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M3受体亚型在NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及机制研究

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中国药理学通报 2017年第12期33卷 1661-1668页

作者：王士奇魏晓莉闫海涛军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的探讨m3R在NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及信号机制。方法 CCK-8法、划痕法和Transwell细胞侵袭实验检测m3R拮抗剂对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的影响;钙成像观察m3R拮抗剂对卡巴胆碱诱导的内钙增加的影响;Western blot验证m3... 详细信息

目的探讨m3R在NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及信号机制。方法 CCK-8法、划痕法和Transwell细胞侵袭实验检测m3R拮抗剂对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的影响;钙成像观察m3R拮抗剂对卡巴胆碱诱导的内钙增加的影响;Western blot验证m3R拮抗剂对细胞增殖、迁移和细胞周期相关信号分子蛋白表达的影响。结果m3R拮抗剂1.25~80μmol·L^(-1)作用48 h后,能明显抑制NSCLC细胞增殖,抑制效果为R2-8018>达非那新(Darifenacin),H1299>H460;p-Akt、p-GSK3β、cyclin D1蛋白表达水平均随m3R拮抗剂作用时间延长明显下降,p21蛋白表达水平明显上调;R2-8018处理后,H1299细胞迁移和侵袭能力下降,mmP-2蛋白表达水平明显下降。结论拮抗m3R抑制Akt/GSK3β信号通路,抑制cyclin D1活性并上调p21,阻滞细胞周期进程,进而抑制细胞增殖;并通过下调mmP-2抑制H1299细胞的迁移和侵袭。

关键词：非小细胞肺癌 M3受体增殖侵袭迁移基质金属蛋白酶2

隔盐隔姜灸“神阙”穴对逼尿肌反射亢进大鼠尿动力及逼尿肌m2、M3受体蛋白表达的影响

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中国针灸 2017年第4期37卷 401-405页

作者：刘艺王雪蕊李天然林丽婷石广霞付渊博刘存志天津中医药大学研究生院天津300193 首都医科大学附属北京中医医院针灸中心北京100010

目的:探讨隔盐隔姜灸"神阙"穴对逼尿肌反射亢进的效应及其作用机制。方法:成年雌性SD大鼠30只,其中20只大鼠采用T9完全脊髓横断方法建立逼尿肌反射亢进模型后随机分为模型组(10只)和艾灸组(10只),余10只作为假手术组行假脊髓横断手术。... 详细信息

目的:探讨隔盐隔姜灸"神阙"穴对逼尿肌反射亢进的效应及其作用机制。方法:成年雌性SD大鼠30只,其中20只大鼠采用T9完全脊髓横断方法建立逼尿肌反射亢进模型后随机分为模型组(10只)和艾灸组(10只),余10只作为假手术组行假脊髓横断手术。艾灸组大鼠出现尿失禁(约造模2周)后,给以隔盐隔姜灸"神阙"穴治疗,每次灸3壮,每日1次,连续治疗7d。各组在干预结束后,进行尿流动力学检测,之后取膀胱逼尿肌,采用免疫蛋白印迹法检测m2、M3受体蛋白表达情况。结果:与假手术组大鼠相比,模型组大鼠排尿间期明显较短(Pm2受体蛋白表达显著升高(PM3受体蛋白表达无明显变化(P>0.05);与模型组相比,艾灸组大鼠排尿间期明显较长(Pm2受体蛋白表达显著下降(PM3受体蛋白表达无明显变化(P>0.05);与假手术组相比,艾灸组以上指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:隔盐隔姜灸"神阙"穴能抑制脊髓横断大鼠的膀胱过度活动状态,其作用机制可能与减少膀胱逼尿肌m2受体蛋白的表达、抑制逼尿肌的过度收缩有关。

关键词：逼尿肌反射亢进隔盐隔姜灸穴,神阙尿动力参数 m2受体 M3受体

比较电针“合谷”“足三里”穴对IBS模型大鼠结肠动力及结肠m_3受体表达的影响

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北京中医药大学学报 2017年第12期40卷 1044-1049页

