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注射用丹参多酚酸对脑缺血大鼠VEGF、IL-10表达的影响

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注射用丹参多酚酸对脑缺血大鼠VEGF、IL-10表达的影响

作者：王淑郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的缺血性脑血管病是全球死亡率和长期致残率的主要原因,具有高发病率、高致残率、高死亡率的特点,已严重威胁到人类的生命和健康。缺血性脑卒中的发生过程中涉及多种病理生理学机制,包括氧化应激,炎症反应,血管内皮细胞及微血... 详细信息

背景与目的缺血性脑血管病是全球死亡率和长期致残率的主要原因,具有高发病率、高致残率、高死亡率的特点,已严重威胁到人类的生命和健康。缺血性脑卒中的发生过程中涉及多种病理生理学机制,包括氧化应激,炎症反应,血管内皮细胞及微血管功能障碍,细胞坏死、凋亡等,其中血管内皮细胞损伤及微血管障碍是主要机制。在大脑血管阻塞后数分钟,即可迅速启动一系列脑缺血生物化学级联反应,炎性因子的释放:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白介素-10(Interleukin-10,IL-10),白介素-1(Interleukin-1,IL-1),白介素-20(Interleukin-20,IL-20),白介素-6(Interleukin-6,IL-6)等因子。其中,白介素-10是主要的抗炎和神经营养因子,通过抑制多种促炎因子如TNF-α,IL-1β,IL-8的产生发挥抗炎作用。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是非常重要的神经营养因子之一。在脑缺血损伤后VEGF水平上调已在动物模型中证实。由于复杂的病理生理学机制,治疗缺血性脑卒中已成为临床工作的重点。近年来,关于中药在急性脑缺血损伤的治疗方面研究非常活跃,传统经典中药丹参已广泛应用于临床治疗多种微循环障碍相关疾病,如:心血管疾病,脑血管疾病,肾脏功能障碍,肝纤维化及糖尿病并发症等,具有多靶点、多途径等特点。注射用丹参多酚酸(Salvianolate lyophilized injection,SLI))是丹参的水溶性提取物,具有多种药理活性,主要由丹酚酸B(salvianolic acid B)、丹酚酸D、丹酚酸E、迷迭香酸等组成,已有研究证实丹参多酚酸可通过血脑屏障,降低大鼠脑组织缺血面积,清除自由基,抑制炎性细胞浸润,改善循环等达到治疗急性脑缺血目的。目前丹参多酚酸在急性脑缺血的抗炎及血管保护研究尚少见,本实验通过采用经典的大鼠左侧大脑中动脉闭塞模型(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),给予注射用丹参多酚酸腹腔注射(30mg/Kg),并选取6h、12h、24h、48h四个不同缺血时间点,通过应用Zea-Longa法评估注射用丹参多酚酸对急性脑缺血大鼠神经功能缺损,TTC染色观察注射用丹参多酚酸对MCAO大鼠脑梗塞体积影响,HE染色观察缺血半暗带区神经细胞形态学变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA),蛋白质印迹技术检测方法(Western Blot),免疫组织化学检测法检测注射用丹参多酚酸对MCAO大鼠的血清及脑组织中VEGF、IL-10表达水平的影响,以证实丹参多酚酸在急性脑缺血中发挥的抗炎及血管神经保护作用。材料与方法选取健康雄性SD大鼠(体重250-280g)120只,清洁级,由郑州大学实验动物中心提供,随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)、丹参多酚酸治疗组(MCAO+SLI组),再按缺血时间随机分为6h、12h、24h、48h 4个亚组。采用改良Longa法制备大鼠左侧大脑中动脉闭塞模型。Sham组除了不结扎血管其余步骤同模型组,大鼠清醒后,在脑缺血不同时间点MCAO+SLI组腹腔注射丹参多酚酸30mg/Kg,MCAO组、Sham组给予等量的生理盐水。分别于6h、12h、24h、48h时间点对三组脑缺血大鼠采用Longa评分法评估大鼠神经功能,1-3分入组,0分、4分剔除;TTC染色法评估脑缺血大鼠脑梗死程度,ELISA法检测血清VEGF、IL-10水平,Western Blot法检测脑组织中VEGF、IL-10的含量,HE染色法观察缺血半暗区神经元形态变化,免疫组织化学法检测脑缺血大鼠脑组织中VEGF、IL-10的表达情况。结果1神经行为评分及TTC染色结果不同时间点,Sham组大鼠神经功能缺损评分为0分;MCAO+SLI组与MCAO组相比,脑缺血后6h、12h神经功能评分无明显差异(P>0.05),24h、48h神经功能评分改善明显,差异有统计学意义(PMCAO组及MCAO+SLI组大鼠TTC染色结果:左侧大脑中动脉支配区域均显示白色,但MCAO+SLI组白色区域明显较MCAO组缩小,对侧大脑显示红色;Sham组大鼠左侧大脑中动脉支配区显示红色,对侧大脑显示红色。2 ELISA法及Western Blot检测血清、脑组织VEGF、IL-10的表达ELISA法检测结果:在不同缺血时间点,Sham组血清VEGF、IL-10含量少,MCAO组与MCAO+SLI组含量均较Sham组高(PMCAO+SLI组与MCAO组相比,血清VEGF、IL-10水平均升高(PMCAO组、MCAO+SL

