检索结果-南通市图书馆

作者：王梓童郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的胃癌(Gastric cancer,GC)是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一,在全球范围内,胃癌发病率排名第五,死亡率排名第四。胃癌的特点是发病隐匿,早期无症状或症状较轻微,导致大多数患者诊断延误,生存期较差。根治性手术是唯一可能... 详细信息

背景和目的胃癌(Gastric cancer,GC)是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一,在全球范围内,胃癌发病率排名第五,死亡率排名第四。胃癌的特点是发病隐匿,早期无症状或症状较轻微,导致大多数患者诊断延误,生存期较差。根治性手术是唯一可能治愈胃癌的治疗方式,但是约60%的患者手术切除后发生复发,导致患者的5年生存率仍然很差。因此,迫切需要低毒高效的新型化学预防药物以提高患者的治愈率并降低复发率。开发新的抗癌药物是一个昂贵和耗时的过程,需要大量的细胞和动物研究支持,并开展严格的临床研究以证实临床前的结果。越来越多的研究表明,在已有的药物中发现药物的新用途是一种有效的策略。本研究中,我们筛选了食品和药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准的药物库,前期研究发现马来酸替加色罗(Tegaserod maleate)明显抑制食管鳞癌细胞的增殖,我们课题组近期研究发现其在胃癌细胞中展现出更高的抑制活性。在此基础上,我们利用细胞增殖实验和克隆形成实验,检测马来酸替加色罗对胃癌细胞HGC27和AGS的增殖能力和克隆形成能力的影响。通过计算机分子对接模型以及下拉实验寻找马来酸替加色罗作用的靶点,并利用体外激酶实验证实马来酸替加色罗对靶点的调节作用。为了评估马来酸替加色罗在体内的抗肿瘤活性,我们构建胃癌患者来源的组织异种移植模型(Patient-derived xenograft,PDX)。本研究为马来酸替加色罗作为胃癌化学预防药物提供了理论支持。方法1.评价马来酸替加色罗在体外对胃癌细胞增殖的研究方法利用细胞毒性实验检测马来酸替加色罗对胃癌细胞HGC27和AGS的毒性作用;利用细胞增殖实验评估马来酸替加色罗对胃癌细胞HGC27和AGS增殖能力的影响;利用软琼脂克隆形成实验和平板克隆形成实验检测马来酸替加色罗对胃癌细胞HGC27和AGS非锚定依赖性生长以及锚定依赖性生长的影响。2.研究马来酸替加色罗与MEK1和mek2的结合的方法利用计算机分子对接模型预测马来酸替加色罗与MEK1和mek2激酶的结合情况;利用pull down实验验证马来酸替加色罗分别与外源性和内源性MEK1和mek2激酶的结合。利用细胞热位移测定实验检测马来酸替加色罗与MEK1和mek2结合后对蛋白稳定性的影响。3.评价马来酸替加色罗对MEK1和mek2激酶活性及下游分子的影响利用体外激酶实验检测马来酸替加色罗对MEK1和mek2激酶活性的影响;利用Western blotting实验检测马来酸替加色罗对MEK1和mek2下游分子表达情况的影响;利用免疫共沉淀实验检测马来酸替加色罗作用后,细胞内MEK1和mek2激酶对p-ERK1/2 T202/Y204激活情况的影响;利用免疫荧光实验评估马来酸替加色罗对p-ERK1/2 T202/Y204荧光表达水平的影响。4.评价MEK1和mek2对胃癌细胞增殖能力的影响的研究方法利用CRISPR/Cas9技术构建MEK1和mek2敲除的胃癌稳转细胞株,利用细胞增殖实验和平板克隆形成实验评估MEK1和mek2激酶对胃癌细胞增殖和克隆形成能力的影响;同时,检测MEK1和mek2敲除后,马来酸替加色罗对胃癌细胞的影响。5.评价马来酸替加色罗在体内对胃癌的生长抑制效果的研究方法通过构建胃癌患者来源的组织异种移植模型(Patient-derived xenograft,PDX),检测马来酸替加色罗在体内抑制胃癌生长的情况;利用免疫组织化学染色评估马来酸替加色罗对Ki-67表达情况的影响;利用Western blotting实验检测马来酸替加色罗对肿瘤组织中p-ERK1/2 T202/Y204蛋白水平的影响;选取已用于临床的MEK1/2抑制剂曲美替尼,通过比较马来酸替加色罗和曲美替尼对肿瘤的抑制效果及对Ki-67表达水平的影响,评估马来酸替加色罗用于临床的潜力。结果1.马来酸替加色罗在体外抑制胃癌细胞的增殖和克隆形成用50μM马来酸替加色罗处理时,马来酸替加色罗对胃癌细胞HGC27和AGS有明显的毒性作用;不同浓度的马来酸替加色罗(0、0.25、0.5、1和2μM)处理胃癌细胞HGC27和AGS,显著抑制胃癌细胞的增殖能力和克隆形成能力。2.马来酸替加色罗与MEK1和mek2结合并抑制其激酶活性计算机分子对接模拟结果显示,马来酸替加色罗与MEK1激酶的Asp208,Met146和Asp152位点结合,与mek2激酶的Gly81和Gly83位点结合;Pull down实验结果显示,马来酸替加色罗可分别与与重组MEK1和mek2蛋白,在293F中过表达的MEK1和mek2蛋白以及胃癌细胞裂解液中的MEK1和mek2蛋白结合;细胞热位移测定实验显示,马来酸替加色罗与MEK1和mek2蛋白结合后蛋白的稳定性更高。体外激酶实验结果显示,不同浓度的马来酸替加色罗抑制MEK1和mek2的激酶活性并且成浓度依赖性,

