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佛手柑内酯对双氧水诱导人脐静脉内皮细胞衰老的影响

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中国组织工程研究 2016年第46期20卷 6885-6892页

作者：丁燕傅友单兰兰奈文青吴洪渊唐亮陈顺枝戴萌南方医科大学南方医院健康管理科广东省广州市510515 中南大学湘雅二医院湖南省长沙市410000

背景:有效的中医药治疗可以缓解内皮细胞的衰老,传统的中医药提取较困难,佛手柑内酯提纯简练,价格经济,关于佛手柑内酯在延缓内皮细胞衰老的研究中尚未见报道。目的:观察佛手柑内酯对双氧水诱导人脐静脉内皮细胞衰老的影响。方法:将人... 详细信息

背景:有效的中医药治疗可以缓解内皮细胞的衰老,传统的中医药提取较困难,佛手柑内酯提纯简练,价格经济,关于佛手柑内酯在延缓内皮细胞衰老的研究中尚未见报道。目的:观察佛手柑内酯对双氧水诱导人脐静脉内皮细胞衰老的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞采用过氧化氢处理建立衰老细胞模型,并用0.1,1,10μmol/L佛手柑内酯预处理。通过Western blot法检测各处理组pR b,pA mpk,pS 6,lc3-ⅱ,Beclin-1蛋白,β-半乳糖甘酶染色确定各组衰老细胞数,细胞免疫荧光检测pS 6阳性细胞数。结果与结论:(1)Western blot结果、β-半乳糖苷酶染色法和免疫荧光检测结果:采用佛手柑内酯后预处理的衰老细胞模型中,pS 6,pR b蛋白表达降低,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数和免疫荧光pS 6阳性细胞数减少,pA mpk,Beclin-1,lc3-ⅱ蛋白表达升高(P<0.05);(2)结果说明,佛手柑内酯预处理对双氧水诱导的人脐静脉内皮细胞有一定抗衰老作用。

关键词：组织工程细胞衰老内皮细胞组织构建血管内皮细胞佛手柑内酯 p Ampk m TOR 自噬衰老 H2O2 β-半乳糖苷酶染色 p S6 Beclin-1 lc3-ⅱ

Klotho与自噬在脓毒症急性肾损伤小鼠中的表达趋势

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中华急诊医学杂志 2017年第4期26卷 370-376页

作者：陈薪薪褚晓琼吕望仝欢陈宇赵光举洪广亮陈朝生卢中秋温州医科大学附属第一医院肾内科浙江省温州325000 温州医科大学附属第一医院急诊医学中心浙江省温州325000 温州市中医院肾内科浙江省温州325000

目的研究脓毒症急性肾损伤小鼠中Klotho与自噬的关系。方法选用清洁级健康雄性Balb／c小鼠，用盲肠结扎穿刺术（cecalligationandpuncture，CLP）建立小鼠脓毒症急性肾损伤模型，分别在CLP造模后3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d处死小鼠（n... 详细信息

目的研究脓毒症急性肾损伤小鼠中Klotho与自噬的关系。方法选用清洁级健康雄性Balb／c小鼠，用盲肠结扎穿刺术（cecalligationandpuncture，CLP）建立小鼠脓毒症急性肾损伤模型，分别在CLP造模后3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d处死小鼠（n=12只）；假手术组（Sham）（n=6）1d处死，正常组（Normal）（n=6）同时处死。留取血清检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN），肾组织行HE和PAS染色，观察光镜病理结果，电镜超微结构观察自噬体的形成，Westernblot和免疫组化检测肾组织Klotho蛋白、lc3蛋白和P62蛋白的表达以及分布。SPSS23．0软件采用独立样本资料的t检验进行统计学分析。结果CLP术后Scr和BUN明显升高，1d时达高峰，分别为（165．64±20．56）~mol／L和（45．51±d．05）mmol／L；HE和PAS染色显示肾小管刷状缘上皮细胞脱落，基底膜暴露，间质炎症细胞浸润，电镜显示肾脏可见自噬小体和吞噬泡。与Sham组相比，Klotho蛋白浓度从3h开始逐渐变淡，至1d时达最低值（t=51．851，P〈0．01），2d时有所恢复，然后逐渐转浓；lc3-ⅱ呈相反的变化趋势，从3h开始逐渐增浓，至1d时达峰值（t=-22．676，P〈0．01），2d时有所下降，然后逐渐变淡，而P62（t=6．43，P=0．002）作为自噬的相关蛋白与lc3-ⅱ反应相反，表明自噬的激活作用，在1d这个时间点最显著。免疫组化显示Klotho蛋白和lc3-II蛋白主要分布于肾小管胞浆内。CLP术后1d，Klohto蛋白明显减弱（t=-8．371，P〈0．01），lc3-ⅱ蛋白明显增浓（t=4．995，P=0．001）。结论脓毒症急性肾损伤是Klotho减少，自噬增强的一个过程，Klotho和自噬的表达具有一定的时间依赖性。

