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mcl1对高级别浆液性卵巢癌生物学行为的影响及其作用机制的研究

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MCL1对高级别浆液性卵巢癌生物学行为的影响及其作用机制的研究

作者：韦玉艳山东大学

学位级别：硕士

研究背景：卵巢癌是病死率最高的女性生殖系统肿瘤,高级别浆液性卵巢癌（high grade serous ovarian carcinoma, HGSOC）是卵巢癌中高侵袭性的常见类型,多数患者确诊时已属晚期,肿瘤已出现广泛转移。现有的手术治疗和化疗可在一定程度... 详细信息

研究背景：卵巢癌是病死率最高的女性生殖系统肿瘤,高级别浆液性卵巢癌（high grade serous ovarian carcinoma, HGSOC）是卵巢癌中高侵袭性的常见类型,多数患者确诊时已属晚期,肿瘤已出现广泛转移。现有的手术治疗和化疗可在一定程度上减少肿瘤负荷,但对患者远期生存率并无显著影响。因此,探究卵巢癌的发生发展机制显得尤为重要。髓细胞白血病1基因（myeloid cell leukemia-1, mcl1）属于BCL2家族成员中的抗凋亡因子,功能与BCL2蛋白相似,有抑制细胞凋亡的作用。mcl1作为凋亡调节基因,其表达失衡可导致肿瘤的发生,促进肿瘤的生长,促进肿瘤细胞产生对药物诱导的细胞凋亡的抵抗作用。上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transitions, EMT）,是指上皮细胞转化为间质细胞,从而获得间质细胞表型的过程,这一过程需要经过多种生物化学变化。EMT不仅参与胚胎发育、组织重塑、伤口愈合等过程,也是肿瘤发生发展及其转移的重要机制。EMT过程中细胞表面黏附分子减少,细胞黏附能力下降,侵袭迁移能力增加,促进癌细胞发生转移。EMT发生的较经典的分子水平变化是E-cadherin减少,N-cadherin增多。体外及体内研究均表明,上皮间质转化在上皮性肿瘤的浸润播散过程中发挥作用,是上皮来源的肿瘤细胞获得侵袭性的关键分子事件,在恶性肿瘤的发展及转移播散过程中发挥重要的病理作用。迄今为止,尚无研究证明mcl1可影响卵巢癌细胞的侵袭迁移能力,本课题研究mcl1基因在卵巢癌发生发展的生物学作用及其相关机制,并探究mcl1对卵巢癌细胞侵袭迁移能力的影响及其具体作用机制。研究方法：（1）采用免疫组化染色方法检测63例高级别浆液性卵巢癌中mcl1蛋白的表达,并分析其表达水平高低与临床预后和临床相关病理因素的相互关系。（2）蛋白印记实验检测高级别浆液性卵巢癌组织与正常输卵管伞端上皮组织中mcl1的表达水平差异。（3）病毒包装并感染过表达及干扰载体建立稳定表达的mcl1卵巢癌细胞系（mcl1-OVE-A2780和mcl1-OVE-SKOV3与对照细胞系;shmcl1-A2780和shmcl1-HEY与对照细胞系）。（4）细胞相关实验探究mcll过表达和干扰后对卵巢癌细胞增殖能力,药物敏感性（CDDP）和浸润转移能力的影响。（5）以构建好的过表达及干扰mcl1稳定表达的卵巢癌细胞系为基础,检测相关EMT分子水平,探究mcl1促进肿瘤浸润转移的分子机制。（6）通过裸鼠腹腔内注射卵巢癌细胞,观察体内mcl1表达水平对肿瘤的形成和转移的影响。研究结果：（1）高表达mcl1与高级别浆液性卵巢癌的不良预后相关（P=0.0089）。并且mcl1表达水平和CA125高低和淋巴结转移有明显相关关系（P=0.032,P=0.041）（2）与正常输卵管组织相比,高级别浆液性卵巢癌组织中的mcl1表达水平明显增高,mcl1在不同卵巢癌细胞系中的表达水平普遍高于正常输卵管细胞系。（3）成功构建稳定干扰及过表达卵巢癌细胞系,并通过细胞相关实验证实,mcl1增强卵巢癌细胞增殖能力,降低对化疗药物的敏感性并促进卵巢癌细胞浸润转移。（4）mcl1使卵巢癌细胞发生上皮间质化转变,并改变了E-cadherin和N-cadherin等EMT相关标记物的表达水平。（5）体内腹腔注射实验显示：与对照组相比,过表达mcl1卵巢癌细胞系腹腔转移灶数量显著增多、转移瘤体积更大。研究结论：（1）mcll在高级别浆液性卵巢癌组织中高表达,其高表达与卵巢癌不良临床预后密切相关。（2）高表达mcl1与卵巢癌的恶性生物学行为相关,可增强卵巢癌细胞增殖能力,降低对化疗药物的敏感性,同时增强卵巢癌的浸润转移能力。（3）mcl1影响卵巢癌浸润转移的机制之一为EMT。

