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lck对肾小管上皮细胞的IL-12信号传递功能研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第6期21卷 590-593页

作者：李清刚李志坚李幼姬王俭勤首都医科大学附属北京友谊医院肾内科中山医科大学附属第一医院肾内科卫生部肾脏病临床研究重点实验室

目的　研究lck途径激活后对小鼠肾小管上皮细胞的信号传递功能的影响。方法　应用IL 12、IL 2刺激小管上皮细胞 ,通过原位杂交检测lckmRNA在小管上皮细胞的表达 ;采用lck抑制剂PP1,阻抑小管上皮细胞的lck激酶 ,通过免疫印迹和放射自显... 详细信息

目的　研究lck途径激活后对小鼠肾小管上皮细胞的信号传递功能的影响。方法　应用IL 12、IL 2刺激小管上皮细胞 ,通过原位杂交检测lckmRNA在小管上皮细胞的表达 ;采用lck抑制剂PP1,阻抑小管上皮细胞的lck激酶 ,通过免疫印迹和放射自显影方法检测lck对小管上皮细胞的信号传递功能的影响。结果　lck激酶激活可调控小管上皮细胞的lck c Jun信号传递途径 ;小管上皮细胞中lck途径激活介导的细胞炎症作用与IL 12的c Jun表达作用有关。结论　lck在IL

关键词：白细胞介素12 肾小管上皮细胞信号传递肾小管损伤 lck

PKCε与lck在细胞内直接相互作用的荧光共振能量转移证据

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第5期18卷 529-534页

作者：曹西南平佩佩宋昌旭昆明医学院分子生物学实验室昆明650031 DepartmentofPhysiologyandBiophysics UniversityofLouisvilleLouisville

蛋白激酶Cε亚型 (PKCε)和蛋白酪氨酸激酸lck均在心肌缺血预适应的信号转导中起着十分重要的作用 .构建PKCε和lck与绿色荧光蛋白的融合蛋白的真核细胞表达载体 .将其共转染H2 93细胞进行表达 .用荧光显微镜观察到荧光共振能量转移现象。

关键词： PKCε lck 直接相互作用荧光共振能量转移缺血预适应蛋白质相互作用心肌缺血 Hela细胞

猪lck蛋白在猪圆环病毒2型体外复制过程中的作用

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畜牧兽医学报 2024年第12期55卷 5751-5761页

作者：刘伟姣何庆蒋一凡曹思雨张时瑞吕佳璐龙娉杨凌宸周川王乃东湖南农业大学动物医学院、兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室、兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心长沙410128 湖南农业大学动物医学院长沙410128

为了鉴定猪圆环病毒2型(PCV2)侵染细胞建立感染的重要宿主因子,本文分析在PK-15细胞中猪淋巴细胞特异性酪氨酸激酶lck表达及活性对PCV2感染复制的影响,确定lck是调控PCV2感染复制的新靶点。首先,本研究基于猪lck结构特性和序列保守性分... 详细信息

为了鉴定猪圆环病毒2型(PCV2)侵染细胞建立感染的重要宿主因子,本文分析在PK-15细胞中猪淋巴细胞特异性酪氨酸激酶lck表达及活性对PCV2感染复制的影响,确定lck是调控PCV2感染复制的新靶点。首先,本研究基于猪lck结构特性和序列保守性分析,选取lck SH3结构域为免疫原基因序列,利用原核表达目的蛋白制备小鼠抗猪lck的多克隆抗体。然后,通过Western blot检测PCV2感染PK-15和3D4/21细胞后对lck表达及活性的影响。最后,在PK-15细胞中利用瞬时转染过表达或lck特异性抑制剂(A770041),通过Western blot和荧光定量PCR(RT-qPCR)检测猪lck表达和磷酸化对PCV2复制的影响。结果显示,成功制备了鼠源性抗猪lck的多克隆抗体。在PCV2感染PK-15和3D4/21细胞早期阶段,lck表达水平未见明显变化,但lck磷酸化水平显著上调。过表达lck可显著上调PCV2 Cap蛋白表达及病毒拷贝数,而采用A770041抑制lck磷酸化水平后,可显著下调PCV2 Cap蛋白表达、病毒拷贝数和病毒滴度,这些结果表明lck正调控PCV2的感染复制,为发现PCV2感染的新分子机制奠定重要基础。

