转染LCRG1基因的喉癌细胞差异蛋白质分析

作     者：章晓鹏 肖志强 陈主初 李萃 李建玲 余艳辉 欧阳咏梅 冯雪萍 张鹏飞 ZHANG Xiao-Peng;XIAO Zhi-Qiang;CHEN Zhu-Chu;LI Cui;LI Jian-Ling;YU Yan-Hui;OUYANG Yong-Mei;FENG Xue-Ping;ZHANG Peng-Fei

作者机构：中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室湖南长沙410008 中南大学肿瘤研究所湖南长沙410078 

出 版 物：《癌症》 (Chinese Journal of Cancer)

年 卷 期：2006年第25卷第1期

页      面：22-28页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家"973"计划(No.2001CB510207) 国家自然科学基金项目(No.30500558 No.30240056 No.30370642) 教育部跨世纪优秀人才培养计划基金(No.2002-48) 湖南省科技厅重大科技专项(No.04XK1001) 湖南省科技厅重点科研项目(No.02SSY2001-1) 湖南省卫生厅重点科研项目(No.Z02-04)~~ 

主　　题：喉肿瘤 Hep-2细胞 LCRG1基因 比较蛋白质组 双向凝胶电泳 差异表达蛋白 

摘      要：背景与目的:LCRG1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因。先前的研究显示将LCRG1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选LCRG1抑瘤作用相关的蛋白质。方法:抽提稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)的细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术分别分离其总蛋白。考马斯亮蓝染色显色,PDQuest图像分析系统分析获取的2-D胶图像,从胶中选取差异表达的蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析,最后Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质。结果:获得了重复性和分辨率较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,总蛋白质点数分别为1075±43和1027±23,平均匹配率为91%。图像分析差异蛋白质点,质谱鉴定了20个差异表达的蛋白质点,其中MALDI-TOF-MS鉴定了16个,ESI-Q-TOFMS/MS鉴定了4个。对这些初步鉴定的差异蛋白质进行功能分析,发现一些与细胞代谢、转录调控相关的蛋白质。结论:建立了稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,应用质谱技术识别并鉴定出一些与LCRG1抑瘤作用相关的差异表达蛋白质,为进一步研究LCRG1作用的分子机制提供新的线索。