关键词：注射用丹参多酚酸 MCAO 血管内皮生长因子白介素-10

马来酸桂哌齐特对大鼠缺血性脑损伤的保护作用及机制研究

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马来酸桂哌齐特对大鼠缺血性脑损伤的保护作用及机制研究

作者：郝明华第四军医大学

学位级别：硕士

脑卒中是指发生于脑部血管、因血液循环障碍而造成脑组织损害的一组疾病,一般分为出血性脑卒中和缺血性脑卒中(脑梗死),而后者约占脑血管疾病的80%。在世界范围内,由脑动脉闭塞导致的急性缺血性脑损伤是老龄人群脑卒中发病率高、死亡率... 详细信息

脑卒中是指发生于脑部血管、因血液循环障碍而造成脑组织损害的一组疾病,一般分为出血性脑卒中和缺血性脑卒中(脑梗死),而后者约占脑血管疾病的80%。在世界范围内,由脑动脉闭塞导致的急性缺血性脑损伤是老龄人群脑卒中发病率高、死亡率高的主要原因。急性脑缺血发生后,氧化应激、炎症因子释放、兴奋性氨基酸释放、细胞内钙超载、线粒体功能障碍等一系列级联事件的发生将会导致神经元的大量死亡。深入研究并探索有效的神经保护药物一直是神经科学领域工作的重点和难点。马来酸桂哌齐特(cinepazide maleate,CM)作为哌嗪类钙离子通道阻滞剂,既往研究已表明其具有扩张血管和促进细胞代谢的双重作用,而且在最近的临床研究中还发现其具有与米屈肼相似的脑保护作用,然而其上述作用的相关机制却不甚清楚。因此,本课题以线栓法大鼠大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型为研究平台,深入研究马来酸桂哌齐特的脑保护作用及其可能的作用机制。第一部分CM对实验性脑缺血治疗效果的研究目的:研究CM对MCAO损伤Sprague-Dawley(SD)大鼠是否具有脑保护作用。方法:(1)CM最佳治疗剂量探索:选择健康雄性成年SD大鼠,通过线栓法建立MCAO模型。按照术后2h神经功能评分(neurologicalbehaviorscores,nbs)差值≤3、体重(bodyweight,bw)差值≤20g、mri轴位扫描最大梗死面积百分比≤10%的标准进行配对,共分三个cm处理组(10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg)和一个生理盐水(normalsaline,ns)对照组,每组15只sd大鼠,分别给予腹腔注射相应剂量cm和ns。观察各组在MCAO损伤7d后的sd大鼠nbs变化情况。(2)cm对实验性脑缺血治疗效果的验证:按(1)所述方法进行建模、配对,分为一个cm处理组(选用cm的最佳使用浓度)和一个ns对照组,每组15只符合条件的MCAO模型大鼠,观察各组在MCAO损伤后1d、3d、7d的sd大鼠死亡率、bw、nbs和7d的脑梗死体积,验证cm对MCAO损伤大鼠的脑保护作用。结果:(1)10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg三个cm处理组术后7d(pod7)的神经行为功能恢复情况(nbs7d-nbs12h)均好于ns对照组,但只有20mg/kg组(2.05±0.19)与ns对照组(1.25±0.35)之间差异明显(pMCAO损伤sd大鼠具有脑保护作用,且剂量为20mg/kg时效果最明显。第二部分cm对缺血性脑损伤后细胞死亡类型的影响研究目的:验证MCAO模型缺血脑组织中细胞焦亡的存在,研究cm脑神经保护作用与细胞不同死亡类型之间的关系。方法:MCAO损伤后随机分为cm处理组(20mg/kg)和ns对照组,通过tunel染色法观察MCAO后1、3、7d细胞凋亡的变化情况,通过tunel和il-1β免疫荧光双标法寻找焦亡细胞,并观察焦亡细胞数量的变化情况;通过westernblot检测caspase-1、caspase-3、il-1β等蛋白因子的变化情况,进一步探索cm对细胞凋亡和焦亡的影响。结果:(1)在cm处理组和ns对照组1、3、7d的脑组织切片中均发现tunel和il-1β免疫荧光双标的阳性细胞,验证了MCAO模型缺血脑组织中细胞焦亡的存在;(2)与ns对照组相比,cm能明显降低1、3、7d各时间点脑组织切片中il-1β、tunel单标及两者双标的阳性细胞数,提示cm能减轻凋亡、焦亡及il-1β炎症因子的表达;(3)与ns对照组相比,cm能明显抑制caspase-1、caspase-3、il-1β蛋白水平的升高,进一步印证了cm对缺血再灌注损伤导致的细胞凋亡和焦亡的抑制作用。结论:(1)验证了缺血脑组织内焦亡细胞的存在;(2)cm可通过抑制细胞凋亡和焦亡发挥脑保护作用。第三部分cm改善缺血性脑损伤氧化还原状态失衡作用的研究目的:研究cm是否通过抗氧化作用保护MCAO损伤的脑组织。方法:MCAO建模成功后随机分为cm处理组(20mg/kg)和ns对照组,7d后取梗死区脑组织,提取组织匀浆液,分别检测活性氧簇(ros)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,sod)、丙二醛(