关键词： PCV2 Capsid lck SH3结构域病毒复制

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lck显示器选购之非常手册（上）

微型计算机 2006年第22期26卷 164-166页

作者： BrightNeo

随着液晶显示器进入“平价时代”越来越多的新装机用户开始将液晶显示器作为自己的首选，而老用户则考虑为爱机换脸——购买一款合适的大屏/宽屏液晶显示器，虽然现在大家对液晶显示器的参数已经耳熟能详，但具体到实际的操作中却往往... 详细信息

随着液晶显示器进入“平价时代”越来越多的新装机用户开始将液晶显示器作为自己的首选，而老用户则考虑为爱机换脸——购买一款合适的大屏/宽屏液晶显示器，虽然现在大家对液晶显示器的参数已经耳熟能详，但具体到实际的操作中却往往存在种种误区。

关键词：液晶显示器 lck 手册选购用户装机宽屏

lck作为生物标志物在黑色素瘤中的作用及机制研究

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LCK作为生物标志物在黑色素瘤中的作用及机制研究

作者：文博西南医科大学

学位级别：硕士

目的:肿瘤微环境是指肿瘤细胞生活的环境,包括了肿瘤细胞和免疫细胞等多种成分和结构,肿瘤微环境是复杂的、不断演化的。本研究致力于肿瘤微环境中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lymphocyte specific protein tyrosine kinase,lck)在黑... 详细信息

目的:肿瘤微环境是指肿瘤细胞生活的环境,包括了肿瘤细胞和免疫细胞等多种成分和结构,肿瘤微环境是复杂的、不断演化的。本研究致力于肿瘤微环境中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lymphocyte specific protein tyrosine kinase,lck)在黑色素瘤中的作用及机制的探索。通过生物信息学分析和实验室技术探究lck是否在黑色素瘤中有抗肿瘤效应,lck是否能够特定调节免疫浸润,lck是否可以作为肿瘤微环境中重塑肿瘤微环境的预后生物标志物,以期为lck是否作为黑色素瘤的治疗靶点提供理论基础。方法:本研究整合了黑色素瘤单细胞和转录组测序数据集,并联合使用了生物信息学技术和分子实验进行一系列的相关分析,以更好地验证lck作为生物标志物在黑色素瘤中的具体作用机制。首先我们筛选了免疫逃逸相关基因,然后通过预后分析来分析相关的预后因素,随后构建风险预后模型验证lck是否为有利因素。我们通过EPIC、TIMER、quan Tiseq、MCPcounter等算法来评估lck与肿瘤免疫微环境的关系。我们通过单细胞测序、蛋白互作分析以及Estimate算法来探寻lck与免疫浸润的联系。我们通过单细胞测序、Cell Chat分析等来揭示lck参与黑色素瘤免疫调控的机制。最后我们通过RT-q PCR来初步验证lck在黑色素瘤中的表达情况。结果:(1)lck可能是黑色素瘤的关键独立预后因素且为有利的预后因素。(2)lck可能延长黑色素瘤患者的总体生存期。我们发现风险系数越高,患者的死亡率越高。在构建的风险预后模型的生存曲线中,低风险评分提示高生存具有较长的总体生存期。(3)lck能影响肿瘤微环境重塑。热图提示lck的免疫浸润水平较高。lck表达水平与临床参数的关系分析提示lck的表达水平随着黑色素瘤临床进展显著下调。同时,RT-q PCR的结果提示与人正常皮肤细胞相比(PIG1细胞系),lck的表达水平在黑色素瘤细胞系(A2058,SKMEL28)中显著升高。(4)在黑色素瘤中,lck与免疫浸润显著相关,可预测免疫治疗反应。lck的表达水平与免疫检查点相关分析表明,lck的表达水平与免疫呈显著正相关。(5)lck通过结合CD8受体促进抗肿瘤免疫反应并与抗肿瘤药物较低的Ic50相关。结论:(1)lck可以作为有利的预后因素延长总体生存期。(2)lck能影响肿瘤微环境重塑。(3)lck是黑色素瘤的潜在生物标志物,并可能有助于其免疫治疗。