关键词： mcl1 生物学行为高级别浆液性卵巢癌浸润转移上皮-间质转化

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mcl1的SUMO修饰对其功能的调控

MCL1的SUMO修饰对其功能的调控

作者：王瑾大连理工大学

学位级别：硕士

细胞凋亡对于维持机体生长发育至关重要。细胞内凋亡信号通路的紊乱会直接导致各种疾病的发生。例如,在癌症中经常会出现凋亡失调的现象。髓样细胞白血病蛋白1(Myeloid cell leukemia 1,mcl1)属于BCL-2家族蛋白,其在细胞中发挥的主要功... 详细信息

细胞凋亡对于维持机体生长发育至关重要。细胞内凋亡信号通路的紊乱会直接导致各种疾病的发生。例如,在癌症中经常会出现凋亡失调的现象。髓样细胞白血病蛋白1(Myeloid cell leukemia 1,mcl1)属于BCL-2家族蛋白,其在细胞中发挥的主要功能为抗凋亡。研究发现在多种人类恶性肿瘤(如乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、淋巴瘤、急性髓系白血病(AML)和多发性骨髓瘤等)的生存中,mcl1都发挥着重要作用。同时mcl1的稳定性直接影响其功能的发挥,降低其稳定性会增强放、化疗的治疗效果,提高患者生存率。SUMO修饰是一种关键的翻译后修饰,可以调节底物功能,包括蛋白质活性、稳定性、转录活性、亚细胞分布和蛋白质相互作用等。通过对mcl1的蛋白序列分析,我们发现了两个潜在的SUMO修饰位点。因此,本研究探讨了mcl1的SUMO化修饰作用以及该修饰对mcl1功能的具体调控机制。主要工作如下:1.通过在COS7细胞系中进行免疫共沉淀实验,我们发现SUMO蛋白可以修饰mcl1。此外,突变掉SUMO1的结合位点,mcl1的SUMO修饰带消失,而加入E2结合酶Ubc9后其修饰可以被增强。同时,我们发现内源mcl1也具有SUMO修饰带。因此,我们确定mcl1能够进行SUMO修饰。另外,我们通过定点突变确定了mcl1的SUMO修饰位点为234和238处的赖氨酸。2.在免疫荧光实验中,我们发现野生型mcl1与SUMO修饰位点突变体mcl1-2K的亚细胞定位没有显著差异,暗示SUMO修饰不影响mcl1的亚细胞定位。通过蛋白质稳定性实验发现,突变体mcl1-2K的蛋白稳定性降低,暗示SUMO修饰可以稳定mcl1。3.酵母双杂交实验再次证实了,mcl1与TRIM11蛋白(一种新发现的mcl1泛素E3连接酶)可以直接结合。通过免疫共沉淀实验发现,mcl1的SUMO化可以抑制TRIM11介导的mcl1的泛素化进而增加其稳定性。4.细胞增殖、细胞克隆形成和细胞凋亡实验结果显示,野生型mcl1显著增强肿瘤细胞的增殖能力和抗凋亡能力,而突变体mcl1-2K的促增殖和抗凋亡作用显著减弱。综上所述,本论文发现mcl1可以被SUMO修饰,探讨了SUMO修饰调控mcl1稳定性和功能的具体分子机制。

