检索结果-南通市图书馆

作者：贾琳娜山西医科大学

学位级别：硕士

目的:maz参与细胞生理、病理状态下多种基因的转录调控,被调控的基因如基质金属蛋白酶、血清淀粉样蛋白A等与类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、心脏疾病、癌症等疾病的发生密切相关。目前研究报道多集中于maz介导下游基因的表达调控,而有... 详细信息

目的:maz参与细胞生理、病理状态下多种基因的转录调控,被调控的基因如基质金属蛋白酶、血清淀粉样蛋白A等与类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、心脏疾病、癌症等疾病的发生密切相关。目前研究报道多集中于maz介导下游基因的表达调控,而有关maz基因的转录调控的研究较少见。该基因的转录受到其启动子区的调控,多种转录因子参与其中。因此,本课题旨在通过对maz基因启动子区DNA序列进行转录因子结合位点分析,以发现潜在的转录因子顺式反应元件,并通过突变、竞争及EMSA技术研究这些顺式元件,为揭示maz基因转录调控机制奠定基础。方法:1.抽提细胞核蛋白:培养THP-1细胞,收集细胞,使用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取核蛋白,并通过BCA法进行蛋白定量。2.设计探针及生物素标记:通过PROMO软件分析maz基因转录起始点上游948 bp DNA序列潜在的转录因子结合位点,设计覆盖该序列的探针,并进行生物素标记。***试验:标记探针与核蛋白进行结合反应,电泳分析,转膜及化学发光显色。4.设计突变探针并进行EMSA分析。5.使用明确的转录因子结合元件进行竞争性EMSA分析。结果:1.本试验研究的maz基因启动子区DNA序列可能结合转录因子有40种之多,设计的32条探针仅有11条出现明显的DNA与蛋白结合条带。2.突变探针的EMSA试验及竞争性EMSA分析结果显示,maz基因启动子区距转录起始点-525504 nt的核酸序列可与转录因子Elk-1在体外相结合,其顺式作用元件为CTTCCCCCA。结论:本课题通过PROMO软件分析、EMSA试验及竞争性EMSA试验,对人类maz基因SAF-1转录启始点上游(-9481)的启动区潜在的转录因子结合位置进行了筛选。初步筛选检出一个新的转录因子结合位置,但尚需超迁移试验进一步鉴定;对于进一步研究maz基因的转录机制调控提供可靠的实验依据及EMSA技术支持。

关键词： maz基因 PROMO EMSA 顺式作用元件

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转录因子Elk-1调控maz基因启动子转录活性的体外研究

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中国细胞生物学学报 2017年第6期39卷 710-719页

作者：王博贾琳娜王小怡张潮王雪伟任剑波高哲郭大玮山西医科大学法医学院山西医科大学转化医学研究中心太原030001

该文旨在探究血清淀粉样蛋白A激活转录因子(serum amyloid A activating transcription factor,SAF),或称myc相关锌指蛋白(myc-associated zinc finger protein,maz)基因,除已证实的转录因子maz和Sp1(specificity protein 1)外,是否存在其他转录因子对maz基因启动子的转录激活具有调控作用。在生物信息学预测基础上,利用凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)筛查maz启动子区的转录因子结合位点。在EMSA筛查出maz启动子区包含转录激活因子ETS样蛋白1(ETS-like 1 transcription factor,Elk-1)结合位点后,通过该实验室构建的由maz启动子驱动的双荧光报告系统分析观察过表达转录因子Elk-1后maz启动子的转录激活情况。结果显示,转录因子Elk-1可结合maz启动子–525~–504 nt区的DNA序列;过表达Elk-1及Sp1均可使maz的两个转录子SAF-1和SAF-3转录水平降低且后一转录子被抑制尤甚。结果提示,Elk-1与Sp1共同参与调控maz基因两个转录子SAF-1和SAF-3的转录调控,在maz基因参与的细胞诸多生理疾病过程中,Elk-1可能通过该途径发挥其作用。