关键词：胃癌化学预防马来酸替加色罗 MEK1 mek2

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Oncoprotein HBXIP promotes tumorigenesis through MAPK/ERK pathway activation in non-small cell lung cancer

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Cancer Biology & Medicine 2021年第1期18卷 105-119页

作者： Jun Zhang Bei Sun Xianhui Ruan Xiukun Hou Jingtai Zhi Xiangrui Meng Xiangqian Zheng Ming Gao Department of Breast Cancer Key Laboratory of Breast Cancer Prevention and TherapyTianjin Medical University Cancer Institute and HospitalNational Clinical Research Center for CancerKey Laboratory of Cancer Prevention and TherapyTianjinTianjin’s Clinical Research Center for CancerTianjin 300060China Department of Outpatient Office Tianjin Medical University Cancer Institute and HospitalNational Clinical Research Center for CancerKey Laboratory of Cancer Prevention and TherapyTianjinTianjin’s Clinical Research Center for CancerTianjin 300060China Department of Thyroid and Neck Tumor Tianjin Medical University Cancer Institute and HospitalNational Clinical Research Center for CancerKey Laboratory of Cancer Prevention and TherapyTianjinTianjin’s Clinical Research Center for CancerTianjin 300060China Department of Lymphoma Tianjin Medical University Cancer Institute and HospitalNational Clinical Research Center for CancerKey Laboratory of Cancer Prevention and TherapyTianjinTianjin’s Clinical Research Center for CancerTianjin 300060China

Objective:The oncoprotein,hepatitis B X-interacting protein(HBXIP),has been reported to play an important role in human malignancies.However,its functions in non-small cell lung cancer(NSCLC)are poorly understood.The goal of the present study was to identify the role of HBXIP in the regulation of NSCLC development.Methods:The level of HBXIP expression in NSCLC tissue was assessed by immunohistochemical and Western blot analyses,and its relationships with clinicopathological features and outcomes were statistically evaluated.The effects of HBXIP on NSCLC cell progression were assessed through cell viability,colony formation,and flow cytometry analyses in vitro.The mechanism by which HBXIP regulated the MAPK pathway was studied by Western blot,immunofluorescence,and immunoprecipitation assays.In addition,in vivo experiments were performed to evaluate the progression of NSCLC and ERK signaling pathway activation after HBXIP knockdown.Results:HBXIP was overexpressed in human NSCLC and was correlated with the invasiveness of NSCLC.The high expression of HBXIP in NSCLC was significantly correlated with gender(P=0.033),N stage(P=0.002),and tumor-node-metastasis stage(P=0.008).In vitro experiments using an NSCLC cell line revealed that HBXIP knockdown resulted in the suppression of cell proliferation and colony formation,which was consistent with the enhanced cell cycle arrest in G1 phase.The results of a mechanistic investigation suggested that binding of HBXIP to MEK1 protein promoted MAPK/ERK signaling pathway activation in NSCLC by preventing the proteasome-mediated degradation of MEK1.In addition,the results obtained using in vivo subcutaneous tumor xenografts confirmed that HBXIP deficiency decreased MEK1 protein levels and NSCLC tumor growth.Conclusions:Taken together,our results showed that the HBXIP-mek interaction promoted oncogenesis via the MAPK/ERK pathway,which may serve as a novel therapeutic target for cancers in which MAPK/ERK signaling is a dominant feature.