关键词： mcl1 SUMO修饰稳定性凋亡增殖

TRIM11通过mcl1调控线粒体功能及细胞凋亡

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TRIM11通过MCL1调控线粒体功能及细胞凋亡

作者：胡高磊大连理工大学

学位级别：硕士

细胞凋亡是机体在生长发育,维持机体良性运转以及应对外界刺激时一种非常重要的主动的的细胞程序性死亡。它的失调会导致很多疾病的发生,比如阿尔兹海默症、癌症、艾滋病以及心脏病等。在凋亡过程中有许多蛋白家族参与其中,比如caspase... 详细信息

细胞凋亡是机体在生长发育,维持机体良性运转以及应对外界刺激时一种非常重要的主动的的细胞程序性死亡。它的失调会导致很多疾病的发生,比如阿尔兹海默症、癌症、艾滋病以及心脏病等。在凋亡过程中有许多蛋白家族参与其中,比如caspase家族和BCL2家族。Bc12家族蛋白可以通过促进或抑制线粒体膜的通透性调节细胞的凋亡进程。本篇研究中,我们发现了一个与神经发育相关的泛素E3连接酶TRIM11能够结合并降解Bc12家族蛋白中的抗凋亡蛋白mcl1,从而导致线粒体膜电位下降和细胞凋亡。本论文的主要工作如下：1.通过MTT实验检测TRIM 11对细胞增殖能力的影响,发现TRIM 11会明显抑制HeLa细胞和HEK293T(293T)细胞的增殖能力。同时发现TRIM11在血清饥饿条件下能更加明显地抑制细胞增殖。使用碘化丙啶染色,流式检测TRIM11对细胞周期的影响,发现TRIM 11对293T细胞的细胞周期并没有明显影响。使用Annexin V/PI双染,流式检测TRIM 11对细胞凋亡的影响,发现TRIM 11明显促进细胞早期凋亡,在血清饥饿条件下,细胞晚期凋亡比例上升。2.通过细胞细胞核质分离技术和免疫荧光检测TRIM 11在细胞中的分布,发现TRIM 11主要分布在细胞质中。然后通过蛋白序列比对,发现TRIM11的已知底物Humanin与Bc12家族蛋白中的mcl1、BCL-2、BCL-XL的BH1结构域具有很高的相似性,并最终使用免疫共沉淀发现TRIM 11和mcl1能够相互作用,使用免疫荧光检测TRIM 11和mcl1在细胞中定位,发现两者共定位于细胞质。3.检测全长和RING结构域缺失的TRIM 11突变体对细胞增殖能力和细胞凋亡的影响,发现RING结构域缺失后,TRIM 11抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用消失,说明TRIM11发挥促进细胞凋亡功能依赖于RING结构域。然后检测了TRIM 11对外源mcl1蛋白水平的影响,发现TRIM 11可以明显降低外源mcl1的蛋白水平,并且TRIM 11调节mcl1蛋白水平依赖于蛋白酶体途径。通过半衰期实验发现,TRIM11可以明显降低外源mcl1和内源mcl1的半衰期。最后通过免疫共沉淀检测TRIM 11对mcl1泛素化水平的影响,发现TRIM11能明显提高mcl1的泛素化水平。4.使用线粒体荧光标记物JC-1检测TRIM 11对HeLa细胞和293T细胞线粒体膜电位的影响,发现TRIM 11使线粒体膜电位降低,揭示TRIM 11主要是通过影响线粒体功能影响细胞凋亡的。使用线粒体分离试剂盒分离线粒体并检测mcl1、TRIM 11等蛋白在线粒体和细胞质的分布,发现TRIM 11促进mcl1在线粒体上的聚集,进一步说明了TRIM 11对线粒体的影响。同时,检测到了TRIM 11在线粒体的分布。

关键词：细胞凋亡线粒体 TRIM11 mcl1 泛素化

LINC00629通过降低mcl1在口腔鳞状细胞癌中的稳定性促进芹黄素的抗癌作用

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LINC00629通过降低Mcl1在口腔鳞状细胞癌中的稳定性促进芹黄素的...

