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Inhibition of lox-1 alleviates the proinflammatory effects of high-mobility group box 1 in Aspergillus fumigatus keratitis

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International Journal of Ophthalmology(English edition) 2019年第6期12卷 898-903页

作者： Jia-Qian Jiang Cui Li Cong-Xian Cui Yu-Na Ma Gui-Qiu Zhao Xu-Dong Peng Qiang Xu Qian Wang Guo-Qiang Zhu Chen-Yu Li Department of Ophthalmology the Affiliated Hospital of Qingdao University

AIM: To investigate the inflammatory amplification effect of high-mobility group box 1(HMGB1) in Aspergillus fumigatus(A. fumigatus) keratitis and the relationship between lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor 1(lox-1) and HMGB1 in keratitis immune ***: Phosphate buffer saline(PBS), and Boxb were injected into BALB/c mice subconjunctivally before the corneas were infected with A. fumigatus. RAW264.7 macrophages and neutrophils were pretreated with PBS and Boxb to determine the HMGB1 inflammatory amplification effects. Abdominal cavity extracted macrophages were pretreated with Boxb and Poly(I)(a lox-1 inhibitor) before A. fumigatus hyphae stimulation to prove the the relationship between the two molecules. lox-1, interleukin-1β(IL-1β), tumor necrosis factor-α(TNF-α), macrophage inflammatory protein-2(MIP-2) and IL-10 were assessed by polymerase chain reaction and Western ***: Pretreatment with Boxb exacerbated corneal inflammation. In macrophages and neutrophils, A. fumigatus induced lox-1, IL-1β, TNF-α and MIP-2 expression in Boxb group was higher than those in PBS group. Poly(I) treatments before infection alleviated the proinflammatory effects of Boxb in abdominal cavity extracted macrophages. Pretreatment with Boxb did not influence Dectin-1 mRNA levels in macrophages and ***: In fungal keratitis, HMGB1 is a proinflammatory factor in the first line of immune response. HMGB1 mainly stimulates neutrophils and macrophages to produce inflammatory cytokines and chemokines during the immune response. lox-1 participates in HMGB1 induced inflammatory exacerbation in A. fumigatus keratitis.

关键词： Aspergillus fumigatus keratitis high-mobility group box 1 lox-1

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Thymol Protects against Aspergillus Fumigatus Keratitis by Inhibiting the lox-1/IL-1βSignaling Pathway

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Current Medical Science 2022年第3期42卷 620-628页

作者： Li-mei WANG Hua YANG Hai-jing YAN Rui-feng GE Yun-xiao WANG Sha-sha XUE Lin LI Le-yu LYU Cheng-ye CHE Department of Ophthalmology the Affiliated Hospital of Qingdao UniversityQingdao 266003China Department of Otorhinolaryngology-Head and Neck Surgery the Affiliated Hospital of Qingdao UniversityQingdao 266003China

Objective To explore the anti-inflammatory effects and mechanisms of action of thymol in Aspergillus fumigatus(***)*** The minimum inhibitory concentration of thymol against *** was *** characterize the anti-inflammatory effects of thymol,mouse corneas and human corneal epithelial cells were pretreated with thymol or dimethyl sulfoxide(DMSO)before infection with *** ***-lamp microscopy,immunohistochemistry,myeloperoxidase detection,quantitative real-time polymerase chain reaction,and Western blotting were used to assess *** and macrophage recruitment,in addition to the secretion of lox-1 and IL-1β,were quantified to evaluate the relative contribution of thymol to the inflammatory *** We confirmed that the growth of *** was directly inhibited by *** contrast with the DMSO group,there was a lower degree of inflammation in the mouse corneas of the thymol-pretreated *** was characterized by significantly lower clinical scores,less inflammatory cell infiltration,and lower expression of lox-1 and IL-1β.Similarly,in vitro experiments indicated that the production of lox-1 and IL-1βwas significantly inhibited after thymol treatment,in contrast with the DMSO-pretreated *** Our findings demonstrate that thymol exerted a direct fungistatic activity on ***,thymol played a protective role in fungal keratitis by inhibiting lox-1/IL-1βsignaling pathway and reducing the recruitment of neutrophils and macrophages.