关键词：马来酸桂哌齐特 MCAO 神经保护凋亡焦亡大鼠

针刺对MCAO大鼠侧脑室注射5-硫D-葡萄糖、环孢菌素A后微血管内皮细胞转运功能的影响

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针刺对MCAO大鼠侧脑室注射5-硫D-葡萄糖、环孢菌素A后微血管内皮...

作者：刘红山东中医药大学

学位级别：硕士

目的：通过研究针刺对MCAO大鼠侧脑室注射5-硫D-葡萄糖、环孢菌素A后微血管内皮细胞转运功能的影响,探讨针刺是否通过影响微血管内皮细胞的Glut-1和P-gp的表达,减轻缺血后神经细胞的损伤,保护缺血脑组织。为针刺治疗脑缺血性疾病提供实... 详细信息

目的：通过研究针刺对MCAO大鼠侧脑室注射5-硫D-葡萄糖、环孢菌素A后微血管内皮细胞转运功能的影响,探讨针刺是否通过影响微血管内皮细胞的Glut-1和P-gp的表达,减轻缺血后神经细胞的损伤,保护缺血脑组织。为针刺治疗脑缺血性疾病提供实验及理论依据。方法：线栓法阻断Wistar大鼠大脑中动脉制成局灶性脑缺血模型（MCAO）。侧脑室内微量注射Glut-1、P-gp阻滞剂。使用电针治疗仪在内关穴进行刺激;用NSS神经体征评分法于大鼠术后1d、7d进行评分;采用激光多普勒血流仪监测第7天大鼠软脑膜微循环。检测实验后脑组织谷氨酸、乳酸、丙酮酸、Ca2+及皮质、海马、丘脑等不同脑区葡萄糖的含量;石蜡切片,HE染色,观察海马神经细胞的形态变化;运用免疫组化方法对海马CA1区微血管内皮细胞Glut-1、MDR1编码的P-gp进行了研究。结果：结果显示针刺可促进MCAO大鼠神经体征的恢复;针刺可以明显改善MCAO大鼠海马CA1区微循环血流量;降低脑组织中的谷氨酸、乳酸、Ca2+及乳酸／丙酮酸的比值,升高丙酮酸及皮质、海马、丘脑等不同脑区葡萄糖的含量;针刺能够增加大鼠海马CA1区微血管数目,促进神经细胞的修复。免疫组化结果显示,针刺可明显提高脑缺血后海马CA1区微血管内皮细胞Glut-1表达,缓解能量衰竭;MDR1编码的P-gp针刺后的表达也显著增多,从而发挥其外排泵的作用,保护脑组织。侧脑室内注射Glut-1和P-gp阻滞剂,icv 5-SDG后针刺组软脑膜微循环血流量比icv NS后升高,神经体征评分,丙酮酸、乳酸、葡萄糖的含量较icv NS后降低;icv CsA后针刺组神经体征评分、软脑膜微循环血流量,谷氨酸、乳酸、Ca2-的含量均比icv NS后升高。结论：针刺可以改善MCAO大鼠海马CA1区微循环血流量,上调微血管内皮细胞Glut-1和MDR1编码的P-gp表达,减轻缺血后神经细胞的损伤;icv 5-SDG、CsA后对针刺的效果没有确切的抑制作用,说明虽然5-SDG、CsA能够阻滞Glut-1和P-gp的功能,但对针刺改善MCAO大鼠缺血脑功能的恢复无明显抑制作用,说明尚不能证实Glut-1和P-gp是针刺改善脑缺血功能的关键环节,其机制有待进一步深入研究。

关键词：针刺内关 MCAO Glut-1 P-gp 海马微循环内皮细胞

复方新斯的明山莨菪碱对缺血性脑卒中的治疗作用研究

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复方新斯的明山莨菪碱对缺血性脑卒中的治疗作用研究

作者：张井明第二军医大学

学位级别：硕士

研究目的：脑卒中又称脑中风,具有高致残率、高致死率、高复发率等特点,是人类致死率排名第二高的疾病,严重威胁着人类健康和生命。在我国,随着人口老龄化的发展及人们生活方式的改变,脑卒中发病率有逐年增多的趋势,脑卒中预后极差,给... 详细信息