作者：蓝莹高誉珊朱文莲任晓暄郭孟玮王珊吴艳英李凯歌谭莉华吉毛先北京中医药大学针灸推拿学院北京100029 北京中医药大学中医学院

目的观察并比较电针"合谷""足三里"穴对肠易激综合征(IBS)模型大鼠结肠动力及结肠m_3受体免疫反应物阳性表达的影响,初步探讨电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS的效应差异及结肠动力改变的相关机制。方法选取新生wistar大鼠40... 详细信息

目的观察并比较电针"合谷""足三里"穴对肠易激综合征(IBS)模型大鼠结肠动力及结肠m_3受体免疫反应物阳性表达的影响,初步探讨电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS的效应差异及结肠动力改变的相关机制。方法选取新生wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、模型对照组、合谷组和足三里组。除空白对照组外,均采用新生期母婴分离、醋酸灌肠及结直肠扩张刺激(CRD)的方法联合制备IBS大鼠模型。大鼠9周龄时,合谷组和足三里组分别给予电针(EA)干预,隔日1次,共5次。空白对照组及模型对照组不予干预。治疗结束后,按照Bristol大便分类法观察电针前后IBS大鼠的便型,采用腹部回撤反射(AWR)对大鼠进行肠道敏感性及平滑肌收缩强度评估,观察潜伏期、收缩波个数、起始波压力值;采用免疫组织化学法检测结肠m_3受体的表达。结果与针前相比,针后合谷组及足三里组大鼠的大便评分显著降低(Pm_3受体免疫反应物阳性表达水平明显增强(Pm_3受体免疫反应物阳性表达水平增强(Pm_3受体免疫反应物阳性表达水平明显下降(Pm_3受体免疫反应物阳性表达水平下降(P<0.05)。结论电针"合谷""足三里"穴均可抑制IBS模型大鼠肠道收缩,改善肠道敏感性,缓解IBS症状。但"合谷"穴缓解腹痛效果更佳,而"足三里"穴减轻腹泻作用更强。说明电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS疗效具有经穴效应特异性。

关键词：肠易激综合征合谷足三里 M3受体肠道动力大鼠

原发性青光眼患者与正常人眼虹膜组织神经及M3受体的检测

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原发性青光眼患者与正常人眼虹膜组织神经及M3受体的检测

作者：陈思源滨州医学院

学位级别：硕士

目的:观察原发性青光眼患者虹膜组织病理学改变并检测其虹膜神经及M3受体,与正常人眼虹膜比较,初步探讨虹膜神经及M3受体在原发性青光眼中的改变及意义。方法:原发性闭角型青光眼(primary angle-closure glaucoma,PACG)患者20只眼,原发... 详细信息

目的:观察原发性青光眼患者虹膜组织病理学改变并检测其虹膜神经及M3受体,与正常人眼虹膜比较,初步探讨虹膜神经及M3受体在原发性青光眼中的改变及意义。方法:原发性闭角型青光眼(primary angle-closure glaucoma,PACG)患者20只眼,原发性开角型青光眼(primary open-angleglaucoma,POAG)患者15只眼,于小梁切除术中剪取周边虹膜组织,取15只用于角膜移植的正常供体眼周边虹膜组织,对三组切除组织行HE染色观察组织病理学变化,免疫组织化学染色及硝酸银染色分别检测三组虹膜神经纤维与M3受体并进行比较。取年龄匹配的PACG、POAG患者及正常人各3只眼,取其周边虹膜组织行透射电镜观察。取15只正常供体眼周边、中周及瞳孔缘3处虹膜组织,行免疫组织化学检测M3受体。取1只正常供体人眼虹膜组织行Western blot检测M3受体蛋白的表达。结果:HE染色见PACG患者周边虹膜组织中可见增生的色素细胞多位于前表面层。POAG患者周边虹膜组织中色素细胞散在分布,胞浆内色素颗粒较少。透射电镜下可见正常虹膜组织中细胞胞浆丰富,细胞核清晰,可见发达的高尔基体以及丰富的粗面内质网,细胞外可见互相平行的胶原纤维。PACG患者虹膜组织胞浆内色素颗粒增多,线粒体数量增多,部分呈空泡样变,细胞外可见走行紊乱的胶原纤维。Western blot检测,正常虹膜组织中可见m3蛋白的表达。PACG患者虹膜组织中神经纤维检测指标IOD值高于正常人眼,M3受体数量检测指标IOD低于正常人眼,差异均具有统计学意义(PM3受体数量较正常虹膜变化无明显差异(P>0.05)。正常虹膜组织三个部位中M3受体检测指标IOD差异无统计学意义(P>0.05)。结论:三组虹膜中神经及M3受体均有阳性表达。正常人眼虹膜组织三个部位M3受体分布未见差异。POAG患者虹膜组织胞浆内色素颗粒减少,POAG患者虹膜组织神经纤维较正常人眼增多,M3受体表达与正常人眼虹膜比较无显著性差异。PACG虹膜组织细胞胞浆内色素颗粒增多,线粒体数量增多,部分线粒体空泡化改变。PACG患者虹膜神经数量较正常虹膜数量增加,M3受体数量较正常虹膜数量减少。神经及受体因素可能作为病理基础之一参与了PACG的发病。