关键词： keratitis Aspergillus fumigatus thymol lox-1 IL-1β

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lox-1研究进展

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中国药理学通报 2003年第3期19卷 245-248页

作者：李玉娟杜冠华中国医学科学院.中国协和医科大学药物研究所北京100050

lox 1是一种Ⅱ型膜蛋白 ,按结构分类 ,它属于C型选择素家族。它可以结合、中和、降解ox LDL ,还具有介导血小板与内皮细胞的相互作用等功能。lox 1的表达不是结构性的 ,在血管紧张素Ⅱ、剪切力、肿瘤坏死因子α、肿瘤生长因子β、内皮素... 详细信息

lox 1是一种Ⅱ型膜蛋白 ,按结构分类 ,它属于C型选择素家族。它可以结合、中和、降解ox LDL ,还具有介导血小板与内皮细胞的相互作用等功能。lox 1的表达不是结构性的 ,在血管紧张素Ⅱ、剪切力、肿瘤坏死因子α、肿瘤生长因子β、内皮素 1作用下 ,其表达上调。对血浆中可溶性lox

关键词： lox-1 氧化性低密度脂蛋白动脉粥样硬化

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左西孟旦调控lox-1/p38 MAPK通路减轻冠状动脉微栓塞后心肌损伤

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中华急诊医学杂志 2021年第9期30卷 1051-1057页

作者：周游王江友刘涛刘阳春杨华峰李浪广西医科大学第一附属医院心血管内科南宁530021 武汉亚洲心脏病医院心内科 430022 广西心脑血管疾病防治精准医学重点实验室南宁530021

目的探讨左西孟旦(levosimendan,Levo)对冠状动脉微栓塞(coronary microembolization,CME)后心肌损伤和lox-1/p38 MAPK信号通路的影响。方法采用随机数字表法将24只巴马小型猪随机分为假手术组(Sham组)、CME组、CME+左西孟旦预治疗+对... 详细信息

目的探讨左西孟旦(levosimendan,Levo)对冠状动脉微栓塞(coronary microembolization,CME)后心肌损伤和lox-1/p38 MAPK信号通路的影响。方法采用随机数字表法将24只巴马小型猪随机分为假手术组(Sham组)、CME组、CME+左西孟旦预治疗+对照腺相关病毒转染组(CME+Levo+NC组)及CME+左西孟旦预治疗+lox-1过表达腺相关病毒转染组(CME+Levo+lox-1组),每组6只。经冠脉介入法于前降支注射栓塞微球构建CME模型;Sham组则注射等量生理盐水代替。CME+Levo+NC组和CME+Levo+lox-1组于造模前2周分别转染对照病毒和lox-1过表达病毒,并均于造模前24 h开始持续静滴左西孟旦。心脏超声检测心功能指标;苏木精-伊红(HE)染色和苏木精碱性复红-苦味酸(HBFP)染色分别用于观察心肌组织病理改变和心肌微梗死区域;酶联免疫吸附测定(ELISA)用于检测血清肌钙蛋白Ⅰ(cTnI);脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNLE)检测心肌细胞凋亡率;免疫荧光观察心肌组织lox-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3 p12和p-p38 MAPK蛋白表达情况。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。以P18±2.33)%,P1.43±1.76)%,P17)L/min,P1.33)mm vs(41.21±1.86)mm,P1.92±16.62)pg/mL vs(236.80±19.56)pg/mL,P1.15±0.47)%vs(14.15±3.24)%,P12、lox-1和p-p38 MAPK蛋白表达明显上调(均P18±2.33)%vs(55.48±3.92)%,P1.43±1.76)%vs(32.02±1.75)%,P17)L/min vs(3.45±0.25)L/min,P1.21±1.86)mm vs(36.78±1.56)mm,P11.63±3.12)%,P19.56)(157.40±15.13)pg/mL,P14.15±3.24)%vs(8.33±1.28)%,P12、lox-1和p-p38 MAPK蛋白表达明显下调(均Plox-1组小型猪LVEF[(55.48±3.92)%vs(48.52±1.69)%,P1.75)%vs(23.80±2.51)%,P1.56)mm vs(41.12±1.57)mm,P11.63±3.12)%vs(18.93±1.58)%,P157.40±15.13)(244.40±15.97)pg/mL,P1.28)%vs(12.28±1.93)%,P12、lox-1和p-p38 MAPK蛋白表达明显上调(均Plox-1/p38 MAPK信号通路介导的心肌细胞凋亡而减轻