研究目的：脑卒中又称脑中风,具有高致残率、高致死率、高复发率等特点,是人类致死率排名第二高的疾病,严重威胁着人类健康和生命。在我国,随着人口老龄化的发展及人们生活方式的改变,脑卒中发病率有逐年增多的趋势,脑卒中预后极差,给病人、家庭和社会造成严重精神和经济负担。脑卒中主要分为缺血性卒中和出血性卒中,多数脑卒中病人为缺血性脑卒中。目前对缺血性脑卒中的治疗方法主要是：溶栓和抗血小板聚集,治疗时间窗窄且有出血风险,所以对脑卒中的预防和治疗是摆在人类面前很棘手的课题,研发出安全有效的抗脑卒中药物尤为迫切。我们课题组前期研究表明：胆碱酯酶抑制剂甲硫酸新斯的明,可以增加内源性乙酰胆碱含量,进而发挥脑保护作用,新斯的明发挥脑保护作用是通过乙酰胆碱烟碱型受体(nAChR)而非乙酰胆碱毒蕈碱型受体(mAChR),然而单用新斯的明治疗脑卒中会发生很多副反应,包括：心动过缓、腹痛、流涎、支气管痉挛等。作为非选择性M受体阻断剂的山莨菪碱,研究表明其具有抗炎抗感染性休克的作用。分别结合新斯的明和山莨菪碱单药的作用,我们考虑将其组成复方用于治疗缺血性脑卒中,找出最佳复方配比并对其作用机制进行探讨。实验设计和方法：实验一：新斯的明和山莨若碱联合给药,筛选出治疗缺血性脑卒中最佳复方比例。雄性SD大鼠(240-270 g)70只,2%异氟烷气体麻醉,大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)制作急性缺血性脑卒中模型,术后立即舌下静脉给予药物,新斯的明10、20、40μg/kg,山莨菪碱10、20、40 mg/kg,对照组给予生理盐水,激光多普勒检测手术前后脑血流(CBF)的变化情况。24 h后神经学评分,然后脱臼处死动物,取脑切片进行1% TTC染色,数码相机拍照统计脑梗死面积。根据单药结果用山莨菪碱20 mg/kg与新斯的明10、20、40、80 gg/kg组成复方,找出最佳复方比例。实验二：根据最佳复方比例观察该复方的量效关系,确定最佳复方配伍,然后根据最佳复方配伍完成时效关系实验,确定最佳治疗时间窗。根据复方新斯的明山莨菪碱最佳复方比例(1：500),设定三个复方配比剂量,分别为：新斯的明+山莨菪碱10μg/kg+5 mg/kg,20μg/kg+10 mg/kg,40μg/kg+20 mg/kg,筛选出最佳配比,根据该配比分别做了MCAO后1、1.5和2h后给药的时效实验。实验三：观察该复方药物与α7nAChR的作用关系。体外实验选用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,给药组给予复方药物(新斯的明0.2μg/ml+山莨菪碱100μg/ml)或者750μM的ACh进行处理,对照组给予生理盐水,20 min后用含荧光标记的a-Bgt着色,多聚甲醛固定后用激光共聚焦显微镜检测细胞荧光强度。