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中国肺癌杂志 2020年第4期23卷 223-232页

作者：刘荣凤张玲玲徐志宏崔彦芝河北医科大学第四医院肿瘤内科石家庄050011

背景与目的MicroRNAs(miRNAs)是一种广泛存在于真核生物体中的非编码小分子RNA,尽管一些miRNA在肿瘤中作用已被发现,但是miR-665对小细胞肺癌的中的表达及影响还尚不清楚。本研究旨在分析miR-665对肺癌细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响... 详细信息

背景与目的MicroRNAs(miRNAs)是一种广泛存在于真核生物体中的非编码小分子RNA,尽管一些miRNA在肿瘤中作用已被发现,但是miR-665对小细胞肺癌的中的表达及影响还尚不清楚。本研究旨在分析miR-665对肺癌细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,探讨miR-665在小细胞肺癌中发挥的作用及其工作机制。方法qRT-PCR检测miR-665在肺癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;TargetScan预测miR-665的潜在靶基因并用双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和Western blot进行验证;免疫组化、qRT-PCR和Western blot检测llgl1在肺癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;CCK8法、流式细胞法、Transwell和细胞划痕实验检测miR-665和llgl1对肺癌细胞NCI-H446、NCI-H1688增殖、侵袭、迁移以及S期细胞比值的影响;构建肺癌裸鼠移植瘤模型并观察miR-665对小鼠肿瘤生长的影响。结果miR-665在肺癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织;miR-665能靶向作用于llgl1的3’-UTR并抑制其表达;相比于癌旁正常组织,llgl1在肺癌组织中的表达水平明显降低;抑制miR-665的表达可以抑制肺癌NCI-H446细胞的增殖、S期细胞比值、侵袭和迁移能力,而干扰llgl1能逆转这种抑制效果;上调miR-665则促进肺癌NCI-H1688的增殖、S期细胞比值、侵袭和迁移能力,但这种促进效果同样被llgl1的过表达逆转;在肺癌裸鼠移植瘤模型中,抑制miR-665能上调llgl1蛋白的表达并抑制肿瘤的生长,而上调miR-665的表达则可以产生相反的结果。结论miR-665表达水平的变化与肺癌密切相关,miR-665可以通过抑制其靶基因llgl1的表达促进肺癌细胞的生物学行为,在小细胞肺癌中发挥促癌基因的作用。

关键词：小细胞肺癌 miR-665 llgl1

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条件性敲除llgl1基因小鼠的制备与鉴定

条件性敲除Llgl1基因小鼠的制备与鉴定

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作者：刘毅上海交通大学

学位级别：硕士

Lgl(lethal giant lavae)基因首先在果蝇中发现,该基因非常保守,在线虫、果蝇、哺乳动物以及人类当中都存在同源基因。随着研究的深入,人们发现该基因对于细胞极性的形成与维持至关重要,而细胞极性的丧失正是肿瘤发生与转移的重要指标,... 详细信息

Lgl(lethal giant lavae)基因首先在果蝇中发现,该基因非常保守,在线虫、果蝇、哺乳动物以及人类当中都存在同源基因。随着研究的深入,人们发现该基因对于细胞极性的形成与维持至关重要,而细胞极性的丧失正是肿瘤发生与转移的重要指标,因此,Lgl基因与肿瘤发生具有相关性。在许多癌症病例中均发现了Hugl-1(人源Lgl1)的降低表达或不表达,但目前并没有相关报道支持Hugl-1作为抑癌基因,即该基因发生肿瘤特异性突变的报道,且对于Hugl-1在特定器官癌症(如肝癌)的发生发展中的作用还不清楚。由于实验材料采集以及伦理道德方面的约束,目前国内无法直接利用人来源的胚胎干细胞进行基因敲除方面的研究,更无法通过实验手段人为地构建将某个基因敲除的人类个体以此研究该基因在个体各发育阶段或某个特定器官中的功能。因此,大量基因敲除方面的研究,都要通过实验动物来进行,而小鼠就是使用得最广泛的实验动物之一。本研究参考了国际上比较通用的几种基因敲除策略并将其整合,构建了llgl1(小鼠来源Lgl1)条件性敲除质粒,通过电击转化胚胎干细胞、囊胚注射等传统手法,成功获得了在肝脏当中敲除llgl1基因的敲除小鼠,并观察到了该类敲除小鼠具有在体重上较野生型小鼠轻的表型本构建策略鉴定方便,又利于简单改造,只需对载体进行小规模修饰即可对其它基因进行构建,亦可通过简单的酶切连接反应对载体进行修饰,用于构建纯合敲除的胚胎干细胞克隆。

关键词： llgl1 条件性敲除基因敲除敲除小鼠

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热疗对人肺癌细胞株H1299生物学功能的影响及其分子机制

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肿瘤研究与临床 2017年第2期29卷 79-82页

作者：郭晋锋杨文慧山西省肿瘤医院、山西省肿瘤研究所院所长办公室太原030013 山西省肿瘤医院消化二科太原030013 山西医科大学生物化学与分子生物学实验室太原030001

目的探讨热疗对人肺癌细胞株H1299生物学功能的影响及其可能的分子机制.方法体外培养H1299细胞,实验分为两组,热疗组细胞采用水浴箱恒温43℃加热1 h,对照组细胞置于37℃培养箱培养.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期及... 详细信息

目的探讨热疗对人肺癌细胞株H1299生物学功能的影响及其可能的分子机制.方法体外培养H1299细胞,实验分为两组,热疗组细胞采用水浴箱恒温43℃加热1 h,对照组细胞置于37℃培养箱培养.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡率,Transwell法检测细胞迁移及侵袭,Western blot法检测llgl1蛋白表达.结果热疗对细胞周期分布无明显影响,但热疗组细胞凋亡率为（24.81±2.80）%,较对照组的（11.73±1.55）%升高,差异有统计学意义（t=7.709,P=0.0021）.热疗组迁移细胞数为（25.67±4.81）个,对照组为（85.00±10.31）个,两组差异有统计学意义（t=5.182,P=0.0066）;热疗组侵袭细胞数为（22.00±2.08）个,对照组为（108.30±10.14）个,两组差异有统计学意义（t=8.342,P=0.0011）.热疗组细胞llgl1蛋白表达水平显著上调,为对照组的4.2倍,差异有统计学意义（t=3.028,P=0.0389）.结论热疗可诱导人肺癌H1299细胞凋亡,并可抑制其迁移和侵袭,其作用可能是通过促进llgl1的表达实现的.

关键词：肺肿瘤高温,诱发细胞凋亡 llgl1 侵袭

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