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作者：彭丽河北医科大学

学位级别：硕士

目的：观察全反式维甲酸对哮喘大鼠mmp-9/timp-1平衡及TGF-β1的作用。在哮喘的发病过程中，多种细胞组分及细胞因子参与其中，而mmp-9/timp-1及TGF-β1在调节细胞外基质生成与降解、气道纤维化、气道血管重塑等方面均发挥重要作用，故... 详细信息

目的：观察全反式维甲酸对哮喘大鼠mmp-9/timp-1平衡及TGF-β1的作用。在哮喘的发病过程中，多种细胞组分及细胞因子参与其中，而mmp-9/timp-1及TGF-β1在调节细胞外基质生成与降解、气道纤维化、气道血管重塑等方面均发挥重要作用，故本实验通过测定肺组织中mmp-9、timp-1及TGF-β1水平，并用来反映气道重塑，探讨全反式维甲酸对支气管哮喘气道重塑的作用及其可能作用机制，为临床治疗哮喘寻找新的药物途径。方法：30只6周龄SPF级SD雄性大鼠，体重在100-120g之间，随机分成正常对照组、哮喘模型组、ATRA干预组，每组10只。哮喘模型组和ATRA干预组大鼠分别于实验第1、8天通过腹腔注射OVA100mg和氢氧化铝100mg（混于0.9%氯化钠溶液中）2ml进行致敏。第15天起将大鼠置于自制的非完全密闭的简易雾化箱中吸入OVA溶液进行激发试验，每次30分钟，隔日一次，共20次。OVA溶液浓度由1%、1.5%、2%、2.5%、3%依次递增，每4次后递增一次剂量。对照组以等量生理盐水替代OVA，方法同上。ATRA干预组在每次激发前30分钟给予剂量为20mg/kg ATRA生理盐水混悬液灌胃给药。在末次激发24小时后应用1%戊巴比妥钠进行麻醉、处死大鼠，取各组大鼠BALF、血清及肺组织。测定BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的数量，ELISA法检测血清中TGF-β1浓度，部分肺组织免疫组化定性分析mmp-9、timp-1水平，部分肺组织行苏木精—伊红染色，肺组织病理切片显微镜下放大200倍，应用计算机图像分析软件测定支气管管壁厚度（管壁面积/管壁内周长）、支气管平滑肌厚度。应用图像分析软件测定mmp-9、timp-1的相对表达强度。结果：1哮喘模型的观察：通过腹腔注射OVA致敏及反复雾化吸入激发的方式成功建立大鼠哮喘模型，于实验过程中可见哮喘大鼠烦躁不安、呼吸急促、口唇发绀、腹式呼吸、腹肌痉挛、站立不稳等表现。2肺泡灌洗液（BALF）细胞计数（106/L）及分类结果：哮喘组BALF中细胞总数（33.91±3.67）高于ATRA组（12.88±2.72），存在统计学意义（P＜0.01）;且两组均高于正常对照组（9.68±2.71），存在统计学意义（F=183.370，P＜0.01）。哮喘组BALF中嗜酸性粒细胞（5.38±0.63）高于ATRA组（2.19±0.53），存在统计学意义（P＜0.01）;且两组均高于正常对照组（1.17±0.48），存在统计学意义（F=160.003，P＜0.01）。哮喘组BALF中中性粒细胞（1.14±0.20）高于ATRA组（0.65±0.18），存在统计学意义（P＜0.01）;且两组均高于正常对照组（0.28±0.12），存在统计学意义（F=63.937，P＜0.01）。哮喘组BALF中的淋巴细胞（2.99±0.53）高于ATRA组（2.28±0.49），存在统计学意义（P＜0.01）;且两组均高于正常对照组（1.27±0.36），存在统计学意义（F=34.568，P＜0.01）。3病理图像分析结果：哮喘组大鼠气道壁厚度及平滑肌厚度分别为98.78±2.86、45.49±2.40，明显高于正常对照组70.87±1.80、17.68±1.14（P＜0.01，P＜0.01）;ATRA组分别为86.20±2.36、33.53±1.36较哮喘组有所降低，但仍高于正常对照组（P＜0.01），三组之间存在显著性差异（F=345.002，Pmmp-9、timp-1及二者比值结果：mmp-9：哮喘组（0.63±0.02）明显高于正常对照组（0.22±0.01）（P＜0.01），ATRA组（0.41±0.02）较哮喘组明显降低但仍高于正常对照组（0.22±0.01），三组之间存在显著性差异（F=1391.446，Ptimp-1：哮喘组（0.77±0.03）明显高于正常对照组（0.21±0.02）（P＜0.01），ATRA组（0.44±0.03）较哮喘组明显降低但仍高于正常对照组（0.21±0.02），三组之间存在显著性差异（F=1326.128，Pmmp-9/timp-1：哮喘组（0.82±0.01）明显低于正常对照组（1.05±0.02）（P＜0.01），ATRA组（0.92±0.01）较哮喘组有所升高，但仍低于正常对照组（1.05±0.02），三组之间存在显著性差异（F=527.533，P<0.01）。5ELISA法检测血清中TGF-β1含量（ng/ml）