关键词： HBXIP non-small cell lung cancer MEK1 tumor progression

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脱氢丙氨酸修饰导致MEK1异常激活的机制研究及现有抑制剂作用效果预测

脱氢丙氨酸修饰导致MEK1异常激活的机制研究及现有抑制剂作用效果...

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作者：赵悦吉林大学

学位级别：硕士

Mitogen-activated protein kinase kinase 1(MAPKK,MEK1)是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路中的关键激酶,其残基突变所致的蛋白异常激活与多种肿瘤的恶性生长和扩散密切相关,是黑色素瘤等相关癌症... 详细信息

Mitogen-activated protein kinase kinase 1(MAPKK,MEK1)是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路中的关键激酶,其残基突变所致的蛋白异常激活与多种肿瘤的恶性生长和扩散密切相关,是黑色素瘤等相关癌症治疗的重要靶标。以MEK1为靶点,目前已有四种FDA认证药物上市,这四种药物为Trametinib、Cobimetinib、Binimetinib和Selumetinib。最近的研究表明,脱氢丙氨酸(Dha)修饰同样可以导致MEK1的异常激活,具有促进肿瘤发生发展的潜在可能。在本论文工作中,我们使用计算生物学的方法,深入研究了Dha修饰对MEK1蛋白结构的影响,探究了Dha修饰导致的MEK1异常激活的机制,同时预测了现有FDA认证的MEK1抑制剂对Dha修饰导致的MEK1异常激活的抑制效果。首先,我们分别构建了野生型MEK1蛋白(非激活的MEK1蛋白)、磷酸化修饰的MEK1蛋白(正常激活的MEK1蛋白)和Dha修饰的MEK1蛋白(异常激活的MEK1蛋白),并分别进行了微秒级别的全原子分子动力学模拟(Molecular Dynamic Simulations,MD)。研究结果表明,与正常激活过程的构象变化类似,MEK1被Dha修饰后,其激活环向C端移动、催化口袋打开、活性位点暴露,这些结构变化导致MEK1异常激活。具体来讲,通过RMSF和豪猪图分析,发现Dha修饰促使MEK1的C-螺旋、Pro-rich区域和激活环的位置发生了较大幅度的位置和构象变化,这些变化导致MEK1的催化口袋打开、活性位点暴露。通过催化口袋体积的定量计算,进一步证实了催化口袋的变大,与观察到的结构变化一致。结构变化伴随了分子内部残基之间相互作用的变化,其中,氢键分析表明,激活环与Glu114、Glu233、Tyr240和Arg305之间氢键相互作用的增强对激活环的移动有重要贡献。随后,基于适温元动力学(Well-Tempered Metadynamics)增强采样模拟,我们得到了具有代表性的Dha修饰的MEK1蛋白结构,并对接了FDA认证的四种以MEK1为靶点的药物小分子。通过进一步的结构分析,发现Selumetinib抑制剂使Dha修饰的MEK1激活环解旋,导致其活性口袋关闭,从而抑制MEK1异常激活的催化活性;而Cobimetinib、Trametinib和Binimetinib对Dha修饰的MEK1蛋白的构象影响不大。另外,热点残基分析以及氢键分析表明,Thr226、Arg227、Phe209和Asp190对Selumetinib与Dha修饰的MEK1的结合有重要贡献。综上所述,本论文的工作发现Dha修饰导致的MEK1异常激活机制是由于激活环的移动使活性口袋打开,导致MEK1处于持续异常激活的状态。而Selumetinib抑制剂通过影响激活环的二级结构发生从α螺旋向loop的转变,封堵住活性口袋,抑制了Dha修饰的MEK1异常激活的活性。我们的研究将为揭示Dha修饰导致MEK1异常激活的机制提供帮助,也为相应抑制剂的开发提供线索。

关键词： MEK1 脱氢丙氨酸修饰分子动力学模拟 MEK1抑制剂

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阿折地平靶向MEK1/2抑制食管鳞癌生长的机制研究

阿折地平靶向MEK1/2抑制食管鳞癌生长的机制研究

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作者：赵莉莉郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的食管癌是世界上最常见的癌症之一,其发病率在世界上排名第七,死亡率排名第六。食管癌主要分成两种病理组织亚型:食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和食管腺癌。ESCC是我国食管癌的主要病理类型。目前ESCC的... 详细信息

