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转染lcrg1基因的喉癌细胞差异蛋白质分析

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癌症 2006年第1期25卷 22-28页

作者：章晓鹏肖志强陈主初李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室湖南长沙410008 中南大学肿瘤研究所湖南长沙410078

背景与目的:lcrg1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因。先前的研究显示将lcrg1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选lcrg... 详细信息

背景与目的:lcrg1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因。先前的研究显示将lcrg1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选lcrg1抑瘤作用相关的蛋白质。方法:抽提稳定高表达lcrg1基因的Hep-2/lcrg1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)的细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术分别分离其总蛋白。考马斯亮蓝染色显色,PDQuest图像分析系统分析获取的2-D胶图像,从胶中选取差异表达的蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析,最后Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质。结果:获得了重复性和分辨率较好的Hep-2/lcrg1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,总蛋白质点数分别为1075±43和1027±23,平均匹配率为91%。图像分析差异蛋白质点,质谱鉴定了20个差异表达的蛋白质点,其中MALDI-TOF-MS鉴定了16个,ESI-Q-TOFMS/MS鉴定了4个。对这些初步鉴定的差异蛋白质进行功能分析,发现一些与细胞代谢、转录调控相关的蛋白质。结论:建立了稳定高表达lcrg1基因的Hep-2/lcrg1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,应用质谱技术识别并鉴定出一些与lcrg1抑瘤作用相关的差异表达蛋白质,为进一步研究lcrg1作用的分子机制提供新的线索。

关键词：喉肿瘤 Hep-2细胞 lcrg1基因比较蛋白质组双向凝胶电泳差异表达蛋白

应用磷酸化蛋白质组学方法初步研究喉癌相关基因lcrg1的功能

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生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 508-516页

作者：章晓鹏肖志强李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞陈主初中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室长沙410008 中南大学肿瘤研究所长沙410078

mRNA差异显示技术克隆的喉癌相关基因lcrg1,对不表达该基因的喉癌细胞系(Hep-2)的生长具有明显抑制作用.软件分析推测,lcrg1可能在细胞信号传导中发挥作用.为进一步地研究lcrg1的功能,应用RT-PCR和平板克隆形成实验证实,经多次传代的Hep... 详细信息

mRNA差异显示技术克隆的喉癌相关基因lcrg1,对不表达该基因的喉癌细胞系(Hep-2)的生长具有明显抑制作用.软件分析推测,lcrg1可能在细胞信号传导中发挥作用.为进一步地研究lcrg1的功能,应用RT-PCR和平板克隆形成实验证实,经多次传代的Hep-2/lcrg1细胞,仍表达lcrg1,且lcrg1具有显著的抑制细胞增殖的能力.抽提Hep-2/lcrg1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系总蛋白质,应用固相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2DGE),结合抗酪氨酸磷酸化抗体的免疫印迹和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),鉴定酪氨酸磷酸化的蛋白质.得到了分辨率较高、重复性较好的Hep-2/lcrg1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的总蛋白质双向凝胶电泳图谱;结合免疫印迹反应、软件分析和质谱技术识别并鉴定了13个差异反应的酪氨酸磷酸化的蛋白质.这些蛋白质参与了细胞信号传导和细胞代谢等过程.推测lcrg1可能是通过调节这些蛋白质的酪氨酸磷酸化、去磷酸化状态,参与细胞增殖、代谢和凋亡等过程的调控,而发挥抑瘤作用.这为全面、真实地揭示lcrg1抑瘤作用的分子机理提供了新思路.

关键词： lcrg1基因 Hep-2/lcrg1细胞系 Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系双向凝胶电泳 MALDI-TOF-MS 免疫印迹酪氨酸磷酸化蛋白质蛋白质印迹

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喉癌组织中lcrg1的表达及其临床意义

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临床与实验病理学杂志 2019年第7期35卷 856-857,860页

作者：陈亚辉刘伶俏谢海龙李爱平石旦李晓杰湖南省郴州市第一人民医院病理诊断中心郴州423000 南华大学肿瘤研究所衡阳421000

目的探讨喉癌相关基因1(laryngeal cancer related gene 1,lcrg1)在喉鳞状细胞癌(laryngeal squmous cell carcinoma,LSCC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法对89例LSCC、31例喉上皮内瘤变及10例喉部息肉进行检测... 详细信息

目的探讨喉癌相关基因1(laryngeal cancer related gene 1,lcrg1)在喉鳞状细胞癌(laryngeal squmous cell carcinoma,LSCC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法对89例LSCC、31例喉上皮内瘤变及10例喉部息肉进行检测,观察lcrg1蛋白的表达。分析lcrg1的表达与LSCC患者性别、年龄、临床分型、组织学类型、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移的关系。结果lcrg1在LSCC中的阳性率为78.65%,低于上皮内瘤变组织和喉部息肉组织(Plcrg1蛋白在喉癌中表达的降低可能与癌变的发生有关,其表达与组织学分级相关。

关键词：喉肿瘤 lcrg1基因免疫组织化学 TNM分期