作者：刘晓桐大连医科大学

学位级别：硕士

研究目的探究芹黄素在OSCC细胞中的生物学作用,并探索其作用的分子机制。材料和方法分别使用浓度为0μM,20μM,40μM,60μM,80μM,100μM芹黄素处理OSCC细胞系Cal-27和UM-SCC6,MTT检测细胞活性。集落形成实验分析细胞增殖,计数细胞集落... 详细信息

研究目的探究芹黄素在OSCC细胞中的生物学作用,并探索其作用的分子机制。材料和方法分别使用浓度为0μM,20μM,40μM,60μM,80μM,100μM芹黄素处理OSCC细胞系Cal-27和UM-SCC6,MTT检测细胞活性。集落形成实验分析细胞增殖,计数细胞集落的数量。流式细胞仪测定细胞周期分布。使用Hoechst 33342染色和流式细胞仪分析芹黄素对Cal-27和UM-SCC6的促凋亡作用。细胞成球实验评估芹黄素对OSCC干细胞的影响,并用流式细胞术检测ALDH1活性细胞所占比例。接下来我们使用UM-SCC6细胞系建立OSCC异种移植小鼠模型来研究芹黄素对OSCC细胞体内肿瘤发生的影响。同时通过RNA测序分析调查了长链非编码RNA(Long chain noncoding RNA,Lnc RNA)谱,并用q-RT-PCR进行验证并选择LINC00629-002来做后续的功能性,分别使用浓度为0μM,20μM,40μM,60μM的芹黄素处理UM-SCC6和Cal-27细胞,用q-RT-PCR分析LINC00629的表达水平。我们对UM-SCC6细胞用芹黄素处理或进行敲低LINC00629处理,分析细胞活性和凋亡情况。并通过ALDHI阳性分类检测去测定LINC00629对OSCC干细胞的作用。基于LINC00629在芹黄素的抗癌效果中发挥着重要的作用,我们继续探究其下游蛋白质。确定目标蛋白髓样细胞白血病蛋白1(Myeloid leukemia protein 1,mcl1)后,采用免疫印迹实验检测mcl1蛋白质水平。为了进一步证实LINC00629是否促进芹黄素诱导的mcl1减少,UM-SCC6和Cal-27细胞中进行40μM芹黄素处理或INC00629敲低,之后用免疫印迹实验检测mcl1蛋白质水平,检测芹黄素和LINC00629对mcl1的影响。为了证实LINC00629是否以蛋白酶体依赖的方式影响mcl1表达,我们首先检测了LINC00629对在芹黄素处理下的mcl1稳定性的影响。在正常或LINC00629敲低的UM-SCC6细胞中检测10μM CHX对mcl1蛋白质水平的影响。然后把HA-Ub转染到正常或LINC00629敲低的UM-SCC6和Cal-27细胞。全细胞裂解物用mcl1抗体进行免疫沉淀并且用抗Ub抗体的免疫印迹法去检测泛素化mcl1。为此,我们做了RNA免疫沉淀实验及RNA下拉实验来探寻LINC00629是否可以和mcl1相互作用。为了检测mcl1在LINC00629上相互作用的主要区域,我们还进行了缺失定位实验。研究结果1.芹黄素抑制OSCC细胞增殖和促进细胞凋亡芹黄素以剂量依赖的方式显著降低细胞活力并抑制OSCC细胞的增殖。通过流式细胞仪分析,我们发现用芹黄素处理可导致细胞周期在G2/M期受阻,同时Cal-27和UM-SCC6细胞在G1期分布的细胞数量减少(p1)。然后,我们使用Hoechst 33342染色和流式细胞仪分析了芹黄素对Cal-27和UM-SCC6细胞的促凋亡作用。数据表明,芹黄素处理后,凋亡细胞的数量以浓度依赖的方式明显增多,结果具有统计学意义(p1)。2.芹黄素抑制OSCC干细胞特性和体内的肿瘤形成细胞成球实验显示,在芹黄素处理后成球效率急剧下降(p1)。流式细胞仪测量ALDH1活性细胞所占比例并且发现芹黄素处理后ALDH1活性比例显著降低(p1)。除此之外,我们也检测了在OSCC细胞中干性标记物Oct4,Nanog和CD133的表达。与对照组相比,芹黄素处理后Oct4,Nanog和CD133的表达显著降低,芹黄素在OSCC细胞中上调LINC00629的表达,结果具有统计学意义(p1)。通过UM-SCC6细胞系建立OSCC异种移植小鼠模型,我们发现与对照盐水组相比,芹黄素处理组的肿瘤体积和重量都明显减少(p1)。随后通过免疫组织化学染色,结果发现芹黄素处理降低了Ki-67阳性细胞的比例,提高了Cleaved Caspase 3阳性细胞的比例。这部分结果提示芹黄素降低了OSCC干细胞的特质,抑制了体内肿瘤的形成。3.芹黄素在OSCC细胞中上调LINC00629的表达为了进一步揭示芹黄素的抗癌分子机制,使用40μM芹黄素处理UM-SCC6细胞。通过RNA测序分析调查了Lnc RNA谱,我们获得了1655个上调的和963下调的Lnc RNAs,并从中选出了8个候选基因。q-RT-PCR验证结果证实用芹黄素处理后LINC00629-002表达显著增多(p1)。因此,我们选择LINC00629-002来做后续的功能性研究,并把它命名为LINC00629。我们用不同浓度的芹黄素处理UM-SCC6和Cal-27细胞达36h,用q