背景和目的食管癌是世界上最常见的癌症之一,其发病率在世界上排名第七,死亡率排名第六。食管癌主要分成两种病理组织亚型:食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和食管腺癌。ESCC是我国食管癌的主要病理类型。目前ESCC的治疗方式主要是手术、化疗、放疗和联合治疗,但是患者的5年生存率低于20%。因此,迫切需要寻找能够延长患者生存率的有效的药物对ESCC进行治疗。开发抗肿瘤药物,耗时且成本高。从FDA批准的药库中筛选抗肿瘤药物,重新定位其作用,可以缩短药物的上市时间。阿折地平在临床上是一种二氢嘧啶类降压药,有研究表明阿折地平在体内外抑制结直肠癌的生长。在本课题中,我们发现阿折地平对ESCC有抑制作用,并阐明其在ESCC中的作用靶点以及其抑制ESCC生长的分子机制,为阿折地平作为ESCC的治疗药物提供理论依据。方法1.阿折地平在体外抑制ESCC细胞生长的研究利用细胞毒性实验检测阿折地平对ESCC细胞系的毒性;利用细胞增殖实验检测阿折地平对ESCC细胞的生长作用的影响;利用锚定依赖性生长和非锚定依赖性生长检测阿折地平对ESCC细胞的克隆形成能力的影响。2.阿折地平与MEK1、mek2结合的研究利用计算机分子对接模型模拟阿折地平和MEK1、mek2的结合,预测可能的结合位点;利用Pull down实验验证阿折地平和MEK1、mek2的结合;利用细胞热位移测定法检测阿折地平在完整细胞内与MEK1、mek2的结合。3.阿折地平对MEK1、mek2激酶活性及其下游影响的研究利用体外激酶活性实验检测阿折地平是否抑制MEK1、mek2的激酶活性,利用Western blot和免疫荧光实验检测阿折地平对MEK1、mek2下游p-ERK1/2T202/Y204水平的影响;利用细胞周期实验检测阿折地平对ESCC细胞周期的影响;利用Western blot实验检测阿折地平对ESCC细胞的Cyclin D1和CDK6水平的影响。4.MEK1、mek2在ESCC细胞中的功能研究利用慢病毒转染ESCC细胞株,建立MEK1、mek2敲低的稳转细胞株,用Western blot实验检测转染效率;利用细胞增殖实验检测敲低MEK1、mek2对ESCC细胞增殖的影响;利用锚定依赖性生长实验检测敲低MEK1、mek2对ESCC细胞克隆形成的影响。5.阿折地平靶向MEK1、mek2抑制ESCC细胞生长的研究利用细胞增殖实验和锚定依赖性生长实验检测阿折地平对稳定表达sh MEK1、sh mek2细胞系生长和克隆形成的影响。6.阿折地平抑制ESCC生长的体内研究利用ESCC人源性组织异种移植(Patient–derived xenografts,PDX)动物模型检测阿折地平在体内对ESCC生长的影响;利用免疫组织化学染色检测PDX模型小鼠肿瘤组织中的Ki67和p-ERK1/2 T202/Y204的水平。7.阿折地平、曲美替尼抑制ESCC生长的体内研究利用PDX模型检测阿折地平、曲美替尼在体内对ESCC生长的影响;利用免疫组织化学染色检测瘤组织中的Ki67和p-ERK1/2 T202/Y204的水平。结果1.阿折地平在体外抑制ESCC细胞生长细胞增殖实验的结果显示,用不同浓度的阿折地平处理ESCC细胞后,与对照组相比,阿折地平可以抑制ESCC细胞的生长,并且呈浓度梯度依赖性抑制;锚定依赖性生长实验的结果显示,与对照组比较,阿折地平能够以浓度依赖的方式抑制ESCC细胞集落形成;非锚定依赖性生长实验的结果显示,阿折地平能够以浓度依赖的方式抑制ESCC细胞的克隆形成。2.阿折地平与MEK1、mek2结合计算机分子对接模型的结果显示,阿折地平可能通过Asp147,Ser194,Gln153三个位点与MEK1结合,通过Asp194,Phe213,Arg238三个位点与mek2结合;Pull down实验的结果表明,阿折地平和外源性MEK1、mek2蛋白,过表达MEK1、mek2的HEK293F细胞裂解液中的MEK1、mek2蛋白,ESCC细胞裂解液中的MEK1、mek2蛋白孵育后,阿折地平与MEK1、mek2直接结合;细胞热位移测定法的结果表明,阿折地平显著提高MEK1和mek2蛋白在高温下的热稳定性,提示其可以在完整细胞内直接与MEK1、mek2结合;构建阿折地平与MEK1、mek2结合位点的突变质粒,将其转入HEK293F细胞中表达突变MEK1、mek2蛋白,利用Pull down实验检测阿折地平与突变型MEK1、mek2的结合情况,结果显示,与野生型MEK1、mek2相比,MEK1蛋白的Asp147,Gln153位点的突变体和mek2蛋白的Asp194,Phe213和Arg238位点的突变体与阿折地平的结合能力明显减弱,提示阿折地平分别通过Asp147,Gln153位点与MEK1结合,通过Asp194,Phe213和Arg238位