关键词：哮喘全反式维甲酸 mmp-9/timp-1平衡转化生长因子β1

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补肾活血方对肾虚血瘀型子宫内膜增生症大鼠的作用及机制研究

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中药新药与临床药理 2024年第5期35卷 623-632页

作者：李颢玥王茜郝蕾河北中医药大学药学院河北石家庄050200 河北省中药资源利用与质量评价国际联合研究中心河北石家庄050091 河北省高校中药组方制剂应用技术研发中心河北石家庄050091

目的探讨补肾活血方(巴戟天、菟丝子、沙苑子、党参、茯苓等)对肾虚血瘀型子宫内膜增生症(Endometrial hyperplasia,EH)大鼠的作用及机制。方法将90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、米非司酮组(12 mg·kg^(-1))及补肾活血方低、中、高... 详细信息

目的探讨补肾活血方(巴戟天、菟丝子、沙苑子、党参、茯苓等)对肾虚血瘀型子宫内膜增生症(Endometrial hyperplasia,EH)大鼠的作用及机制。方法将90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、米非司酮组(12 mg·kg^(-1))及补肾活血方低、中、高剂量组(1.2、2.4、4.8 g·kg^(-1)),每组15只。采用灌胃羟基脲及戊酸雌二醇,联合尾静脉注射高分子右旋糖苷法复制肾虚血瘀型EH大鼠模型。造模成功后,各组按照设定剂量灌胃给药,每日1次,连续21 d。实验结束后,采用生化法检测各组大鼠血清环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)、皮质醇(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、三碘甲状腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、促甲状腺激素(TSH)的水平以及全血黏度、血液流变学、凝血功能等指标;ELISA法检测血清雌激素(E2)、卵泡雌激素(FSH)、黄体生成素(LH)、一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)的水平;HE染色法观察子宫内膜组织病理形态变化,并测量子宫内膜厚度;免疫组化法检测子宫内膜组织中基质金属蛋白酶9(mmp-9)、基质金属蛋白酶抑制物1(timp-1)蛋白表达水平;Western Blot法检测子宫内膜组织中mmp-9、timp-1、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因(PTEN)蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清CORT、ACTH、c AMP、T_(3)、T_(4)、TSH、ET-1水平及ET-1/NO比值均明显降低(Pmmp-9、Bcl-2蛋白表达显著上调(Ptimp-1、PTEN、Bax蛋白表达显著下调(Pmmp-9、Bcl-2蛋白表达显著下调(Ptimp-1、PTEN、Bax蛋白表达显著上调(Pmmp-9/timp-1平衡,上调Bax、PTEN表达,抑制Bcl-2表达有关。

关键词：补肾活血方子宫内膜增生症肾虚血瘀证 mmp-9/timp-1平衡 Bax Bcl-2 PTEN 大鼠

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