实验四：进一步验证该复方药物通过a7nAChR发挥治疗急性缺血性脑卒中的作用。用a7nAChR基因敲除和同窝野生型小鼠进行实验,观察药物对a7nAChR敲除小鼠和野生型小鼠MCAO后脑梗死面积及神经学评分的影响。实验五：观察该复方通过a7nAChR发挥脑保护作用的下游机制。根据a7nAChR敲除与否和给药与否将实验分成四组,n=6。ELISA测定动物血清炎性细胞因子如：(TNF-α, IL-1α和IL-6)等的含量,对比野生型和基因敲除动物给药与否对炎性因子含量差异的影响。采用Western Blot检测该复方药物对野生型小鼠MCAO后梗死半暗带细胞凋亡因子(caspase-8, cleaved caspase-8, caspase-12, Bad, Bax, Bcl-2, Bcl-xl)等的影响,找出有差异的凋亡因子,用a7nAChR基因敲除小鼠进一步验证细胞凋亡通路作用机制。实验结果：一、新斯的明和山莨菪碱分别单独给药都可以明显减少脑梗死面积,新斯的明20和40 μg/kg剂量下脑梗死面积明显变小,山莨菪碱20和40 mg/kg剂量下脑梗死面积明显变小。新斯的明40 μg/kg+山莨菪碱20 mg/kg的复方组合脑梗死面积最小,脑保护作用最强。确定该复方的最佳比例为：1：500。二、新斯的明和山莨菪碱最佳复方比例为：1：500,该复方比例呈一定的量效关系。复方新斯的明山莨菪碱最佳配伍为：新斯的明40μg/kg+山莨菪碱20 mg/kg o时效实验证明该复方的最佳治疗时间窗为梗死后2h内。三、激光共聚焦显微镜观察结果证明：该复方药物能够减弱a-Bgt与RAW264.7细胞表面的a7nAChR结合,且该复方可以促进ACh与a7nAChR的结合。四、与野生型动物相比,a7nAChR基因敲除动物MCAO后脑梗死比例显著增加,且给予复方药物后梗死面积未明显减小,神经学评分亦未见改善。五、野生型小鼠给予复方药物后死亡通路凋亡因子(caspase-8, cleaved caspase-8)未变化,内质网通路凋亡因子(caspase-12)也没有变化,线粒体凋亡通路促凋亡因子(Bad, Bax)

关键词：新斯的明山莨菪碱复方 MCAO α7nAChR 缺血性脑卒中

清开灵有效组分对MCAO大鼠脑微血管内皮细胞的影响

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中药材 2004年第5期27卷 348-351页

作者：徐丽荣马世彬李澎涛唐启盛北京中医药大学北京100029 泰山医学院免疫教研室泰安271000 北京中医药大学东方医院北京100078

目的:观察脑缺血后不同时间段MCAO大鼠血浆ET-1、TXB_2、6-keto-PGF_1α、vWF表达水平及清开灵注射液有效组分黄芩苷、栀子苷、胆酸、珍珠母水解液对其表达的影响,探讨不同组分对脑缺血后微血管内皮功能状态干预的作用环节。方法:采用大... 详细信息