关键词：冠状动脉微栓塞左西孟旦 lox-1 p38 MAPK 心肌细胞凋亡

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慢病毒介导lox-1基因RNA干扰抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡

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南方医科大学学报 2012年第2期32卷 165-168,172页

作者：刘彬黄佳城周迎春孙学刚曾文璧李杏臧书文郝文文南方医科大学南方医院中医科广东广州510515 南方医科大学中医药学院分子生物学实验室广东广州510515

目的构建大鼠凝集素养氧化低密度脂蛋白受体(lox-1)RNA干扰慢病毒表达载体并观察lox-1在氧化应激诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法设计针对大鼠lox-1的shRNA序列,将shRNA序列插入到pLentilox3.7(pLL3.7)慢病毒载体中,构建慢病毒载体pLL3.... 详细信息

目的构建大鼠凝集素养氧化低密度脂蛋白受体(lox-1)RNA干扰慢病毒表达载体并观察lox-1在氧化应激诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法设计针对大鼠lox-1的shRNA序列,将shRNA序列插入到pLentilox3.7(pLL3.7)慢病毒载体中,构建慢病毒载体pLL3.7-loxl。慢病毒载体及包装载体dR8.9、VSVG共转染293FT细胞包装慢病毒。慢病毒侵染H9C2大鼠心肌细胞,RT-PCR鉴定对lox-1抑制效率,CCK-8、Hochest33258染色检测lox-1对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果通过双酶切鉴定,证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,抑制lox-1能抑制H_2O_2诱导的细胞活力下降,减轻H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡,与H_2O_2组比较均有统计学意义(P1)。结论成功构建靶向大鼠lox-1基因RNAi慢病毒载体,lox-1激活可能在H_2O_2诱导心肌细胞凋亡中发挥重要作用。

关键词：慢病毒 RNA干扰 lox-1 氧化应激凋亡

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Toll样受体4/核因子κB和氧化低密度脂蛋白受体lox-1对单核内皮细胞黏附的影响

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中华心血管病杂志 2005年第9期33卷 827-831页

作者：王虹艳曲鹏吕申刘敏姜华大连医科大学附属第二医院心血管内科 116027 大连医科大学附属第二医院实验中心

目的近年研究表明介导先天免疫反应的受体Toll样受体4(TLR4)参与动脉粥样硬化的发生发展。TLR4激动后通过诱导核因子κB(NFκB)激活,调控炎症因子的表达。研究观察TLR4/NFκB激活对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化低密度脂蛋白受体(lectin... 详细信息

