检索结果-南通市图书馆

作者：孟卓南京中医药大学

学位级别：硕士

背景:帕金森病（parkinson’s disease,pD）是一种以黑质致密部（substantia nigra pars compacta,SNc）多巴胺能神经元进行性丧失为特征的全球第二大神经退行性疾病。多巴胺能神经元的凋亡会导致脑内合成的多巴胺大量减少,从而致使机... 详细信息

背景:帕金森病（parkinson’s disease,pD）是一种以黑质致密部（substantia nigra pars compacta,SNc）多巴胺能神经元进行性丧失为特征的全球第二大神经退行性疾病。多巴胺能神经元的凋亡会导致脑内合成的多巴胺大量减少,从而致使机体出现一系列的运动和非运动障碍,对患者的生活质量造成严重影响。芳香族L-氨基酸脱羧酶（Dopa decarboxylase,DDC）作为多巴胺合成过程中重要的限速酶,在pD的发病和治疗中起着尤为重要的作用。目的:通过建立1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶/丙磺舒（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine/probenecid,mptp/p）诱导的进行性帕金森病小鼠模型,探究、验证DDC在进行性pD模型小鼠中脑黑质中的动态表达变化,从而更加全面的了解帕金森病的致病机制,探索出临床诊断和治疗帕金森病更加快捷高效的方法。方法:1.选用12周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机分为对照组和mptp/p模型组,mptp/p模型组小鼠按照100mg/kg的剂量腹腔注射丙磺舒溶液,半小时后按照25mg/kg的剂量腹腔注射mptp,每3.5天注射一次,连续注射10次;对照组腹腔注射等体积的生理盐水。在造模过程中,我们选取造模前、造模第3、6、10次四个时间点分别对两组小鼠进行行为学检测（嗅觉和平衡木贯穿实验）,用以评价小鼠的运动与非运动功能变化。同时,利用Western blot检测两组小鼠黑质中TH蛋白的表达量变化,评估模型制备情况。2.根据实验前期对特定时间点（0、3、6、10次后）小鼠中脑黑质组织进行的转录组测序[1],我们利用生物信息学分析方法对模型组与对照组之间差异表达的基因（Differentially expressed genes,DEGs）进行趋势分析,筛选出在多巴胺合成与转运途径中起关键作用的DDC基因,结合其上下游差异基因的表达变化,GO和KEGG功能富集分析揭示DDC在pD模型中发挥作用的主要途径,并进一步利用STRING（https://***/）构建蛋白网络互作关系。最后我们基于已发表的小鼠黑质区单细胞转录组数据（DropViz,http://***/）,对这些基因所在的细胞群进行了定位。3.选取造模前、造模第3、6、10次4个时间点,分别获取对照组小鼠及mptp/p模型组小鼠的中脑黑质组织,利用qRT-pCR技术检测不同时间点DDC在黑质中mRNA的表达变化。利用免疫荧光双标检测不同时间点两组小鼠TH和DDC在中脑黑质中的定位及表达变化,采用免疫组织化学染色检测不同时间点两组小鼠DDC在纹状体中的动态表达变化。结果:1.通过行为学结果分析显示,随着造模次数的增加,小鼠非运动和运动症状,即嗅觉和平衡协调能力均逐渐降低,且在造模3、6、10次后pD小鼠行为学指标显著性下降（p＜0.05）。2.蛋白免疫印迹结果显示,随着造模次数的增加,TH蛋白的表达量呈现逐渐下降趋势,且在造模10次后出现显著性差异（p＜0.05）,上述结果均表明mptp/p诱导的进行性pD小鼠模型的成功建立。3.通过前期对小鼠中脑黑质测序结果中模型组与对照组之间差异表达的基因进一步挖掘,功能富集、蛋白互作网络分析发现,涉及多巴胺合成、转运、代谢相关的基因,如DDC、TH、DAT、VMAT2,表达变化趋势呈现先上调（造模3次）再逐渐下调（造模6、10次）。其中DDC作为多巴胺合成过程中重要的限速酶,与以上基因协同引起pD模型小鼠的神经退变过程。小鼠黑质区单细胞数据分析结果显示,Ddc主要分布在多巴胺能神经元中。4.通过qRT-pCR检测并验证pD模型小鼠中脑黑质中Ddc与正常组小鼠对比,在造模的6次和10次后出现了显著性的下降,该结果与前期测序结果基本一致。免疫荧光化学染色结果表明在黑质中DDC与TH主要表达于神经元的胞质和突起中,且二者之间存在共定位,在造模过程中,DDC与TH的阳性细胞数量均逐渐减少,且在造模的6次和10次后与对照组小鼠对比有显著性差异。5.免疫组织化学染色结果,表明在造模过程中,纹状体内DDC阳性信号逐渐减少,在造模的6次、10次后出现显著性差异。结论:1.建立了可靠的mptp/p诱导的进行性帕金森病小鼠模型。2.通过qRT-pCR、免疫荧光染色对pD模型小鼠中脑黑质的DDC、TH表达验证,与测序变化趋势结果相符;免疫荧光染色和单细胞数据显示,DDC在小鼠中脑黑质中主要分布于多巴胺神经元中。3.通过免疫组织化学进一步验证DDC在纹状体的表达随造模次数增加逐渐减少。其通过黑质-纹状体通路最终影响多巴胺的合成转运,导致运动功能受损,是出现pD样症状的关键因素。4.DDC通过影响中脑多巴胺的合成、转运、代谢,与TH、DAT、VMAT2等协同参与pD模型小鼠的神经退变过程。