关键词：食管鳞癌阿折地平 MEK1 mek2 PDX模型

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中华中医药杂志 2019年第1期34卷 295-297页

作者：方向明刘静严郑元屈彬安徽中医药大学合肥230012

目的:研究平喘宁对寒哮大鼠肺组织中ERK信号通路中Ras、MEK1、C-FOS等相关蛋白表达水平的影响,探讨平喘宁干预哮喘气道重塑的作用机制。方法:SPF级雄性大鼠140只,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、... 详细信息

目的:研究平喘宁对寒哮大鼠肺组织中ERK信号通路中Ras、MEK1、C-FOS等相关蛋白表达水平的影响,探讨平喘宁干预哮喘气道重塑的作用机制。方法:SPF级雄性大鼠140只,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组。4周后采用HE染色观察肺组织病理形态学变化;采用Western Blot法检测大鼠肺组织Ras、MEK1、 C-FOS的蛋白表达。结果:通过HE染色后可以发现,与正常组比较,模型组有明显气道重塑现象;与模型组比较,各治疗组气道重塑均得到适当缓解。通过Western Blot法检测发现,与正常组比较,模型组Ras、MEK1、C-FOS等相关蛋白的表达均有增高(P1);而与模型组比较,除平喘宁小剂量组在下调ERK1指标的表达上效果不明显外,其余各治疗组Ras、MEK1、C-FOS等相关蛋白的表达均显著下降(P1,P<0.05)。结论:平喘宁可通过调节ERK信号通路,明显减轻哮喘大鼠气道炎性反应,延缓气道重塑。

关键词：哮喘平喘宁 Ras MEK1 C-FOS 效应机制

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参归仁合剂对产后抑郁大鼠行为学及雌激素介导下ERK1/2通路中MEK1的影响

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中国实验方剂学杂志 2017年第3期23卷 96-101页

作者：宁海燕谢萍冯俭蒋川吴玉珊成都中医药大学成都610072 成都中医药大学附属医院成都610072

目的:探讨参归仁合剂对产后抑郁模型大鼠行为学的影响,及测其海马、额叶、下丘脑神经元内胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路上丝裂原活化细胞外调节激酶1(MEK1)蛋白表达量。方法:150只雌性大鼠分为正常组,模型组,参归仁高、中、低剂量组(... 详细信息

目的:探讨参归仁合剂对产后抑郁模型大鼠行为学的影响,及测其海马、额叶、下丘脑神经元内胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路上丝裂原活化细胞外调节激酶1(MEK1)蛋白表达量。方法:150只雌性大鼠分为正常组,模型组,参归仁高、中、低剂量组(7,3.6,1.8 g·kg-1·d-1),阳性药组(舍曲林4.5 mg·kg-1·d-1和苯甲酸雌二醇0.01 mg·kg-1·d-1),除正常组外,其余各组ih苯甲酸雌二醇和黄体酮造成抑郁模型。观察其行为学指标变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测其额叶、海马、下丘脑中p-MEK1,MEK1的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组体重、食欲、活动能力、兴趣等明显降低,额叶、海马、下丘脑细胞内的p-MEK1蛋白表达显著升高(P1);参归仁合剂能改善抑郁模型组体重、食欲、活动能力、兴趣等行为学指标,抑郁模型组额叶、海马、下丘脑细胞内的p-MEK1,MEK1蛋白表达量明显下降,参归仁高、中、低组额叶、海马、下丘脑细胞内的p-MEK1,MEK1蛋白表达量显著增加,尤其以参归仁中、低组增加较为明显(P1)。结论:参归仁合剂能改善产后抑郁大鼠的行为学指标,在一定程度上调ERK1/2信号通路p-MEK1,MEK1的蛋白表达量,且中、低组效果显著,提示该药作用机制为调控ERK1/2通路并改善抑郁症状。