目的:观察脑缺血后不同时间段MCAO大鼠血浆ET-1、TXB_2、6-keto-PGF_1α、vWF表达水平及清开灵注射液有效组分黄芩苷、栀子苷、胆酸、珍珠母水解液对其表达的影响,探讨不同组分对脑缺血后微血管内皮功能状态干预的作用环节。方法:采用大鼠MCAO模型,用放免法检测脑缺血12h及24h血浆ET-1、TXB_2、6-keto-PGF_1α含量,ELISA法检测不同时段血浆vWF的含量。结果:血浆ET-1含量在不同时段均升高,各有效组分于缺血12h未表现有意义的生物效应,合方、栀子苷阻抑缺血24h血浆ET-1高表达;血浆TXB_2含量在缺血12h显著升高,除合方外有效组分均有阻抑其高表达作用,其中珍珠母作用更显著,至缺血24h,MCAO大鼠TXB_2表达与正常组差异不显著,黄芩苷、合方能较强的抑制其表达;血浆6-keto-PGF_1α含量在缺血后两个时段均显著降低,黄芩苷可升高缺血12h血浆6-keto-PGF_1α水平,珍珠母可升高缺血24h血浆6-keto-PGF_1α水平,胆酸于两个时段均发挥有意义的生物效应;TXB_2/6-keto-PGF_1α比值在不同时段均显著升高,栀子苷、胆酸、黄芩苷、合方能降低缺血12h其比值,黄芩苷、合方能降低而栀子苷可升高缺血后24h其比值;血浆vWF水平于缺血后不同时间段均显著升高,珍珠母在不同时段均有阻抑作用,黄芩苷阻抑缺血12h vWF释放。

关键词：清开灵有效组分 MCAO 脑微血管内皮细胞中药药理

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Notch信号通路在神经再生中的作用

Notch信号通路在神经再生中的作用

作者：郭红梅苏州大学

学位级别：硕士

目的：观察Notch信号通路在成年神经再生中的作用方法:35只C57/BL的雄性小鼠，随机分为缺血组，DAPT组（即缺血+DAPT），假手术组，在大脑中动脉栓塞(middle cerebral occlusion MCAO)后，实验组随机腹腔注射DAPT和DMSO（100mg/kg），M... 详细信息

目的：观察Notch信号通路在成年神经再生中的作用方法:35只C57/BL的雄性小鼠，随机分为缺血组，DAPT组（即缺血+DAPT），假手术组，在大脑中动脉栓塞(middle cerebral occlusion MCAO)后，实验组随机腹腔注射DAPT和DMSO（100mg/kg），MCAO后第10天连续3天腹腔注射BrdU（50mg/kg），12小时以后处死小鼠，进行海马区免疫荧光双标GFAP/BrdU，DCX/BrdU来观察细胞的变化情况。Western Blot检测NICD信号蛋白的变化。用Real time PCR检测中海马组织中Hes1mRNA的相对表达量。结果：在MCAO后，缺血组与DAPT组、假手术组相比较，缺血组中GFAP/BrdU，DCX/BrdU阳性细胞数明显增加（P<0.01）。Western Blot结果示，缺血后能够促进NICD蛋白的表达（P<0.01），DAPT可降低NICD的表达。Real time PCR结果示：在缺血组中，海马组织中Hes1mRNA的相对表达量明显增加（P<0.01），缺血能够促进Hes1mRNA的表达，DAPT能够减少Hes1mRNA的表达。结论：脑缺血后Notch信号参与了神经干细胞的分化。

关键词： MCAO Notch信号 DAPT GFAP DCX BrdU 分化

丹参、川芎有效部位配伍及参芎注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

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丹参、川芎有效部位配伍及参芎注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作...

作者：汪兴宇浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的通过对丹参和川芎有效部位配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用的研究,探索丹参和川芎有效部位配伍对脑缺血再灌注损伤的作用情况。并以参芎注射液作为丹参和川芎配伍的一个实例,研究对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制,探索其防治... 详细信息