关键词：原发性青光眼虹膜神经 M3受体免疫组化正常人眼

重症肌无力患者不同病理类型的胸腺中M3受体的表达及其与预后的关系

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重症肌无力患者不同病理类型的胸腺中M3受体的表达及其与预后的关...

作者：庞天宝郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的重症肌无力（myasthenia Gravis,mG）是一种主要由抗体介导、补体参与、累及神经肌肉接头（Neuromuscular Junction,NmJ）的自身免疫性疾病,患者常伴有胸腺结构或功能的异常。非神经元型胆碱能系统（Non-neuronal Cholinergic... 详细信息

背景和目的重症肌无力（myasthenia Gravis,mG）是一种主要由抗体介导、补体参与、累及神经肌肉接头（Neuromuscular Junction,NmJ）的自身免疫性疾病,患者常伴有胸腺结构或功能的异常。非神经元型胆碱能系统（Non-neuronal Cholinergic System,NNCS）广泛表达于各种组织包括胸腺。前期研究观察到mG患者胸腺组织NNCS中的α1、α9、m3、α2、β2等受体表达异常,其中α1、α9、α2、β2受体在mG患者不同病理类型胸腺中的表达情况已被测定,但M3受体尚未明确。毒蕈碱型乙酰胆碱受体（muscarinic Acetylcholine Receptors,mAChRs）m3可以通过介导淋巴细胞中Ca2+信号传导、触发核信号传导从而引起免疫细胞数量或功能的变化,可能参与了mG的发病过程。本研究检测了mG患者不同病理类型的胸腺中M3受体的表达情况并分析了其与外科治疗预后的相关性,旨在探索M3受体在mG发病机制中的作用并为mG的诊疗提供新的思路。材料与方法1.一般临床资料:选取2012年8月至2018年6月于郑州大学第二附属医院胸外科行胸腺切除治疗且病历资料完整的mG患者共计145例,搜集患者的基本信息及检验检查资料。对照组选取同期在我院接受心脏手术的患者15例。2.检测M3受体在不同病理类型胸腺中的表达:将mG患者不同病理类型的胸腺及对照组胸腺组织制成石蜡切片,免疫组化检测M3受体在不同病理类型胸腺中的表达情况,依据细胞的着色率及着色程度进行评分。3.不同病理类型胸腺中M3受体的表达与预后的相关性分析:根据mGFA干预后状态评估标准对患者的预后状态进行随访评估,分析mG患者不同病理类型的胸腺中M3受体的表达水平与预后的相关性。4.统计学分析:本研究所涉及数据采用SPSS21.0统计学软件进行处理。符合正态分布的计量资料组间比较采用t检验,不符合正态分布的采用秩和检验,分类变量资料的关联性分析采用卡方检验或Fisher精确检验。检验水准α=0.05。结果入组的mG患者共计145例,其中胸腺瘤患者65例,胸腺增生患者25例,胸腺萎缩患者55例。M3受体在mG患者不同病理类型的胸腺及正常胸腺中均有表达,主要分布于细胞膜及细胞质,少量分布于细胞核;与对照组相比,增生型胸腺中M3受体的表达显著降低（p＜0.05）,胸腺瘤组织中M3受体的表达也显著降低（p＜0.05）,萎缩型胸腺中M3受体的表达与正常胸腺相比无显著差异（p＞0.05）。随访到患者120例,随访时间7～77个月,中位随访时间50个月,完全持久缓解率达28.3%,总体临床缓解率（CSR+PR+mm）达72.5%,总体有效率（CSR+PR+mm+I）达89.2%。将mG患者不同病理类型的胸腺中M3受体的表达水平与预后进行相关性分析,结果显示在增生型胸腺中M3受体的表达水平与预后呈负相关（p＜0.05）,在萎缩型胸腺与胸腺瘤中的表达水平与预后无显著相关性（p＞0.05）。结论（1）M3受体在mG患者不同病理类型的胸腺及正常胸腺中均有丰富的表达,主要分布于细胞膜及细胞质,少量分布于细胞核;（2）M3受体在mG患者不同病理类型的胸腺中表达水平存在差异,其中在增生型胸腺与胸腺瘤中的表达水平较正常胸腺组织均显著降低,在萎缩型胸腺中的表达水平与正常胸腺相比无显著差异;（3）增生型胸腺中M3受体的表达水平与预后缓解情况呈负相关,萎缩型胸腺与胸腺瘤中M3受体的表达水平与预后无显著相关性,这种表达的差异可能通过影响细胞的凋亡机制在mG的发病中发挥重要作用。