目的近年研究表明介导先天免疫反应的受体Toll样受体4(TLR4)参与动脉粥样硬化的发生发展。TLR4激动后通过诱导核因子κB(NFκB)激活,调控炎症因子的表达。研究观察TLR4/NFκB激活对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化低密度脂蛋白受体(lectinlikeoxidizedlowdensitylipoproteinreceptor1,lox1)、细胞间黏附分子1(intercellularadhesionmolecule1,ICAM1)、E选择素(Eselectin)表达的调节,以及它们在介导单核内皮细胞黏附中的作用。方法应用脂多糖(LPS,1mg/L)刺激HUVECs24h。采用RTPCR方法检测TLR4、lox1、ICAM1、EselectinmRNA表达水平;采用蛋白质印迹技术检测TLR4、lox1蛋白表达水平及核蛋白NFκBp65表达的变化;采用直接计数法观察HUVECs与单核细胞的黏附率。结果LPS上调TLR4表达,激活NFκB,上调HUVECslox1、ICAM1、Eselectin表达,增加单核细胞与内皮细胞的黏附率;抗lox1、ICAM1、Eselectin抗体均部分抑制LPS介导的单核与内皮细胞黏附率的增加;NFκB抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)抑制了LPS介导的上述效应。结论TLR4/NFκB激活上调lox1、ICAM1、Eselectin表达,它们均在LPS介导的单核内皮细胞黏附过程中起部分作用,NFκB在LPS介导的上述效应中起关键调节作用,干预NFκB激活可能成为防治动脉粥样硬化的靶目标。

关键词：动脉硬化受体脂蛋白诱导核因子-κB 氧化低密度脂蛋白受体 Toll样受体4 内皮细胞黏附核因子κB lox-1 单核细胞

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Effect of Candesartan Combined with Rosuvastatin on Myocardial Fibrosis in Rats with Alcoholic Cardiomyopathy by Mediating lox-1 Expression

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Journal of Clinical and Nursing Research 2021年第2期5卷 1-4页

作者： Zhanbin Feng Yifan Zhang Xiaoyan Lv Xin Wang Bo Yuan Xi'an Ninth Hospital Xi'anChina

Objective:To analyze the effect of candesartan and rosuvastatin on myocardial fibrosis in rats with alcoholic cardiomyopathy by mediating the expression of lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1(lox-1).Methods:The rats were selected as experimental samples,and these rats were randomly divided into observation group and alcohol feeding group(abbreviated as"alcohol group")and desartan combined with rosuvastatin intervention+alcoholic cardiomyopathy group(Referred to as the"intervention group"),the observation group is fed normally,the alcohol group is fed with alcohol,and the intervention group uses two drugs on the basis of the alcohol group to *** 16 weeks of the three groups of experiments,analyze the results of the three groups of *** structure,myocardial fibrosis and myocardial ***:After 16 weeks,the left ventricular short axis shortening rate(FS)and left ventricular ejection fraction in the alcohol group were lower than those in the observation group,while the collagen volume fraction(CVF)and left ventricular end-diastolic diameter(LVEDd)were higher than those in the observation group,The expression of lox-1 in the intervention group was lower than that in the alcohol group,and the degree of fibrosis was *** expression of lox-1 in the alcohol group was higher than that in the observation group,and the degree of fiber *** the same time,the expression of TN-X and smad-3 protein in the alcohol group(86%±7%,83%±9%)were higher than those in the observation group(32%±10%,30%±7%),while the expression of smad-7 protein(36%±8%)was lower than that in the observation group(78%±9%),Plox-1.

关键词： Candesartan Rosuvastatin lox-1 Rat alcoholic Cardiomyopathy Myocardial fibrosis

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6-Shogaol decreased lox-1 expression,inhibition of oxidative stress and attenuates endothelial cell apoptosis

6-Shogaol decreased LOX-1 expression,inhibition of oxidative...

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2011·中国医师协会中西医结合医师大会

作者： Yun kai Wang*1,Ya Jun Hong2,Dai Jing,Wei Mao*1,Wu Ye1,Zhao Quan Huang1,Hong Mao2,Qun wei Cheng1,Rui Zhen Chen5,Jun Bo Ge5,HaozhuChen5,Xiaoliang Leon Xu6 1.Department of Cardiology,The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Traditional Medical University,2.Department of Cardiology,The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University.3.Department of oncology,Shanghai Shidong Hospital,Shanghai,200438,China 4.Department of Hematology,Changhai Hospital,Second Military Mecial University,Shanghai,200433,China 5.Shanghai Institute of Cardiovascular diseases,Zhongshan Hospital,Fudan University,Shanghai,200032,China.6.Department of Pathology,Sloan Kettering Institute,Memorial Sloan Kettering Cancer Center,New York,American.