目的通过对丹参和川芎有效部位配伍对脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用的研究,探索丹参和川芎有效部位配伍对脑缺血再灌注损伤的作用情况。并以参芎注射液作为丹参和川芎配伍的一个实例,研究对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制,探索其防治脑缺血的作用机理,为进一步的临床应用提供参考。方法(1)采用正交设计法L9(34)组成丹参、川考四种主要有效部位(丹参总酚酸、丹参总酮、川芎生物碱、川弯有机酸)不同剂量配比的9个组合,将体重260-280g左右的雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和9个组方组,连续给药三天后造脑缺血-再灌注模型,分别于再灌注5min、30min、60min、120min、180min、240min取血样,测定血液中MDA含量和SOD活力。再灌注24h,考察神经功能评分并取脑组织,对脑组织中的MDA和SOD进行测定,用RT-PCR法对脑组织中的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因进行检测。(2)SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫通组、参芎注射液高、中、低剂量组。采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,考察参芎注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能评分、脑梗死体积的影响;检测脑组织中一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量,ELISA法检测对脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平的影响;采用RT-PCR法测定大鼠脑组织IL-1β和TNF-α mRNA的表达。结果(1)丹参、川芎主要有效部位配伍药效学研究:①丹参、川芎有效部位配伍的9个组方灌胃后,脑缺血再灌注大鼠各时间点血液中的SOD活力均有所增加,MDA含量均有所降低。再灌注5min,SOD活力增强通常不明显,MDA含量的降低也不是很明显。再灌注30min后,与模型组同时间点比较,开始陆续出现较显著的效果(PMCAO大鼠脑组织中降低MCAO大鼠脑组织中MDA、NO的含量,降低LDH、NOS的活性,提高SOD的活性(PMCAO大鼠脑组织中炎症因子IL-1β和TNF-α mRNA的表达,并对降低IL-1β和TNF-α在脑部的含量(PMCAO大鼠缺血再灌注损伤的部分机制。

关键词：丹参川芎参芎注射液 MCAO 抗氧化炎症损伤 MMP-9

滁菊总黄酮抗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤作用研究

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安徽科技学院学报 2021年第2期35卷 46-51页

作者：王琮陈浩李飞跃俞浩安徽科技学院生命与健康科学学院安徽凤阳233100

目的:研究滁菊总黄酮(TFCJ)抗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(FCIRI)作用。方法:取120只雄性SD大鼠,随机分为6组,即假手术组、模型组、TFCJ高中低组和血塞通组,其中假手术组每日灌胃10 mL/kg 0.5%羧甲基纤维素(CMC)溶液,手术仅分离血管;模... 详细信息

目的:研究滁菊总黄酮(TFCJ)抗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(FCIRI)作用。方法:取120只雄性SD大鼠,随机分为6组,即假手术组、模型组、TFCJ高中低组和血塞通组,其中假手术组每日灌胃10 mL/kg 0.5%羧甲基纤维素(CMC)溶液,手术仅分离血管;模型组每日灌胃10 mL/kg 0.5%CMC溶液,复制FCIRI模型;TFCJ高中低剂量组和血塞通组每日灌胃40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg TFCJ和25 mg/kg血塞通,用0.5%CMC溶液配制,复制FCIRI模型。以上全部大鼠每日灌胃1次,周期为7 d。使用神经评分系统、TTC染色和脑指数评估大鼠神经系统缺陷程度,SOD、GSH-Px、CAT和MDA评估氧化应激程度,HE染色用于评估脑组织病理变化。结果:取120只雄性SD大鼠,随机分为6组,假手术组每日灌胃10 mL/kg 0.5%羧甲基纤维素(CMC)溶液,手术仅分离血管;模型组每日灌胃10 mL/kg 0.5%CMC溶液,复制FCIRI模型;TFCJ高中低剂量组和血塞通组每日灌胃40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg TFCJ和25 mg/kg血塞通,用0.5%CMC溶液配制,复制FCIRI模型。以上全部大鼠每日灌胃1次,周期为7 d。使用神经评分系统、TTC染色和脑指数评估大鼠神经系统缺陷程度,SOD、GSH-Px、CAT和MDA评估氧化应激程度,HE染色用于评估脑组织病理变化。结论:TFCJ对大鼠RCIRI具有保护作用。

关键词：滁菊总黄酮大鼠 MCAO 病理变化抗氧化

大鼠脑梗死后脑组织损伤和脑梗面积与凋亡调节蛋白、TNF-α、GFAP、BDNF、Nestin、NSE的表达和神经功能变化的研究

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大鼠脑梗死后脑组织损伤和脑梗面积与凋亡调节蛋白、TNF-α、GFAP...

