MAZ基因启动子区顺式作用元件的EMSA分析

作     者：贾琳娜 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：郭大玮

授予年度：2016年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 0838[工学-公安技术] 100105[医学-法医学] 10[医学] 

主      题：MAZ基因 PROMO EMSA 顺式作用元件 

摘      要：目的:MAZ参与细胞生理、病理状态下多种基因的转录调控,被调控的基因如基质金属蛋白酶、血清淀粉样蛋白A等与类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、心脏疾病、癌症等疾病的发生密切相关。目前研究报道多集中于MAZ介导下游基因的表达调控,而有关MAZ基因的转录调控的研究较少见。该基因的转录受到其启动子区的调控,多种转录因子参与其中。因此,本课题旨在通过对MAZ基因启动子区DNA序列进行转录因子结合位点分析,以发现潜在的转录因子顺式反应元件,并通过突变、竞争及EMSA技术研究这些顺式元件,为揭示MAZ基因转录调控机制奠定基础。方法:1.抽提细胞核蛋白:培养THP-1细胞,收集细胞,使用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取核蛋白,并通过BCA法进行蛋白定量。2.设计探针及生物素标记:通过PROMO软件分析MAZ基因转录起始点上游948 bp DNA序列潜在的转录因子结合位点,设计覆盖该序列的探针,并进行生物素标记。***试验:标记探针与核蛋白进行结合反应,电泳分析,转膜及化学发光显色。4.设计突变探针并进行EMSA分析。5.使用明确的转录因子结合元件进行竞争性EMSA分析。结果:1.本试验研究的MAZ基因启动子区DNA序列可能结合转录因子有40种之多,设计的32条探针仅有11条出现明显的DNA与蛋白结合条带。2.突变探针的EMSA试验及竞争性EMSA分析结果显示,MAZ基因启动子区距转录起始点-525504 nt的核酸序列可与转录因子Elk-1在体外相结合,其顺式作用元件为CTTCCCCCA。结论:本课题通过PROMO软件分析、EMSA试验及竞争性EMSA试验,对人类MAZ基因SAF-1转录启始点上游(-9481)的启动区潜在的转录因子结合位置进行了筛选。初步筛选检出一个新的转录因子结合位置,但尚需超迁移试验进一步鉴定;对于进一步研究MAZ基因的转录机制调控提供可靠的实验依据及EMSA技术支持。