Backgroud and purpose:6-shogaol is the major bioactive compounds present in Zingiber officinale,and possesses the anti-atherosclerotic ***,we evaluated the effects of 6-shogaol on oxLDL-induced human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) injuries and its possible molecular *** approach:human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) was pre-incubated with or without 6-Shogaol and stimulated by oxidized low density lipoprotein(ox-LDL) in the presence or absence of lox-1 siRNA or caspase-3 *** viability,cell apoptosis,cellular Reactive Oxygen species,NADPH oxidase and caspase-3,8,9 activities were *** results:6-shogaol decreased the oxidation of LDL into oxLDL and attenuated the oxLDL-caused oxidative stress and cell *** of HUVECs to 200μg/ml oxLDL induced masive cell apoptosis,however,6-shogaol defended against such *** of lox-1 small interference(si)RNA into HUVECs reduced the translation of this membrane receptor,and simultaneously increased 6-shogaol protection from oxLDL-induced cell *** comparison,overexpression of lox-1 attenuated 6-shogaol protection.6-shogaol inhibited oxLDL-induced lox-1 mRNA and protein *** 6-shogaol and lox-1 siRNA decreased activities of caspases-9,-3,but not *** with caspase-3 inhibitor DEVD-CHO(25 μmol/L) synergistically promoted 6-Shogaol’s protection against cell *** and implications:this study shows that 6-shogaol can protect HUVECs from oxLDL-induced apoptotic insults via downregulating lox-1-mediated activation of the caspase protease pathway.

关键词： 6-shogaol lox-1 oxidized low-density lipoprotein Apoptosis Caspase-3

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lox-1敲减对2型糖尿病小鼠骨质疏松症的影响

LOX-1敲减对2型糖尿病小鼠骨质疏松症的影响

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作者：张志秀甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:运用siRNA技术敲减db/db小鼠骨组织lox-1,通过骨密度、骨小梁、骨形成和骨吸收指标的检测,探讨lox-1对2型糖尿病性骨质疏松症的影响。方法:将30只7-8周龄雄性db/db小鼠与30只同窝野生型小鼠（雄性n=10,雌性n=20）适应性喂养2周后,... 详细信息

