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中国家禽 2024年第2期46卷 59-67页

作者：曾敏倩焦嘉杰左晓昕王军宁赵艳红冯磊卢宇吕芳周斌侯继波南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300 江苏省食品质量安全重点实验室国家重点实验室培育基地江苏南京210014 江苏大学药学院江苏镇江212013

为探索新城疫病毒不耐热毒株la sota热损伤靶点,以期为新型耐热疫苗研发提供理论依据,试验通过检测加热前后la sota株的吸附及内化功能,考察纤突蛋白HN和F活性变化情况,以及核衣壳完整性,综合分析新城疫病毒热损伤靶点。结果显示:37℃加... 详细信息

为探索新城疫病毒不耐热毒株la sota热损伤靶点,以期为新型耐热疫苗研发提供理论依据,试验通过检测加热前后la sota株的吸附及内化功能,考察纤突蛋白HN和F活性变化情况,以及核衣壳完整性,综合分析新城疫病毒热损伤靶点。结果显示:37℃加热24 h后F蛋白活性首先受损,表现为内化功能显著下降(0.01la sota株热损伤靶点与加热温度和时间密切相关:中温下(≤56℃)病毒热损伤靶点主要在HN和F蛋白,高温下(≥80℃)病毒热损伤靶点为纤突蛋白和核衣壳;纤突蛋白的热敏感性高于核衣壳,且F蛋白受损早于HN蛋白。

关键词：新城疫病毒 la sota株热损伤靶点吸附内化纤突蛋白核衣壳

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新城疫病毒la sota株F和HN基因的克隆表达及免疫原性分析

新城疫病毒La Sota株F和HN基因的克隆表达及免疫原性分析

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作者：符芳河北农业大学

学位级别：硕士

新城疫是危害养禽业的主要疾病之一。近年来,新城疫的爆发出现了许多新特点,免疫失败报道增多,甚至抗体水平较高的鸡群也时常发病。为控制新城疫的爆发,急需研制基因工程苗。以本实验室保存的NDV lasota株全基因作为模板,根据Genb... 详细信息

新城疫是危害养禽业的主要疾病之一。近年来,新城疫的爆发出现了许多新特点,免疫失败报道增多,甚至抗体水平较高的鸡群也时常发病。为控制新城疫的爆发,急需研制基因工程苗。以本实验室保存的NDV lasota株全基因作为模板,根据Genbank已经发表的序列设计两对引物,采用RT-PCR技术人工扩增出了NDV lasota株F、HN基因,分别将其克隆到PGEM-T easy载体中,再转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,得到的转化子经分子量比较、PCR鉴定和酶切分析筛选阳性克隆。结果表明,作者得到的阳性重组子(PGEM-F、PGEM-HN)中含有F和HN基因,且是正确插入到载体中的。F基因的测序结果与B1、V4、Roakin、JS06、F48E9毒株的基因序列相比,核苷酸序列同源性为84.7%-99.9%,氨基酸同源性为88.1%-99.6%;HN基因的测序结果与B1、V4、Roakin、YG、F48E9毒株相比,核苷酸序列同源性为82.5%-99.6%,氨基酸同源性为88.1%-99.9%。然后将克隆化F、HN基因亚克隆到PET-32a(+)载体上,得到的转化子经PCR鉴定和酶切分析,筛选出符合阅读框的重组子,构建成重组表达质粒PET-F、PET-HN,再将重组表达质粒转化进宿主菌BL(DE3),在IPTG诱导下表达出约为83kd和86kd的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测证实上述两段基因片段均获得高效表达且表达产物具有免疫学活性。在优化了表达条件后,对重组蛋白进行了大量表达并纯化,用于免疫六周龄雄性昆明小鼠,免疫小鼠均产生较高的抗体水平。由此表明,体外表达的重组蛋白保留了天然蛋白所具有的抗原性。本研究为进一步研究以上两个功能区的生物学活性及在不同毒株中共同的抗原表位奠定基础,也为研究基因工程疫苗创造了一定的条件。

关键词：新城疫病毒(NDV) la sota株 F基因 HN基因原核表达免疫原性

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新城疫活疫苗la sota株免疫增强了禽网状内皮组织增生病毒对SPF鸡的致病作用

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中国动物传染病学报 2022年第3期30卷 100-105页

作者：张亚文季晓琳张智慧苏奇常爽徐中清王芳赵鹏山东农业大学动物科技学院泰安271018 中国兽医药品监察所北京100081

禽网状内皮组织增生病毒(REV)是鸡群中常见的垂直传播性病毒之一,感染后可导致鸡群发生严重的免疫抑制,对于一些未净化REV的鸡群,在免疫新城疫活疫苗后某些鸡会加重发病趋势,怀疑通过鸡胚感染的REV和新城疫活疫苗在体内发挥了协同致病作... 详细信息

