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条件性敲除Llgl1基因小鼠的制备与鉴定

条件性敲除Llgl1基因小鼠的制备与鉴定

作     者:刘毅 

作者单位:上海交通大学 

学位级别:硕士

导师姓名:由德林;丁小燕

授予年度:2015年

学科分类:0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题:Llgl1 条件性敲除 基因敲除 敲除小鼠 

摘      要:Lgl(lethal giant lavae)基因首先在果蝇中发现,该基因非常保守,在线虫、果蝇、哺乳动物以及人类当中都存在同源基因。随着研究的深入,人们发现该基因对于细胞极性的形成与维持至关重要,而细胞极性的丧失正是肿瘤发生与转移的重要指标,因此,Lgl基因与肿瘤发生具有相关性。在许多癌症病例中均发现了Hugl-1(人源Lgl1)的降低表达或不表达,但目前并没有相关报道支持Hugl-1作为抑癌基因,即该基因发生肿瘤特异性突变的报道,且对于Hugl-1在特定器官癌症(如肝癌)的发生发展中的作用还不清楚。由于实验材料采集以及伦理道德方面的约束,目前国内无法直接利用人来源的胚胎干细胞进行基因敲除方面的研究,更无法通过实验手段人为地构建将某个基因敲除的人类个体以此研究该基因在个体各发育阶段或某个特定器官中的功能。因此,大量基因敲除方面的研究,都要通过实验动物来进行,而小鼠就是使用得最广泛的实验动物之一。本研究参考了国际上比较通用的几种基因敲除策略并将其整合,构建了Llgl1(小鼠来源Lgl1)条件性敲除质粒,通过电击转化胚胎干细胞、囊胚注射等传统手法,成功获得了在肝脏当中敲除Llgl1基因的敲除小鼠,并观察到了该类敲除小鼠具有在体重上较野生型小鼠轻的表型本构建策略鉴定方便,又利于简单改造,只需对载体进行小规模修饰即可对其它基因进行构建,亦可通过简单的酶切连接反应对载体进行修饰,用于构建纯合敲除的胚胎干细胞克隆。

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