目的:运用siRNA技术敲减db/db小鼠骨组织lox-1,通过骨密度、骨小梁、骨形成和骨吸收指标的检测,探讨lox-1对2型糖尿病性骨质疏松症的影响。方法:将30只7-8周龄雄性db/db小鼠与30只同窝野生型小鼠（雄性n=10,雌性n=20）适应性喂养2周后,采用随机数字表法将小鼠分为6组:db/db小鼠组分为:db/db lox-1敲减组（db/db+AAV9-lox-1）、db/db空载体组（db/db+AAV9-CON）、db/db空白对照组（db/db）;同龄野生型雄性小鼠为正常对照组（NC）,雌性小鼠分为去卵巢组（OVX）和假手术组（Sham）。构建腺相关病毒9型lox-1敲除载体（Adeno-associated virus type 9 lox-1 knockout vector,AAV9-lox-1）,db/db小鼠尾静脉注射AAV9转染14周,每周六同一时间禁食不禁水6小时后测量6组小鼠体重和血糖,记录整个实验周期中各组小鼠一般情况。用双能X线（DXA）检测小鼠全身骨密度（BMD）。应用显微CT（Micro-CT）评估小鼠骨小梁微结构的变化,参数包括:骨小梁体积（BV/TV）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（***）和骨小梁间隙（***）。HE染色观察小鼠骨组织的病理改变。荧光显微镜下观察AAV9-lox-1转染情况。Western blotting和QRT-PCR技术检测小鼠骨组织中凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（lox-1）、骨钙素（OCN）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的表达水平。酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠血清中Ⅰ型原胶原N端前肽（PINP）和β胶原降解产物（β-CTX）的水平。结果:***/db小鼠组一般情况差,与NC组、OVX组和Sham组比,表现为精神状态萎靡不佳,体型肥胖,活动较少,对外界刺激反应迟钝,进食饮水频繁,多尿等症状;db/db小鼠组体重和血糖均明显高于NC组和Sham组（P＜0.05）,FBG均大于16.7mmol/L。***/db小鼠组BMD降低（P＜0.05）,与NC组比较,db/db组、db/db+AAV9-CON组和db/db+AAV9-lox-1组BMD较NC组分别降低了31.8%、30.6%、18.5%;lox-1敲减后,db/db+AAV9-lox-1组较db/db+AAV9-CON和db/db组BMD分别增加了17.5%和19.4%（P＜0.05）。***/db小鼠组BV/TV、Tb.N、***均降低,***增大,差异有统计学意义（P＜0.01）,与NC组比较,db/db组BV/TV、Tb.N、***较NC组分别降低了60.7%、57.3%、28.6%,***增加了1.32倍,db/db+AAV9-CON组BV/TV、Tb.N、***较NC组分别降低了60.6%、57.0%、27.4%,***增加了1.27倍,db/db+AAV9-lox-1组较NC组分别降低了45.0%、41.8%、17.5%,***增加了0.80倍;lox-1敲减后,db/db+AAV9-lox-1组BV/TV、Tb.N、***较db/db组分别增加了39.8%、36.3%、15.6%,***降低了22.0%,db/db+AAV9-lox-1组BV/TV、Tb.N、***较db/db+AAV9-CON组分别增加了39.6%、35.4%、13.6%,***降低了20.4%,差异有统计学意义（P＜0.05）。***/db小鼠组和OVX组HE表现为骨皮质变薄,骨小梁结构排列紊乱甚至出现断裂,骨小梁数目减少,脂肪细胞数目增多;lox-1敲减后,db/db+AAV9-lox-1组脂肪细胞数目明显减少,骨小梁排列紊乱、断裂现象减轻。***/db+AAV9-lox-1组和db/db+AAV9-CON组荧光显微镜下观察到骨组织中均有GFP的表达,而db/db组中无GFP的表达。***/db小鼠组lox-1表达水平增加（P＜0.01）,AAV9转染后,db/db+AAV9-lox-1组lox-1表达水平降低（P＜0.01）。Western blotting和RT-PCR结果显示,与NC组比较,db/db组、db/db+AAV9-CON组和db/db+AAV9-lox-1组lox-1 m RNA的表达水平增加了3.6倍、3.5倍和1.4倍,lox-1蛋白表达水平分别增加了3.2倍、3.1倍和0.9倍;lox-1敲减后,db/db+AAV9-lox-1组lox-1 m RNA和蛋白表达水平降低。***/db+AAV9-CON组和db/db组中OCN表达水平降低（P＜0.01）,TRAP表达水平升高（P＜0.01）;lox-1敲减后

关键词：糖尿病骨质疏松症骨形成骨吸收 lox-1

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lox-1在流体剪切力促BMSCs成骨分化中的作用及机制

LOX-1在流体剪切力促BMSCs成骨分化中的作用及机制

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作者：白晓源新乡医学院

学位级别：硕士

背景骨移植手术是世界第二大组织移植术,是当前解决骨骼严重缺损或愈合困难的一种外科手术。骨缺损修复难是困扰外科医生的常见问题,自体骨移植术由于受到取材难等诸多限制,有明显的应用局限性,而异体骨移植又会受到免疫排斥反应等的影... 详细信息