关键词： OSCC 芹黄素 LINC00629 mcl1

胃肠道神经内分泌肿瘤基因变异及CRKL、mcl1蛋白表达与临床病理特征的关系

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胃肠道神经内分泌肿瘤基因变异及CRKL、MCL1蛋白表达与临床病理特...

作者：张金萍西南医科大学

学位级别：硕士

目的:探究胃肠道神经内分泌肿瘤(Gastrointestinal-Neuroendocrine Neoplasms,GI-NENs)的基因特征,分析神经内分泌瘤(neuroendocrine tumors,NETs)和神经内分泌癌(neuroendocrine carcinomas,NECs)之间的基因差异。观察GI-NENs中CRKL和mcl1蛋白的表达水平,分析两者的表达与临床病理特征和预后的关系。方法:用下一代测序(Next Generation Sequencing,NGS)检测13例GI-NENs的425基因变异,包括4例NET G1,3例NET G2,3例NET G3和3例NEC。通过免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测CRKL和mcl1两个蛋白在140例GI-NENs中的表达水平,包括93例NET G1,14例NET G2,7例NET G3和26例NEC。结果:NGS检测表明,NECs的基因变异比NETs常见。NECs的基因变异包括TP53、MTOR、DDR2、ERBB4、BRCA1、BRCA2、ATM和SMAD4的突变,SMAD4、SDHB、RB1、BRCA2的缺失和CRKL、CCNE1、mcl1的扩增,且NECs的肿瘤突变负荷(Tumor mutational burden,TMB)值明显高于NETs。此外,GI-NENs的基因变异可能还涉及到3条信号通路,第一条通路是参与DNA修复和细胞周期调控,最常见的基因改变为TP53突变;第二条信号通路是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路,IGF1R、CRKL、DDR2、ERBB4和m TOR是该通路的重要因素;第三条通路是TGF-β/SMAD4信号通路,在NECs中发现SMAD4的变异。CRKL和mcl1两个蛋白在GI-NENs肿瘤组织中的表达均比瘤旁组织高,CRKL高表达与患者年龄、肿瘤直径、原发部位、组织学分类/分级、浸润深度、临床分期、淋巴结有无转移和脉管有无侵犯有关,mcl1蛋白高表达与肿瘤直径、组织学分类/分级、浸润深度、临床分期和淋巴结有无转移有关。CRKL和mcl1蛋白高表达的患者预后更差,CRKL和mcl1蛋白是GI-NENs患者预后的独立预测因素。结论:***的基因变异比NETs常见,如TP53等基因的突变、SMAD4等基因的缺失和CRKL、mcl1等基因的扩增。NECs的TMB值明显高于NETs。***-NECs的基因变异可能涉及3条信号通路,包括DNA修复和细胞周期调控、PI3K/AKT/m TOR通路和TGF-β/SMAD4通路。***、mcl1蛋白在GI-NENs患者肿瘤组织中的表达水平显著高于瘤旁组织,其表达水平与肿瘤直径、组织学分类/分级、浸润深度、临床分期、淋巴结有无转移等病理特征相关。***和mcl1蛋白高表达的患者预后更差,是GI-NENs患者预后的独立预测因素。

