibitor后,与对照组相比,Western blot检测出CollagenⅠ,CollagenⅢ,α-SMA在高糖诱导下表达上升,当有mi R-155-5p mimic转入后,CollagenⅠ,CollagenⅢ,α-SMA蛋白表达直线大幅增加;与高糖组相比,当有mi R-155-5p mimic和高糖同时存在时,CollagenⅠ较高糖组表达更有所提高;而QKI5相对于对照组在mi R-155-5p mimic存在下表达水平则大幅下降,当有mi R-155-5p mimic和高糖同时存在时,则相较于高糖组表达水平下降的更为厉害。在转入mi R-155-5p inhibitor后,CollagenⅠ的表达水平有所下调,而QKI5表达水平上调,CollagenⅢ,α-SMA表达水平则

关键词：糖尿病心肌病心肌纤维化 QKI5 mir-155-5p