关键词：参归仁合剂产后抑郁细胞外信号调节激酶(mek)1/2 p-丝裂原活化细胞外调节激酶1 MEK1

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平喘Ⅰ号对RSV哮喘小鼠MEK1及mek2表达的调控作用

平喘Ⅰ号对RSV哮喘小鼠MEK1及MEK2表达的调控作用

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作者：张芳云浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的建立由福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒(Faure Marin inactivated respiratory syncytial virus,以下简称RSV)致敏的哮喘小鼠模型,观察小鼠肺组织中丝裂原细胞外激酶(Mitogen extracellular kinase,以下简称mek)水平表达的影响,研究... 详细信息

目的建立由福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒(Faure Marin inactivated respiratory syncytial virus,以下简称RSV)致敏的哮喘小鼠模型,观察小鼠肺组织中丝裂原细胞外激酶(Mitogen extracellular kinase,以下简称mek)水平表达的影响,研究观察平喘Ⅰ号在支气管哮喘小鼠气道炎症和气道重塑中病理现象的变化。方法取健康雄性BALB/C小鼠36只,随机分成6组,每组6只。分别为正常组、模型组、地塞米松组和平喘Ⅰ号低、中、高剂量组。应用RSV及氢氧化铝致敏,再利用鼻腔吸入RSV激发气道的方法制作哮喘小鼠模型,小鼠于末次激发24小时内处死,常规留取右肺中叶,采用苏木精-伊红(HE)染色进行病理学观察,采用免疫印迹法(Western blotting)测定肺组织中MEK1及mek2的蛋白表达水平;采用实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中MEK1及mek2的mRNA表达水平。运用医学图像分析软件测量支气管基底膜周径(Pbm),管壁面积(Wat)和平滑肌面积(Wam),将Wat和Wam用Pbm标准化;直线相关分析法显示Wat和Wam与MEK1/2的相关性以及MEK1与mek2的相关性。结果病理切片光镜下观察:正常组未见或偶见极轻度的病理损伤。哮喘模型组均可见明显的病理损伤,统计学分析:哮喘模型组Wat/Pbm、Wam/Pbm与正常组、治疗组比较差异有统计学意义(P值均MEK1/2蛋白及基因表达水平结果显示:模型组与正常组、各处理组比较分别有PMEK1/2水平呈显著正相关性(PMEK1/2在过敏性哮喘的发病过程中起到重要作用,足量的平喘Ⅰ号可以下调MEK1/2的异常表达。平喘Ⅰ号能够抑制支气管哮喘小鼠模型的气道重塑,其机制可能通过抑制mek的过度表达,从而阻断ERK信号转导,明显减轻哮喘小鼠的气道重塑,症状得到改善。

关键词：支气管哮喘平喘Ⅰ号合胞病毒 MEK1 mek2

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参归仁合剂质量标准研究及对产后抑郁大鼠脑组织ERK1/2通路中MEK1的影响

参归仁合剂质量标准研究及对产后抑郁大鼠脑组织ERK1/2通路中MEK1...

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作者：宁海燕成都中医药大学

学位级别：硕士

目的目前女性产后抑郁的数量呈明显上升趋势,国内外越来越多的学者对其进行研究。由于产后抑郁发病机制复杂,经大量研究证实体内的激素水平急剧变化是产后抑郁发生的生物学基础,雌激素低下是其病因之一。但目前尚未有对产后抑郁与雌激... 详细信息