关键词：胃肠道神经内分泌肿瘤下一代测序基因变异 CRKL mcl1

FBW7、mcl1在肺腺癌紫杉醇耐药性中的表达差异及作用

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FBW7、MCL1在肺腺癌紫杉醇耐药性中的表达差异及作用

作者：沈丽平苏州大学

学位级别：硕士

背景肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,也是目前全世界发病率和死亡率最高的癌症之一。据国家卫生部公布的《全国第三次死因调查》报告[1],肺癌已替代肝癌成为我国恶性肿瘤死亡原因第一位(约占全部恶性肿瘤致死的22.7%)。目前治疗... 详细信息

背景肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,也是目前全世界发病率和死亡率最高的癌症之一。据国家卫生部公布的《全国第三次死因调查》报告[1],肺癌已替代肝癌成为我国恶性肿瘤死亡原因第一位(约占全部恶性肿瘤致死的22.7%)。目前治疗肺癌的手段仍以手术、化疗和放疗为主。肺癌包括了非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)两大类,而占肺癌80%的非小细胞肺癌的患者中[2],有65%-80%的NSCLC患者确诊时已属局部晚期或发生远处转移,错失手术机会,因此放、化疗是晚期NSCLC患者的主要治疗手段。其中紫杉醇类药物不仅可与铂类药物联用作为一线治疗,更值得关注的是,多西紫杉醇被认为是非小细胞肺癌二线治疗的金标准。然而耐药的产生极大地限制了其临床疗效。因此,要想进一步改善患者的生存期和生活质量,一方面,需要提高紫杉醇类药物的敏感性,探索其药物效应预测因子,实现个体化治疗,最大限度地避免耐药;另一方面,不断探索新的治疗靶点亦是NSCLC治疗的主要方向。紫杉醇(paclitaxel,PTX)是从植物红豆杉的叶子中提取到的碱性物质,研究表明PTX有很好的抗肿瘤药理活性,但是PTX耐药的产生限制了其临床应用。髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl1)是Bcl-2家族的一个新成员,在凋亡调控中具有重要作用[3],F-盒和含蛋白7的WD重复结构域(F-box and WD repeat domain-containing protein7,FBW7)是一种肿瘤抑制蛋白,其基因突变或表达降低可造成多种肿瘤的发生[4],本文通过检测肺癌细胞A549及A549/T中FBW7和mcl1的蛋白质水平和m RNA水平与紫杉醇类药物敏感性的关系,探讨FBW7和mcl1作为紫杉醇类药物效应预测因子的潜在价值,为临床个体化治疗提供指引。目的观察PTX作用于人肺腺癌A549细胞和A549/T细胞后,对细胞增殖的影响,以及mcl1和FBW7蛋白和m RNA的表达水平,来研究PTX抑制肺癌增殖以及耐药的相关机制。方法1、PTX对细胞增殖的影响:不同浓度的PTX作用于人肺腺癌A549和A549/T两种细胞于不同的时间,应用MTT法检测细胞的增殖抑制率。2、PTX对A549及A549/T两种细胞中mcl1、FBW7m RNA表达的影响:不同浓度PTX作用A549及A549/T两种细胞后,通过实时荧光PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)来检测A549及A549/T两种细胞中mcl1、FBW7的m RNA表达。3、比较A549及A549/T细胞中mcl1、FBW7蛋白表达情况:通过采用mcl1、FBW7抗体进行细胞免疫组化技术,检测A549及A549/T两种细胞中mcl1、FBW7蛋白表达。4、PTX对A549及A549/T两种细胞中mcl1、FBW7蛋白表达的影响:不同浓度的PTX作用于A549及A549/T两种细胞后,应用蛋白质印迹法检测mcl1、FBW7蛋白的表达。结果1、PTX对细胞增殖的影响:不同时间、不同浓度PTX作用A549及A549/T两种细胞后,能抑制细胞的增殖,且呈时间-浓度依赖性(Pmcl1、FBW7m RNA表达的影响:不同浓度PTX作用A549及A549/T两种细胞后,q PCR显示A549mcl1m RNA表达下调,FBW7m RNA表达上调,而耐药细胞对此浓度无明显变化。3、比较A549及A549/T细胞中mcl1、FBW7蛋白表达情况:应用细胞免疫组化技术,检测出A549细胞中mcl1蛋白的表达低于及A549/T细胞的,而A549细胞中FBW7蛋白的表达高于A549/T。4、PTX对A549及A549/T两种细胞中mcl1、FBW7蛋白表达的影响:不同浓度的PTX作用于A549及A549/T两种细胞后,western显示A549细胞中mcl1蛋白表达下调,FBW7蛋白表达上调,耐药细胞对此浓度无明显变化。结论1、PTX能抑制人肺腺癌A549及A549/T细胞的增殖,但对于A549/T细胞所需要的紫杉醇浓度显著高于A549细胞的。2、不同浓度PTX作用于A549细胞后,FBW7表达上调,而mcl1表达下调,但相同的浓度作用于A49/T细胞后FBW7及mcl1的表达无明显变化。3、在耐紫杉醇的细胞中FBW7表达下降而mcl-1高表达,这提示与紫杉醇的耐药可能有关,但具体机制有待进一步研究。