关键词： lck 黑色素瘤单细胞测序肿瘤微环境免疫治疗

IL-12、LPS对肾小管上皮细胞中lck/P_(38)信号传递的影响

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中山医科大学学报 2000年第3期21卷 190-192页

作者：李清刚李幼姬李志坚黄凌虹中山医科大学附属第一医院肾内科广东广州510080

【目的】探讨IL 12、LPS对肾小管上皮细胞中lck基因表达及活性改变的影响 ,明确lck/P3 8信号传递途径在炎症过程的作用。【方法】用原位杂交、放射自显影分别检测lck基因表达及lck活性 ,用免疫印迹法对肾小管上皮细胞在IL 12、LPS刺激下... 详细信息

【目的】探讨IL 12、LPS对肾小管上皮细胞中lck基因表达及活性改变的影响 ,明确lck/P3 8信号传递途径在炎症过程的作用。【方法】用原位杂交、放射自显影分别检测lck基因表达及lck活性 ,用免疫印迹法对肾小管上皮细胞在IL 12、LPS刺激下其P3 8磷酸化进行测定。【结果】肾小管上皮细胞经IL 12 ,LPS刺激后lckmRNA表达水平增高 ,lck活性在刺激后 5min时最强 ,加入lck抑制剂PP1,IL 12刺激lck活性明显减弱。IL 12及LPS可以促进肾小管上皮细胞中P3 8活化、磷酸化 ,在 15min时最强 ,加入lck抑制剂后则抑制IL 12刺激时的P3 8磷酸化 ,而LPS刺激组不明显。【结论】IL 12 ,LPS可通过促进肾小管上皮细胞中lck/P3 8活化 ,参与炎症过程。

关键词：肾小管上皮细胞白细胞介素12 脂多糖 LPS lck

卵形鲳鲹fyn、lck和zap-70基因鉴定与表达分析

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卵形鲳鲹fyn、lck和zap-70基因鉴定与表达分析

作者：谢玉帅广西大学

学位级别：硕士

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是一种具有重要经济价值的鲈形目鱼类,在中国东南沿海地区被广泛养殖。然而,细菌、寄生虫和病毒性疾病的频繁发生,严重威胁着卵形鲳鲹养殖业的可持续发展。fyn、lck和zap-70是TCR信号通路的重要组成部分,是... 详细信息

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是一种具有重要经济价值的鲈形目鱼类,在中国东南沿海地区被广泛养殖。然而,细菌、寄生虫和病毒性疾病的频繁发生,严重威胁着卵形鲳鲹养殖业的可持续发展。fyn、lck和zap-70是TCR信号通路的重要组成部分,是T细胞活化的关键因素,在机体适应性免疫应答和自身性免疫疾病中发挥重要作用。研究fyn、lck和zap-70基因的分子特点及免疫应答机制可为卵形鲳鲹病害防控提供策略。本研究克隆鉴定了卵形鲳鲹fyn、lck和zap-70基因(分别命名为trfyn、trlck和trzap-70)。trfyn、trlck、trzap-70全长c DNA序列分别为2159bp、2133bp、2367bp;ORF分别为1614bp、1542bp、1830bp,分别编码537、513、609个氨基酸残基。SMART蛋白结构域分析表明trFyn、tr lck蛋白都是由1个SH3域、1个SH2结构域和1个Tyr Kc结构域组成;而tr Zap-70蛋白结构包括2个SH2结构域和1个Tyr Kc结构域。同源性分析表明这3个蛋白分别与其他鱼类Fyn、lck、Zap-70有较高的序列同源性。进化树分析表明trFyn、tr lck和tr Zap-70分别与鱼类Fyn、lck、Zap-70聚为一支。q PCR分析结果表明,这3个基因在健康卵形鲳鲹的所有组织中均能表达,且LPS、poly I:C和Vibrio alginolyticus刺激后,这3个基因的表达水平在头肾、脾脏、肝脏、鳃和肠中均显著上调。进一步的研究表明,trFyn、tr lck和tr Zap-70主要分布在HEK-293T细胞的细胞质中。免疫共沉淀实验显示tr Zap-70可以与trFyn或tr lck相互作用。此外,利用p ET-32a原核表达系统表达纯化获得了trFyn、tr lck和tr Zap-70重组蛋白。这些研究成果揭示了fyn、lck和zap-70在卵形鲳鲹抗病原微生物免疫反应中的重要作用,为进一步深入研究鱼类fyn、lck、zap-70的功能奠定了基础。