关键词：帕金森病 mptp/p DDC 黑质

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mptp/p诱导的帕金森病小鼠模型的肠道微生物组学分析

MPTP/p诱导的帕金森病小鼠模型的肠道微生物组学分析

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作者：郑文霞南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景:帕金森病是一种常见的神经系统退行性疾病,在我国具有高患病率的特点。运动功能障碍是帕金森病的典型临床表现,但研究发现,帕金森病患者通常在运动症状之前出现非运动症状,例如胃肠功能障碍。目前的研究观察到帕金森病患者存... 详细信息

研究背景:帕金森病是一种常见的神经系统退行性疾病,在我国具有高患病率的特点。运动功能障碍是帕金森病的典型临床表现,但研究发现,帕金森病患者通常在运动症状之前出现非运动症状,例如胃肠功能障碍。目前的研究观察到帕金森病患者存在肠道微生物群组成的改变,因此提出了肠道微生物组的改变可能作为pD发病机理中最早的事件。同样,我们前期的临床研究也证实了 pD患者伴随着肠道微生物组紊乱。而且,我们已在前期工作中证实了 mptp/p诱导的pD小鼠模型存在显著的帕金森病理改变及明显的运动和非运动症状。本研究将在mptp/p诱导的pD小鼠模型中进一步探讨其肠道微生物组丰度的改变及与前期临床研究结果的比较,有助于深入地探明肠道微生物组作为pD的生物标志物及治疗靶点的临床价值,为基于使用益生菌、益生元甚至粪便微生物移植改善肠道微生物群的手段治疗pD或降低pD患病风险提供了依据。研究方法:1.mptp/p+丙磺舒方案进行pD模型构建。2.分组实验后通过病理切片免疫组化实验及Western blot分析中脑多巴胺能神经元含量,以及相应的蛋白表达水平变化。3.行为学检测分析各组小鼠行为学变化特点。4.收集各组小鼠粪便,并进行16s rRNA测序。5.统计分析:本研究中计量数据均采用两独立样本t检验分析;检验水准α=0.05,p＜0.05有统计学意义。对于高维度的微生物数据,我们采用Adonis检验进行分析。研究结果:1.pD模型构建后中脑病理切片和Western blot检测造模组酪氨酸羟化酶（Tyrosine Hydroxylase,TH）较对照组均降低,提示造模成功。2.行为学检测提示mptp/p组小鼠存在运动功能受损及焦虑行为改变。3.mptp/p组和Control组小鼠粪便标本中肠道微生物组的Chao 1指数、物种测定指数、谱系多样性进化树和香农指数未见显著性统计学差异（Wilcoxon秩和检验,p＞0.05）。4.mptp/p组和Control组小鼠粪便标本中肠道微生物组的聚类分析提示在门分类水平上群落结构相似,但部分细菌含量存在差异,大多数属于拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门以及放线菌门。在科水平上,普雷沃氏菌科、S24-7、拟杆菌科、棒状杆菌科、葡萄球菌科、瘤胃菌科、毛螺菌科、帕拉普雷沃氏菌科占了整个肠道微生物组的80%。5.mptp/p组小鼠肠道微生物组成与Control组具有统计学差异（p=0.021,Adonis检验,FDR校正）。其中,疣微菌科、YS2、苏黎世杆菌科、产碱杆菌科在mptp/p组的丰度显著升高。结论:本研究表明,mptp/p诱导的帕金森病小鼠模型可表现出持续的病理损伤和肠道微生物生态失调。而且,该模型理论上可用于评估pD中肠道病理学的进展,以及肠道病理学是否伴随着肠道微生物群组成改变,甚至探讨肠道微生物组在pD中的作用机制。

关键词： mptp/p 帕金森病肠道微生物组 16s rRNA测序

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天麻联苄化合物20C对mptp/p诱导帕金森病小鼠模型的作用及机制

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中国药物警戒 2020年第11期17卷 753-757,772页

作者：周甜甜张秋双陈颖朱承根石建功陈乃宏苑玉和中国医学科学院药物研究所北京100050

目的从病理、生化两方面研究天麻联苄化合物20C对帕金森病(parkinson’s disease,pD)小鼠模型的作用及机制。方法通过皮下注射丙磺舒、腹腔注射mptp制备1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,mptp)联合丙磺舒(probenecid)模型,诱导pD小鼠模型;通过HE染色和免疫组化的方法评价组织病理改变;通过Western blot方法检测蛋白水平变化。结果病理生化结果显示,20C可以减少mptp诱导的胃部硝基化α-突触核蛋白(nitrated-α-synuclein)。Western blot结果显示,20C可以降低mptp诱导的肠道Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)水平,降低磷酸化核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)p65(p-p65)水平,降低白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,减轻炎症反应。结论20C可以减少α-突触核蛋白聚集体和硝基化形式的生成,同时可以抑制TLR4-NF-κB p65通路,抑制p65的活化,减少IL-1β的生成,抑制炎症反应,对mptp/p诱导的pD小鼠发挥保护作用。

关键词：帕金森病 mptp/p 天麻联苄化合物20C α-突触核蛋白

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