关键词：紫杉醇肺癌耐药性 mcl1 FBW7

人mcl1不同亚型在结肠癌组织中表达变化的临床意义

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肿瘤防治研究 2016年第2期43卷 141-145页

作者：崔凯王焕冯衍生新乡医学院附属中心医院普瘤外科新乡453000 新乡医学院附属中心医院肾内科新乡453000 新乡医学院基础医学院病理生理教研室新乡453003

目的探讨人mcl1基因不同亚型在结肠癌组织中差异表达的临床意义。方法采用RT-PCR和Western blot分别检测正常结肠组织、结肠腺瘤、结肠腺癌组织以及相应的癌旁组织各20例中mcl1基因三种m RNA剪接异构体和三种蛋白亚型的表达水平,进而分... 详细信息

目的探讨人mcl1基因不同亚型在结肠癌组织中差异表达的临床意义。方法采用RT-PCR和Western blot分别检测正常结肠组织、结肠腺瘤、结肠腺癌组织以及相应的癌旁组织各20例中mcl1基因三种m RNA剪接异构体和三种蛋白亚型的表达水平,进而分析这些亚型表达差异与肿瘤临床病理特征之间的相关性。结果 mcl1基因亚型1在结肠肿瘤组织及相应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.009,P=0.022),且腺癌组中的m RNA和蛋白质水平表达亦高于腺瘤组(P=0.004,P=0.034)。亚型2在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.002,P=0.011),且腺癌组中的m RNA和蛋白质水平表达亦高于腺瘤组(P1,P=0.007)。亚型3在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.027,P=0.045),但肿瘤组与相应旁组织之间以及腺癌组与腺瘤组之间的比较差异均无统计学意义。结论研究表明mcl1亚型1和亚型2对结肠癌肿瘤恶性程度呈正相关,可以作为临床评估结肠癌恶性程度有效的诊断指标之一。而亚型3可以作为肿瘤早期诊断的标志物,但其表达水平与恶性程度无明显相关性。

关键词：结肠癌 mcl1 亚型 RNA剪接异构体蛋白亚型

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mcl1对晚期非小细胞肺癌患者预后意义

现代生物医学进展 2013年第12期13卷 2277-2282页

作者：王静张玉海史皆然任新玲许淑娣李惟捷陈张琴王哲赵一岭李圣青第四军医大学西京医院呼吸与危重症医学科陕西西安710032 陕西省第二人民医院呼吸内科陕西西安710005 第四军医大学医学统计教研室陕西西安710032 第四军医大学西京医院病理科陕西西安710032

目的:检测细胞凋亡通路蛋白mcl1和Fbw7对晚期非小细胞肺癌患者预后的预测作用。方法:收集2008年3月至2011年6月在第四军医大学第一附属医院西京医院确诊晚期非小细胞肺癌且最初两个化疗周期采用"多西他赛+顺铂"方案的患者,通过电话和信... 详细信息