关键词： Trachinotus ovatus fyn lck zap-70 分子克隆免疫应答 TCR信号亚细胞定位 Co-IP

基于腺病毒介导的PD-1干扰对艾灸调控实验性类风湿性关节炎大鼠TCR信号通路lck、Fyn表达的影响

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中华中医药学刊 2019年第1期37卷 45-48页

作者：赖德利周海燕陶渊刘旭光成都中医药大学针灸推拿学院四川成都610075

目的:基于腺病毒载体介导的RNAi在体阻断PD-1在类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)大鼠模型的表达,研究艾灸对实验性RA大鼠TCR信号通路上lck、Fyn激酶的影响及其PD-1调控机制。方法:采用弗氏完全佐剂对模型组、治疗组和PD-1干扰... 详细信息

目的:基于腺病毒载体介导的RNAi在体阻断PD-1在类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)大鼠模型的表达,研究艾灸对实验性RA大鼠TCR信号通路上lck、Fyn激酶的影响及其PD-1调控机制。方法:采用弗氏完全佐剂对模型组、治疗组和PD-1干扰组进行造模。采用腺病毒载体介导的ShRNA-rPD-1进行基因干扰。采用麦粒灸"肾俞""足三里"两穴结束。采集大鼠脾脏组织,免疫组化法检测各组脾脏组织中Fyn、lck的表达情况。结果:与对照组比较,模型组大鼠脾脏组织中lck、Fyn的表达量明显升高表现(Plck、Fyn的表达量均明显低于模型组(Plck表达降低不如治疗组(P0.05)。结论:可明显降低TCR信号通路信号分子lck、Fyn的表达,但在PD-1被干扰的情况下,其抑制lck、Fyn表达的能力下降,表明该作用可能与PD-1对T细胞活化的负性调控作用相关。

关键词：艾灸类风湿性关节炎 PD-1 基因干扰 lck Fyn

透骨血竭散外敷对类风湿性关节炎大鼠T细胞抗原受体通路中lck、Fyn蛋白表达及滑膜细胞凋亡的影响

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广州中医药大学学报 2022年第9期39卷 2129-2135页

作者：毕四丽陈杜姜如邓文雯肖智长沙市第三医院湖南长沙410000

【目的】探讨透骨血竭散外敷对类风湿性关节炎(RA)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将44只大鼠随机分为假手术组、模型组、透骨血竭散组及扶他林组,每组11只。除假手术组外,其余各组大鼠构建RA模型。建模成功后,次日透骨血竭散组大鼠于... 详细信息

【目的】探讨透骨血竭散外敷对类风湿性关节炎(RA)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将44只大鼠随机分为假手术组、模型组、透骨血竭散组及扶他林组,每组11只。除假手术组外,其余各组大鼠构建RA模型。建模成功后,次日透骨血竭散组大鼠于左后足足跖部及踝关节外敷透骨血竭散,扶他林组相同部位外敷扶他林软膏,模型组及假手术组相同部位外敷空白凝胶膏剂。采用足容积测量仪测量大鼠左后足的肿胀体积;苏木素-伊红(HE)染色法观察踝关节病理形态并进行炎症细胞浸润评分;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)法测定滑膜细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测踝关节组织T细胞抗原受体(TCR)通路中lck、Fyn蛋白表达;免疫组织化学法检测踝关节滑膜组织Bax、Bcl-2阳性表达。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠足爪肿胀度升高,踝关节组织呈现明显RA病理改变,且炎症细胞浸润评分升高,踝关节组织lck、Fyn蛋白表达水平升高,滑膜组织Bcl-2阳性细胞比率升高、Bax阳性细胞比率降低(均Plck、Fyn蛋白表达水平降低,滑膜组织Bcl-2阳性细胞比率降低、Bax阳性细胞比率升高(均Plck、Fyn蛋白表达,抑制炎症细胞浸润,促滑膜细胞凋亡有关。

关键词：透骨血竭散类风湿性关节炎炎症细胞浸润滑膜细胞凋亡 T细胞抗原受体(TCR)信号通路 lck Fyn 大鼠