背景骨移植手术是世界第二大组织移植术,是当前解决骨骼严重缺损或愈合困难的一种外科手术。骨缺损修复难是困扰外科医生的常见问题,自体骨移植术由于受到取材难等诸多限制,有明显的应用局限性,而异体骨移植又会受到免疫排斥反应等的影响。因此,运用组织工程技术在体外成骨后再移植回体内的骨移植技术已成为骨缺损临床治疗的新手段。骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)具有可控的成骨分化潜力,因此常作为骨组织工程中的种子细胞。以往的研究表明,机械力在调节和维持骨组织稳态方面起着关键作用。已知流体剪切力可促进BMSCs向骨或软骨分化,但是具体分子机制目前还未完全清楚。因此,研究流体剪切力促BMSCs成骨分化的分子机制对使用组织工程技术治疗骨缺损具有重要意义。目的明确氧化型低密度脂蛋白受体-1(Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1,lox-1)是否参与流体剪切力介导BMSCs成骨分化的过程,探究lox-1调控BMSCs成骨分化的分子机制。方法1.对BMSCs进行成骨诱导培养基(Osteogenic Induction Medium,OIM)诱导及流体剪切力(Fluid Shear Stress,FSS)刺激后,利用倒置显微镜观察BMSCs形态变化。2.利用茜素红(Alizarin Red S,ARS)染色检测不同处理条件下BMSCs钙沉积变化。3.利用碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色检测不同处理条件下BMSCs中ALP含量变化。4.利用ALP检测试剂盒检测不同处理条件下BMSCs中ALP活力变化。5.利用Ca含量检测试剂盒检测不同处理条件下BMSCs中Ca含量变化。6.运用基因信息学将不同处理组细胞基因测序结果进行差异基因分析及筛选。7.利用慢病毒低表达lox-1,实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,q-PCR)和蛋白质印记法(Western Blot,WB)检测病毒感染lox-1后的表达。8.利用q-PCR检测不同处理条件下BMSCs中成骨相关基因ALP、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)、Runt相关转录因子2(Runt-related Transcription Factor 2,RUNX2)表达。9.利用Western Blot检测不同处理条件下BMSCs中成骨相关基因ALP、OPN、RUNX2蛋白表达。结果1.光镜下,经OIM诱导后,BMSCs形态发生明显变化,FSS刺激后细胞逐渐变为细长且定向排列。***染色结果显示,与OIM组相比,剪切力刺激组(OIM+FSS组)细胞Ca沉积增多。***染色结果表示,与OIM组相比,剪切力刺激组(OIM+FSS组)细胞ALP含量显著增多。***含量检测结果显示,与OIM组相比,剪切力刺激组(OIM+FSS组)细胞ALP活力显著增强。***含量检测结果显示,与OIM组相比,剪切力刺激组(OIM+FSS组)细胞Ca含量显著增多。6.基因信息学分析结果显示,包括GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,用string网站将测序筛选出的差异基因进行蛋白互作预测分析,选中靶基因lox-1。7.慢病毒低表达lox-1后,BMSCs成骨分化水平明显降低,且低表达lox-1时转化生长因子(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)表达同时降低。恢复TGF-β蛋白水平,BMSCs成骨分化水平也明显升高。8.q-PCR分析结果表明,与未处理组相比,OIM诱导、7天、14天后,成骨相关基因ALP、OPN、RUNX2表达明显上升。与OIM诱导组相比,OIM+FSS刺激组成骨相关基因表达同样明显上升。而与OIM+FSS刺激组相比,OIM+FSS+lox-1-/-组的成骨相关基因表达明显下降。而加入TGF-β重组蛋白后成骨相关基因表达又明显上升。*** Blot分析结果表明,与未处理组相比,OIM诱导7天、14天后,成骨相关基因ALP、OPN、RUNX2蛋白表达明显增多。与OIM诱导组相比,OIM+FSS刺激组成骨相关蛋白表达同样明显增多。而与OIM+FSS刺激组相比,OIM+FSS+lox-1-/-组的成骨相关蛋白表达明显减少。而加入TGF-β重组蛋白后成骨相关蛋白表达又明显增多。结论FSS刺激可增强OIM诱导的BMSCs成骨分化,在FSS刺激下lox-1可通过TGF-β影响成骨分化。

关键词： lox-1 TGF-β 流体剪切力成骨分化

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