关键词：重症肌无力胸腺 M3受体病理类型预后

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选择性M3受体拮抗剂的研究进展

化学通报 2012年第4期75卷 312-317页

作者：康从民吕英涛代英杰马明建王伟宁青岛科技大学化工学院青岛266042

M3受体是毒蕈碱型乙酰胆碱受体的亚型之一,在人体内分布广泛。选择性M3受体拮抗剂可以竞争性地与M3受体结合,主要用于膀胱过度活动症(OAB)、慢性阻塞性肺病(COPD)和肠道易激综合症(IBS)等疾病的治疗。与非选择性拮抗剂相比,选择性m3受... 详细信息

M3受体是毒蕈碱型乙酰胆碱受体的亚型之一,在人体内分布广泛。选择性M3受体拮抗剂可以竞争性地与M3受体结合,主要用于膀胱过度活动症(OAB)、慢性阻塞性肺病(COPD)和肠道易激综合症(IBS)等疾病的治疗。与非选择性拮抗剂相比,选择性M3受体拮抗剂对中枢神经以及心脏的副作用大大降低。本文对已上市及处在不同研究阶段的选择性M3受体拮抗剂进行了综述。

关键词： M3受体拮抗剂结构改造选择性

盐酸戊乙奎醚上调β抑制蛋白-1与M3受体的关系研究

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重庆医学 2017年第13期46卷 1750-1752页

作者：程斌王轶芃詹佳武汉大学中南医院麻醉科 430071

目的探讨在脂多糖(LPS)致肺微血管内皮损伤中盐酸戊乙奎醚(PHC)上调β抑制蛋白-1(β-arrestin-1)的作用与M3受体的关系。方法 m3shRNA转染肺微血管内皮细胞和正常肺微血管内皮细胞,分为LPS组(A)、盐酸戊乙奎醚+LPS组(B)、LPS+m3shRNA转... 详细信息

目的探讨在脂多糖(LPS)致肺微血管内皮损伤中盐酸戊乙奎醚(PHC)上调β抑制蛋白-1(β-arrestin-1)的作用与M3受体的关系。方法 m3shRNA转染肺微血管内皮细胞和正常肺微血管内皮细胞,分为LPS组(A)、盐酸戊乙奎醚+LPS组(B)、LPS+m3shRNA转染组(C)和盐酸戊乙奎醚+LPS+m3shRNA转染组(D),激光共聚焦观察细胞骨架变化,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,免疫荧光化学法检测血管内皮细胞黏附分子-1(VCAm-1)蛋白表达,Western blot法和实时定量PCR法检测β-arrestin-1表达。结果与A组、C组比较,B组、D组肌动蛋白骨架排列整齐,LDH水平和VCAm-1蛋白表达降低,β-arrestin-1表达升高;与A组、B组相比较,C组、D组肌动蛋白骨架排列整齐,LDH水平和VCAm-1蛋白表达降低,β-arrestin-1表达无明显改变。结论沉默M3受体有助于降低脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞损伤。但盐酸戊乙奎醚上调β-arrestin-1的作用与M3受体是否存在无必然联系。