目的目前女性产后抑郁的数量呈明显上升趋势,国内外越来越多的学者对其进行研究。由于产后抑郁发病机制复杂,经大量研究证实体内的激素水平急剧变化是产后抑郁发生的生物学基础,雌激素低下是其病因之一。但目前尚未有对产后抑郁与雌激素、神经信号传导通路相关性的研究报道。“参归仁合剂”为成都中医药大学附属医院的临床经验方,由人参、当归、酸枣仁组成,具有补益气血,大补元气,宁心安神之功效。本课题针对产后抑郁“气虚血虚血瘀”病证,提出“补虚化瘀法”治疗产后抑郁,并进一步研究参归仁合剂对其的作用机制,即对产后抑郁大鼠脑组织ERK1/2通路中MEK1的影响。利用雌激素水平关系与神经信号传导通路中MEK1的表达量看是否达到改善抑郁症状,这是本课题一大创新点,也为中医药治疗产后抑郁提供科学依据,更为开发新药奠定基础。方法采用薄层鉴别(TLC)对其人参、当归、酸枣仁进行定性分析,高效液相色谱法(HPLC)对人参皂苷Rg、人参皂苷Re、人参皂苷Rb进行含量测定。采用去势手术造模,观察其行为学指标变化,并用Western-blot法检测产后抑郁大鼠额叶、海马、下丘脑组织ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,细胞外信号调节激酶)通路中P-MEK1(phospho-mitogen-activated extracellular regulated kinase1,磷酸化丝裂原活化细胞外调节激酶)、MEK1(mitogen-activated extracellular regulated kinase1,丝裂原活化细胞外调节激酶)的蛋白表达量。1.参归仁合剂制备工艺研究参归仁合剂中三种饮片前期已对其分别进行了L(3)正交试验,并确定其最佳提取工艺。结果显示人参的醇提工艺:用8倍量70%乙醇浸渍提取3次,每次1 h;当归的共水蒸馏提取工艺:用12倍量水浸泡12 h,共水蒸馏10 h,收集挥发油;酸枣仁的水提工艺:加10倍量水煎煮提取三次,每次1 h。酸枣仁水提液进行沉淀,其酸枣仁皂苷A的损失量较少。实验结果表明其制备工艺稳定可行。2.参归仁合剂质量标准研究分别对人参、当归、酸枣仁进行TLC鉴别,其分离效果好、阴性对照无干扰。以人参皂苷Rg、人参皂苷Re、人参皂苷Rb含量为指标,采用HPLC进行含量测定。色谱分析条件:迪马Diamosil C(250 mm×4.6 mm,5 um)色谱柱,流动相为乙腈-水,两相梯度洗脱,柱温:25℃,流速:1 mL·min,检测波长:203nm,进样量:10μL,理论塔板数按人参皂苷Rg峰计算不得低于6000。3.参归仁合剂对产后抑郁大鼠脑组织ERK1/2通路中MEK1的影响(1)150只雌性大鼠进行矿场实验,将合格大鼠随机分为空白组16只和模型组121只。模型组对其进行双侧卵巢切除术,术后第2-5天进行阴道细胞学涂片检查。将合格大鼠连续16天注射苯甲酸雌二醇和黄体酮,模拟大鼠“怀孕”状态,即模型组出现抑郁倾向。对造模后的大鼠随机分为6组,每组16只。即为空白组、PPD(Postpartum Depression,产后抑郁)模型组、舍曲林组、雌二醇组、参归仁高剂量、中剂量、低剂量组。每组分别按相应的药物(双蒸水、双蒸水、舍曲林、雌二醇、参归仁)对其进行灌胃,且设1、2、4周观察时点,分别对所有组进行行为学测试,包括糖水消耗实验、旷场实验和强迫游泳实验,观察其指标变化。(2)对所有大鼠灌胃30天,取出各组大鼠脑组织中的下丘脑、海马、额叶,放-80℃备用。Western-blot法检测其P-MEK1、MEK1的蛋白表达量,用ImageJ软件检测条带的灰度值,并用P-MEK1的灰度值比上对应蛋白MEK1的灰度值,数据结果用GraphPad Prism 5软件进行分析。结果(1)建立了人参、当归、酸枣仁的薄层色谱鉴别方法,特征图谱明显,专属性强,人参皂苷Rb、Re、Rg分别在0.4480.480μg、0.4684.684μg、0.4426.426μg范围内与其峰面积线性关系良好,方法学考察及RSD均达到标准。(2)造模后抑郁模型组各时点大鼠体重增加缓慢,旷场实验水平运动、垂直运动得分、中央格停留时间显著延长,糖水消耗量明显下降,与空白组比较,差异有显著性(P1);参归仁高剂量、中剂量、低剂量组和阳性对照组各项指标与抑郁模型组比较均有明显改善,差异有显著性(P1或P1)。(3)蛋白免疫印迹显示抑郁模型组额叶、海马、下丘脑细胞内的P-MEK1、MEK1蛋白表达量明显下降,参归仁高剂量、中剂量、低剂量组额叶、海马、下丘脑细胞内的P-MEK1、MEK1蛋白表达量显著增加,尤其以参归仁中剂量、低剂量组增加较为明显。结论(1)利用TLC对其定性鉴别,其专属性强;HPLC对人参皂苷Rg、人参皂苷Re、人参皂苷Rb的含量测定,该方法简便、可行,精密度高,重复性好,适合