禽网状内皮组织增生病毒(REV)是鸡群中常见的垂直传播性病毒之一,感染后可导致鸡群发生严重的免疫抑制,对于一些未净化REV的鸡群,在免疫新城疫活疫苗后某些鸡会加重发病趋势,怀疑通过鸡胚感染的REV和新城疫活疫苗在体内发挥了协同致病作用,为此本研究开展了模拟实验。从100枚SPF鸡胚中随机选择50枚SPF鸡胚通过卵黄囊接种REV,剩余50枚SPF鸡胚通过卵黄囊接种灭菌PBS。待孵化出雏后鸡胚接毒组和空白鸡胚对照组各取20只SPF鸡于7日龄时免疫新城疫活疫苗(la sota株),同时鸡胚接毒组和空白鸡胚对照组各取20只SPF鸡于7日龄时接种PBS。结果显示:携带有REV的雏鸡再免疫活疫苗la sota株后首先出现死亡,其体重明显低于其他组SPF鸡体重,免疫器官损伤程度比REV单独感染组更加严重,且显著高于对照组。本研究结果表明新城疫活疫苗la sota株免疫后增强了REV对SPF鸡的致病作用,提示我们选择净化种源的重要性。

关键词：禽网状内皮组织增生病毒新城疫活疫苗 la sota株协同致病作用

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鸡新城疫病毒V4株病理损伤的动态研究

鸡新城疫病毒V4株病理损伤的动态研究

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作者：沙永刚华中农业大学

学位级别：硕士

240只1日龄雏鸡随机分为NDV4株感染组(V组)、la sota株感染组(L组)、空白对照组(C组)3个组，每组80只，分群饲养，8日龄时接种，V、L、C三个组分别滴鼻NDV4(10EID)0.1ml／只、la sota(10EID)0.1ml／只、生理盐水0.1ml／只。于接种后分... 详细信息

240只1日龄雏鸡随机分为NDV4株感染组(V组)、la sota株感染组(L组)、空白对照组(C组)3个组，每组80只，分群饲养，8日龄时接种，V、L、C三个组分别滴鼻NDV4(10EID)0.1ml／只、la sota(10EID)0.1ml／只、生理盐水0.1ml／只。于接种后分批采血、剖杀、记录病变、取材。通过H.E染色，镜检观察各组织器官不同时期的病理变化;运用透射电镜观察超微结构变化;进行血凝(HA)和间接血凝抑制(HI)试验，检测血清HI抗体滴度;作瑞氏染色进行白细胞分类计数，作非特异性酯酶组织化学染色法观察血液AENE淋巴细胞比例，测定细胞免疫水平;进行体重测定来观察免疫与生长状况的关系。通过运用血清学、免疫组织化学及光镜、电镜等组织学观察方法对所建立的试验模型进行了动态研究。结果表明，NDV4、la sota分别接种鸡后，特定的组织器官均会出现一定的眼观病变、光镜下病变及超微结构病变，但两者出现的组织器官及病变的程度不同。接种前，各组试验鸡正常：在接种后前期，V组及L组均有少数鸡出现轻微呼吸道症状，后期症状逐渐消失。剖检发现，V组眼观病变出现在接种28d以后，主要发生于肠、脾脏、胸腺、肺、肝脏等脏器，以消化道的出血病变最为明显：L组眼观病变主要出现在接种21d以后，主要发生于肺、胸腺、盲扁、脾脏、肠等脏器，以肺呈灰白色或出现黑色点状的病变最多见。光镜观察证实，V组的主要病理变化为十二指肠的出血性炎症;L组的主要病理变化为轻度到中度的间质性肺炎。应用透射电镜对十二指肠进行观察发现，V组、L组上皮细胞均出现程度不同的内质网扩张和线粒体肿胀，V组还见到新城疫病毒粒子、板层小体和淋巴细胞坏死。体重测定显示，V组平均体重显著大于L组。血液学比较研究发现，V组鸡在接种后HI抗体滴度早于L组出现上升，峰值也早L组7d出现，后期水平较L组更平稳的，但显著低于L组。V组与L组外周血淋巴细胞均增多，V组早于L组达到峰值，且水平高于L组，C组无明显变化;V组与L组单核细胞均持续大增幅增多，但前者水平显著高于后者，C组有较小上升;V组和L组的异嗜性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞呈现下降趋势。V组和L组的血液ANAE淋巴细胞比例(％)均呈下降趋势，但V组水平始终高于L组。华中农业大学2003届硕士学位论文据此作者认为，NDv4的免疫损伤以鸡的消化道为主，而la sota的免疫损伤以呼吸道为主;V组的组织病理变化均轻于L组，且V组鸡的增重显著高于L组，因而V4较la sota的损伤更轻;V组的淋巴细胞、单核细胞数量均呈上升的趋势，表明该病毒株接种后激发了机体的非特异性和特异性免疫反应:V组ANAE一淋巴细胞比例(%)呈下降的趋势，且在病理组织观察中可见脾的生发中心显著增生，表明B细胞的数量是增加的;另外，V4株诱导的Hl抗体水平虽比la sota株低，但产生时间较早，在后期能稳定地维持在一定水平，表明NDV4株能诱导产生稳定的体液免疫水平。由此可以初步认定，细胞免疫和体液免疫在NDV4免疫应答中均发挥着重要的作用。综上所述，NDV4是一种相对安全而有效的疫苗毒株，具有极大的应用价值和推广潜力。

关键词：鸡新城疫 V4株 la sota株病理损伤

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