关键词： M3受体盐酸戊乙奎醚 β抑制蛋白-1 RNA干扰

M3受体亚型介导内毒素诱导兔离体肺动脉舒张反应的研究

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中国呼吸与危重监护杂志 2016年第5期15卷 506-510页

作者：索良源于泓波张锦中国医科大学肿瘤医院辽宁省肿瘤医院麻醉科辽宁沈阳110042 沈阳市骨科医院麻醉科辽宁沈阳110044 中国医科大学附属盛京医院麻醉科辽宁沈阳110004

目的探讨m毒蕈碱受体（muscarinic receptor m）亚型m3对内毒素诱导的肺动脉环张力的调节作用及在内毒素作用下M3受体的变化,以探讨感染性休克肺动脉血管反应性改变的机制。方法选择健康雄性新西兰大白兔26只,体重2.0-2.5 kg,随机分2... 详细信息

目的探讨m毒蕈碱受体（muscarinic receptor m）亚型m3对内毒素诱导的肺动脉环张力的调节作用及在内毒素作用下M3受体的变化,以探讨感染性休克肺动脉血管反应性改变的机制。方法选择健康雄性新西兰大白兔26只,体重2.0-2.5 kg,随机分2组：盐水加达非那新正常组（N组,n=45）,内毒素加达非那新组（L组,n=48）。通过离体血管环技术观察正常及M3受体亚型阻断剂达非那新不同剂量（100、10、1、0.1和0.01μmol/L）分别预孵育后血管对苯肾上腺素（PE1μmol/L）及乙酰胆碱（ACH 1、10和100μmol/L）的张力变化。结果（1）正常组肺动脉对ACH累计曲线的舒张百分比分别为（0.095±0.034）%,（0.150±0.036）%,（0.445±0.090）%,用内毒素（4μg/m L,4 h）处理后分别为（0.044±0.016）%,（0.093±0.029）%,（0.311±0.028）%。（2）达非那新对不同浓度ACH（1、10和100μmol/L）反应得出的EC50值分别为正常组1.483、2.757和2.958,内毒素组6.015、6.242和6.411。（3）达非那新对不同浓度的ACH（1、10和100μmol/L）反应得出的内在活性a值分别为正常组0.014 6、0.032 3和0.082 5,内毒素组0.012 4、0.024 5和0.055 6。结论内毒素孵育降低了肺动脉对ACH的舒张反应,M3受体亚型介导了此舒张反应;内毒素减低了M3受体亚型的内在活性。内毒素使M3受体亚型内在活性降低是内毒素作用下肺动脉对ACH舒张反应降低的作用机制之一,也可能是感染性休克时肺动脉高压形成的作用机制之一。

关键词：舒张反应 M3受体内在活性内毒素休克内毒素诱导感染性休克受体亚型阻断剂血管反应性毒蕈碱受体

M3受体亚型在NSCLC细胞生长增殖、侵袭和迁移中的作用及机制研究

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M3受体亚型在NSCLC细胞生长增殖、侵袭和迁移中的作用及机制研究

作者：王士奇中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

肺癌是发病率和死亡率增长最快,对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。肺癌最常见的组织学分类为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC),其中80%以上的肺癌病例属于非小细胞肺... 详细信息