关键词：参归仁合剂质量标准产后抑郁 ERK1/2 MEK1 蛋白质免疫法

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细胞周期蛋白依赖性激酶5调节小鼠皮肤中的MAPK/ERK信号传导通路

细胞周期蛋白依赖性激酶5调节小鼠皮肤中的MAPK/ERK信号传导通路

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作者：刘学贤山西农业大学

学位级别：硕士

细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)是一种脯氨酸指导的丝氛酸/苏氨酸激酶,已被证明在神经系统外的许多组织中发挥重要作用。前期研究发现,CDK5在不同毛色的羊驼皮肤转录组图谱中呈差异表达,并且CDK5敲减小鼠毛色表型发生了变化。为了深入研... 详细信息

细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)是一种脯氨酸指导的丝氛酸/苏氨酸激酶,已被证明在神经系统外的许多组织中发挥重要作用。前期研究发现,CDK5在不同毛色的羊驼皮肤转录组图谱中呈差异表达,并且CDK5敲减小鼠毛色表型发生了变化。为了深入研究CDK5在毛色形成过程发挥功能的分子机制,本研究应用CDK5敲减小鼠模型,验证对小鼠皮肤中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)路径上一些相关因子的影响。应用实时定量PCR,免疫共沉淀和蛋白质印迹等方法进行了实验,结果如下:1.与野生型小鼠皮肤相比,在敲减CDK5的小鼠皮肤中CDK5的mRNA表达水平明显下降(PMEK1 mRNA表达水平显著低于野生型小鼠(PmekI蛋白表达没有明显变化,而CDK5敲减小鼠相对于野生型小鼠中的p-mekI表达下调,且差异显著(P<0.05);Western blot 检测 CDK5 敲减小鼠的 MITF,p-ERK,MAP3K5,CREB和DICER蛋白水平均显著降低,与野生型小鼠相比差异显著(P<0.05;P<0.001),而总ERK变化无显著差异。与野生型小鼠相比,CDK5敲减小鼠的皮肤中miR-143的表达显著上调(P<0.05)。3.CDK5基因敲减小鼠皮肤中真黑素产量低于野生型小鼠皮肤(P<0.001),而褐黑素产量为升高趋势(P<0.05)。综上,CDK7激活CDK5后,CDK5通过MAP3K6级联信号调控MAPK路径,从而影响真黑素和褐黑素的产生。

关键词： CDK5 MAP3K6 MEK1 色素 CDK5敲减小鼠

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丙烯腈对Jurkat细胞Bcl10蛋白及MEK1水平的影响

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工业卫生与职业病 2013年第3期39卷 162-165页

作者：李秀菊黄简抒王朋周元陵范卫刘淑朋复旦大学附属金山医院上海201508 第二军医大学上海200433

目的研究丙烯腈(Acrylonitrile,AN)对Jurkat细胞信号转导中Bcl10蛋白及丝裂原活化蛋白激酶(MAP kinase kinase,MEK1)的影响,探讨AN免疫毒性的可能机制。方法采取体外细胞培养技术,将T淋巴细胞Jurkat细胞株分为空白对照组和AN染毒组,AN... 详细信息

目的研究丙烯腈(Acrylonitrile,AN)对Jurkat细胞信号转导中Bcl10蛋白及丝裂原活化蛋白激酶(MAP kinase kinase,MEK1)的影响,探讨AN免疫毒性的可能机制。方法采取体外细胞培养技术,将T淋巴细胞Jurkat细胞株分为空白对照组和AN染毒组,AN染毒组又分3组,染毒浓度分别为20、100和500μmol/L,分离脂筏并对脂筏内Bcl10蛋白进行分析;AN处理后4h收集蛋白样,用Western Blot方法检测MEK1及p-MEK1的水平。结果随AN染毒浓度增加,Bcl10蛋白总量不变,但定位多向脂筏下位组区集中;Western Blot结果显示,在一定染毒浓度内,MEK1蛋白分泌增加;超过一定浓度,MEK1蛋白分泌减少;而p-MEK1随着染毒浓度增加,其含量呈递减趋势,对照组和染毒组比较,差异有统计学意义(P10蛋白与脂筏分离,脂筏结构改变,使丝裂原活化的酪氨酸激酶信号转导受到抑制而产生免疫毒性。

关键词：丙烯腈 Bcl10蛋白 MEK1

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