目的:检测细胞凋亡通路蛋白mcl1和Fbw7对晚期非小细胞肺癌患者预后的预测作用。方法:收集2008年3月至2011年6月在第四军医大学第一附属医院西京医院确诊晚期非小细胞肺癌且最初两个化疗周期采用"多西他赛+顺铂"方案的患者,通过电话和信件进行随访。用免疫组化方法检测患者肿瘤蜡块组织中蛋白mcl1和Fbw7表达,用H评分系统将蛋白表达分为高表达组和低表达组。统计采用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析并进行Log-Rank检验,通过比例风险模型(Cox模型)逐步后退法进行多因素分析,以P144例,其中腺癌69例,鳞癌64例,其它11例。Ⅲ期患者45例(31.25%)Ⅳ期患者99例(68.75%).64例(44.44%)患者mcl1高表达,80例(55.56%)患者mcl1低表达。单因素结果提示TNM分期是提示预后的显著因素(P=0.033),Ⅲ期患者1年生存率为74.20%(中位生存时间为666天),Ⅳ期患者1年生存率为55.60%(中位生存时间为415天)。mcl1的表达与晚期非小细胞肺癌预后相关联(P=0.042),其中mcl1高表达组1年生存率为69.9%(中位生存时间为612天),mcl1低表达组1年生存率为55.30%(中位生存时间为406天)。多因素分析结果显示mcl1(OR=1.809,95%CI(1.123-2.912),P=0.015)和TNM分期(OR=0.573,95%CI(0.336-0.978),P=0.041)有独立的预后意义。结论:mcl1蛋白表达和TNM分期是晚期非小细胞肺癌的独立预后因素,mcl1高表达组较低表达组有更好的预后,Ⅲ期患者比Ⅳ期患者有更好的预后。

关键词： mcl1 凋亡非小细胞肺癌预后生物标志物总生存期

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mcl1激活MAPK-MEK信号通路促进食管癌细胞EC9706增殖

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医学理论与实践 2021年第10期34卷 1625-1629页

作者：崔艳丽何利珍河南省焦作市第二人民医院检验科 454000

目的:探讨食管癌中mcl1表达变化及其调控食管癌细胞EC9706增殖的机制。方法:对2018年期间收集的12份食管癌组织及其癌周组织进行相对定量检测mcl1基因表达情况。构建表达mcl1的真核表达载体pCDNA3.1 H-mcl1-myc-His;将EC9706细胞设置转... 详细信息

目的:探讨食管癌中mcl1表达变化及其调控食管癌细胞EC9706增殖的机制。方法:对2018年期间收集的12份食管癌组织及其癌周组织进行相对定量检测mcl1基因表达情况。构建表达mcl1的真核表达载体pCDNA3.1 H-mcl1-myc-His;将EC9706细胞设置转染空载体pCDNA3.1-myc-His的对照组、转染pCDNA3.1-mcl1-myc-His的实验组,细胞计数检测mcl1对细胞数量的影响,流式细胞仪检测细胞周期中各时期细胞比例变化,划痕实验检测对细胞迁移能力的影响。并以Western blot检测mcl1对MEK1磷酸化的影响,qRT-PCR检测mcl1对MAPK-MEK下游基因C-MYC、C-FOS、CCND1激活情况。结果:成功构建了表达mcl1的真核表达载体。和对照组相比,超表达mcl1后能够调控细胞周期改变,显著促进EC9706细胞数量增加,尤其在超表达mcl148h后,差异显著(P≤0.05);流式细胞仪检测细胞周期变化时也发现超表达mcl1后能够增加S+G2期的细胞比例;细胞划痕实验显示mcl1能够提高细胞迁移能力。检测到mcl1能够提高p-MEK1含量,并激活MAPK-MEK下游的靶基因C-MYC、C-FOS、CCND1的转录,差异显著(P≤0.05)。结论:mcl1在食管癌中普遍高表达,并且能够通过激活MAPK-MEK信号通路促进食管癌细胞EC9706增殖,或许可以作为一个鉴别食管癌的候选基因。

关键词：食管癌 MAPK-MEK信号通路 mcl1 细胞增殖

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