关键词： maz基因转录因子 Elk-1 凝胶电泳迁移实验双色荧光蛋白报告系统

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鼻咽癌精确放疗后远处转移分析及分子机制研究

鼻咽癌精确放疗后远处转移分析及分子机制研究

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作者：王建华第四军医大学

学位级别：硕士

目的回顾我科鼻咽癌患者临床资料,分析鼻咽癌精确放疗后的生存,预后及影响远处转移的因素,探讨鼻咽癌远处转移分子机制及临床危险因素。前期采用高通量全基因组芯片筛选技术发现鼻咽癌转移组织中maz高表达。但鼻咽癌患者放疗后转移是否... 详细信息

目的回顾我科鼻咽癌患者临床资料,分析鼻咽癌精确放疗后的生存,预后及影响远处转移的因素,探讨鼻咽癌远处转移分子机制及临床危险因素。前期采用高通量全基因组芯片筛选技术发现鼻咽癌转移组织中maz高表达。但鼻咽癌患者放疗后转移是否与maz高表达有关,目前尚不清楚,为此,我们在扩大鼻咽癌组织标本量基础上通过免疫组化验证maz表达与临床结果的相关性;通过Real-time PCR和Western Blot检测maz在鼻咽癌高低转移细胞系表达;在细胞系中验证maz具有促进鼻咽癌转移的作用,并初步探讨maz参与鼻咽癌转移的分子机制,为临床防治鼻咽癌转移提供新的靶点和策略。方法1.收集2006.01--2011.10西京医院放疗科233例来自中国西北地区鼻咽癌患者,所有患者治疗前均行鼻咽颅底全颈CT或MRI扫描,全程接受IMRT放疗或联合以铂类为主的化疗。2.收集80例鼻咽癌患者鼻咽部肿瘤组织标本,利用免疫组织化学法检测maz表达,分析maz与临床资料和预后的相关性;通过Real-time PCR和Western Blot检测maz在鼻咽癌高低转移细胞系表达。3.构建maz慢病毒载体,转染鼻咽癌细胞SUNE1-5-8F和SUNE1-6-10B。采用Transwell和划痕实验检测maz对鼻咽癌细胞侵袭、转移能力的影响。4.采用免疫共沉淀(Co-IP)、Real-time PCR和Western Blot检测maz表达与c-Myc的相互作用及下游转移相关基因的表达。结果1.本组鼻咽癌患者5年的无进展生存率、总生存率、无远处转移生存率及无局部区域复发生存率分别为56.8%、68.2%、68.7%及92.8%。全组病历中死亡74例,肿瘤相关死亡67例,占全部死亡病例的90.5%,其中有14例(20.9%)因鼻咽部位大出血死亡,53例(79.1%)死于远处转移。治疗后局部区域复发26例(11.2%),远处转移64例(27.5%),远处转移是鼻咽癌放疗失败的主要原因,单因素及多因素分析均显示:N分期是影响无远处转移生存率的独立危险因素。2.免疫组织化学染色显示,转移组鼻咽癌组织中maz表达明显高于无转移组(Pmaz表达与临床资料相关性分析显示:在远处转移组鼻咽癌组织中,maz表达升高与N分期有关(Pmaz在高转移鼻咽癌细胞系呈高表达。3.成功构建maz敲除慢病毒载体稳定表达细胞系,敲除maz可抑制鼻咽癌的转移及侵袭能力。4.免疫共沉淀(Co-IP)、Real-time PCR和Western Blot提示maz可能通过与c-Myc相互作用,促进鼻咽癌转移,其作用与调节MMP9、TGF-β以及COX-2表达有关。结论1.西北地区非高发区鼻咽癌精确放化疗后5年局部区域控制率超过90%,总生存率68.2%,远处转移是其治疗失败主要原因。无远处转移生存率与N分期有关。在高转移的鼻咽癌组织细胞及高转移细胞系中,maz的表达显著上调,与鼻咽癌的N分期密切相关。***表达促进鼻咽癌细胞的转移及侵袭。***可能通过与c-Myc相互作用,并通过调节MMP9、TGF-β以及COX-2促进鼻咽癌的转移过程,是鼻咽癌临床治疗又一新的靶点,具有一定理论指导意义及临床应用价值。

关键词：鼻咽癌调强适形/调强放射治疗远处转移 maz基因

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