作者：曹金娟南昌大学

学位级别：硕士

目的：探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注(modified neurological severity scores,MCAO)不同时间梗死部位组织学和梗死面积，以及神经功能与凋亡调节蛋白，炎症及神经营养因子表达，神经及胶质细胞再生等变化在脑梗死中的关系及意义，以... 详细信息

目的：探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注(modified neurological severity scores,MCAO)不同时间梗死部位组织学和梗死面积，以及神经功能与凋亡调节蛋白，炎症及神经营养因子表达，神经及胶质细胞再生等变化在脑梗死中的关系及意义，以期为临床脑保护剂的应用提供实验依据。方法： 1、线栓法制作大鼠MCAO模型，并随机分为模型1d、3d、7d、14d、21d组。 2、采用mNSS评分法对MCAO模型大鼠进行神经功能评价。 3、HE染色观察组织形态变化及脑梗死面积的变化。 4、免疫组化观察Bcl-2、Bax、GFAP、NSE、BDNF、Nestin和TNF-α的表达。结果： 1、MCAO后第3d皮质水肿、神经元结构模糊但胞核仍清晰可见，基底节区神经纤维肿胀、星形胶质细胞增多;第7d皮质神经元轴突减少甚至消失且核仁模糊、小胶质细胞出现且噬神经，基底节区神经纤维崩解、小胶质细胞增多;第14d神经元结构不清晰，基底节区布满小胶质细胞;第21d神经元结构模糊，基底节区小胶质细胞更多且出现纤维结缔组织、缺血核心区形成空白区。 2、MCAO后脑梗死面积随着时间的迁移逐渐增大，梗死区域由基底节区扩展至缺血半暗带直达皮质区，其中模型21d组显著大于模型1d组、模型3d组、模型7d组，模型14d组显著大于模型1d型7d组，模型7d组显著大于模型1d组。 3、MCAO后神经功能评分(mNSS)随时间的推移逐渐下降，其中模型21d组显著小于模型1d组(PMCAO后Bax阳性着色区域主要为皮质及梗死侧基底节区细胞浆和细胞膜，随着时间的推移阳性细胞的细胞核由清晰变为模糊最后消失，其IOD值也随着时间的推移而逐渐下降并在21天达最低值，其中模型21d组显著小于模型1d组、模型3d组、模型7d组、模型14d组(PMCAO后TNF-α表达模型1d组型7d组逐渐增加并达高峰。 6、MCAO后GFAP+细胞主要聚集在梗死区周围，随着时间的推移GFAP阳性细胞数量呈双向反应，模型1d组、模型3d组、模型7d组逐步升高、而至模型14d组和模型21d组则又逐步降低，其中模型7d组显著高于模型1d组、模型3d组(P0.05)。 7、MCAO后BDNF+细胞着色主要位于胞浆和细胞膜表面胞浆，其IOD值呈双向表达，模型1d组、模型3d组、模型7d组、模型14d组表达逐步降低，模型21d表达升高，其中模型1d组和模型21d组显著大于模型14d组(P0.05)。 8、MCAO后Nestin+细胞数量随着时间的推移呈双向反应，第1d组d组逐步升高，随后逐步降低，其中模型7d组显著高于模型1d组、模型3d组(P0.05)。 9、MCAO后NSE IOD随着时间的延长逐渐上升，其中模型1d组显著小于模型3d组、模型7d组、模型14d组、模型21d组，模型21d组显著大于模型3d组、模型7d组(P0.05)。结论： MCAO后14d前首先炎症反应加剧并导致细胞凋亡和胶质细胞增生，然后开始启动修复神经干细胞增殖、分化;14d后虽然脑梗死面积和脑组织损伤仍然在增加，但由于抗细胞凋亡显著增强及神经营养因子产生增加致使部分缺血/缺氧的神经细胞(缺血半暗带区域)得到保护及细胞功能的恢复，以及神经干细胞增殖、分化所致的神经细胞再生，故神经功能在第14d以后显著改善。

关键词：大鼠 MCAO 脑梗死胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 神经元特异性烯醇化酶(NSE) HE染色 TNF-α Bax Bcl-2 凋亡 BDNF Nestin 神经功能(mNSS)