肺癌是发病率和死亡率增长最快,对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。肺癌最常见的组织学分类为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC),其中80%以上的肺癌病例属于非小细胞肺癌。非小细胞肺癌又可分为鳞状细胞癌(25-30%),腺癌(35-40%)和大细胞癌(10-15%)。早期非小细胞肺癌治疗主要以手术切除为主,常规化疗是联合应用铂类药物(顺铂、卡铂)与抗代谢药、抗微管药或抗拓扑异构酶药,由于毒副反应以及预后不良,仍不能有效提高患者的5年生存率,近年来药物靶向治疗(主要包括以表皮生长因子受体为靶点的酪氨酸激酶抑制剂或单抗,和以肺癌血管生成为靶点的血管内皮生长因子抑制剂或单抗)以及针对患者自身免疫系统的免疫刺激单抗(免疫检查点阻断剂,包括Ipilimumab,Nivolumab,mK-3475等)在特定人群内取得了可喜进展,引发了人们对肺癌发病机制的深入思考和多方位作用靶点的研究,针对其具体的发病机制探索发展新的治疗方法将有望推进肺癌个体化治疗的进程。乙酰胆碱(ACh)是由神经细胞合成的经典神经递质,通过激活乙酰胆碱受体(ACh R)的两个家族成员——毒蕈碱型(m ACh R)和烟碱型(n ACh R)胆碱受体发挥作用。越来越多的研究表明,除神经细胞外,多种肿瘤细胞均可合成和分泌乙酰胆碱作为一种生长因子,参与细胞的生长增殖,抵抗凋亡,血管发生,转移侵袭,促进癌症的进程。这种非神经元胆碱能系统极有可能是调控肿瘤发展进程的另一个重要的信号系统。许多实验室的工作表明,在恶性肿瘤表达的多种m ACh R亚型中,与正常组织相比M3受体表达显著上调,且与肿瘤的预后不良相关。有研究表明,M3受体选择性拮抗剂能够抑制小细胞肺癌细胞增殖并降低裸鼠移植瘤mAPK磷酸化水平,为肺癌的预防和治疗提供了新的药物研发策略。有研究报道,在正常角质化细胞、黑色素瘤细胞、m受体转染的CHO细胞及SCLC细胞上,激活m1或M3受体可改变细胞黏附分子的活性,可能与肿瘤的转移与浸润相关。因此有关M3受体的研究受到极大关注,成为相关研究领域的热点。本研究的重点是观察M3受体拮抗剂对2种NSCLC细胞生长增殖、运动和迁移中的影响,并探索M3受体参与非小细胞肺癌发展进程的信号通路和关键分子,预期研究结果将有助于确认M3受体是否可作为抗肿瘤靶标,将为确立胆碱能受体系统在肿瘤生长调控中的地位提供实验依据。实验方法如下:(1)以CCK-8法测定M3受体拮抗剂、激动剂以及PKC抑制剂对体外培养的NSCLC细胞增殖的影响。(2)应用激光共聚焦显微镜监测激动剂单独给药以及拮抗剂和激动剂伴随给药NSCLC细胞内游离钙离子的动态变化。(3)伤口愈合实验检测M3受体拮抗剂对NSCLC细胞迁移能力的影响。(4)Transwell侵袭实验检测M3受体拮抗剂对NSCLC细胞侵袭能力的影响。(5)利用脂质体介导的si RNA转染技术敲减M3受体并检测敲减M3受体后对NSCLC细胞生长活力的影响。(6)以Western蛋白印迹法检测M3受体拮抗剂对NSCLC细胞增殖信号通路(Akt、mAPK)、细胞周期调节蛋白(cyclin D1、CDK4、p21)以及迁移相关分子(mmP-2)蛋白表达水平的影响。实验结果如下:(1)本研究首先观察M3受体拮抗剂在(1.25μm0μm)剂量范围内对NSCLC细胞生长增殖的影响,实验结果显示,R2-8018与达非那新体外能够浓度依赖性地抑制H1299细胞和H460细胞的增殖,其中R2-8018抑制H1299细胞增殖的效果更明显,作用48 h的IC50值为10.6μmol/L。(2)外源性补充激动剂卡巴胆碱和氯化乙酰胆碱无法促进H1299细胞和H460细胞增殖。(3)转染m3 si RNA 72 h之后检测检测敲减效率,western蛋白印迹法结果显示,转染m3 si RNA显著降低M3受体的表达(pM3受体,H1299细胞增殖明显被抑制,并且随si RNA作用时间延长,抑制作用更显著(48 h:pM3受体能够抑制H1299细胞增殖。(4)激光共聚焦显微镜监测细胞内钙离子的动态变化,30μm的卡巴胆碱能够引起H1299细胞钙信号增强,而给予拮抗剂达非那新预处理30 min的H1299细胞30μm卡巴胆碱则观察不到钙信号的增强,达非那新能够完全阻断卡巴胆碱引起的细胞钙信号增强。(5)蛋白激酶C抑制剂Staurosporine体外对H1299细胞存活具有明显的抑制作用,并且R2-8018可浓度依赖性地降低H1299细胞PKC-α蛋白表达(10μm:pm:p<0.01)。(6)R2-8018作用H1299细胞24 h,可显著抑制H129

关键词：非小细胞肺癌 M3受体增殖迁移侵袭