关键词：脓毒症急性肾损伤 Klotho 自噬盲肠结扎穿刺 lc3-ⅱ P62 小鼠

萝卜硫素干预纳米细菌诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白的表达

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中国组织工程研究 2019年第34期23卷 5503-5507页

作者：蒲道静郑府徐先顺丁文娟陈艳邹照银恩施土家族苗族自治州中心医院感染管理科湖北省恩施市445000 恩施土家族苗族自治州中心医院泌尿外科湖北省恩施市445000

背景:萝卜硫素能改善肾小管上皮细胞氧化应激损伤,抑制细胞凋亡,对肾小管上皮细胞损伤作用具有保护作用,但萝卜硫素对肾小管上皮细胞线粒体自噬的影响还有待研究。目的:验证萝卜硫素对纳米细菌诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡及线粒体... 详细信息

背景:萝卜硫素能改善肾小管上皮细胞氧化应激损伤,抑制细胞凋亡,对肾小管上皮细胞损伤作用具有保护作用,但萝卜硫素对肾小管上皮细胞线粒体自噬的影响还有待研究。目的:验证萝卜硫素对纳米细菌诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。方法:研究方案的实施符合恩施土家族苗族自治州中心医院对研究的相关伦理要求。纳米细菌取自恩施土家族苗族自治州中心医院泌尿外科临床确诊肾结石且未服药或手术患者的尿液,患者对实验方案完全知情同意。将人肾小管上皮细胞HK-2分为3组:对照组、纳米细菌组及萝卜硫素干预组(给予纳米细菌刺激同时加30μmol/L萝卜硫素)。采用CCK-8法检测HK-2细胞相对存活率,流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡率,Western Blot方法检测凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)及同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、lc3-ⅱ、lc3-Ⅰ的表达。结果与结论:①萝卜硫素能有效改善纳米细菌对HK-2细胞增殖的抑制作用(Plc3-ⅱ/lc3-Ⅰ比值上升(Plc3-ⅱ/lc3-Ⅰ比值(P<0.05);③结果说明,萝卜硫素可抑制纳米细菌诱导的肾小管上皮细胞HK-2的凋亡,缓解其由PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。

关键词：萝卜硫素肾小管上皮细胞纳米细菌线粒体自噬细胞凋亡 Bax Bcl-2 lc3-ⅱ lc3-Ⅰ

RhoA激酶1在氧化低密度脂蛋白诱导足细胞损伤中的作用

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中华肾脏病杂志 2017年第1期33卷 37-42页

作者：剧孟磊王慧珍左洋洋谢剑腾文枫李盛付蕾李静梁田田汪延辉史伟王文健南方医科大学研究生学院广州510515 广东省人民医院肾内科广东省医学科学院广州510515

目的观察氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对小鼠肾小球足细胞RhoA激酶1（ROCKl）表达和活性的影响，并初步探讨ROCKl在ox-LDL诱导的足细胞损伤中的作用。方法体外培养小鼠条件永生性足细胞，以ox-LDL20μg／ml刺激足细胞24h，采用Western印... 详细信息

目的观察氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对小鼠肾小球足细胞RhoA激酶1（ROCKl）表达和活性的影响，并初步探讨ROCKl在ox-LDL诱导的足细胞损伤中的作用。方法体外培养小鼠条件永生性足细胞，以ox-LDL20μg／ml刺激足细胞24h，采用Western印迹法检测正常对照组、ox-LDL刺激组、ROCKl siRNA＋ox-LDL组以及ROCKl过表达（wtROCKl）＋OX。LDL组磷酸化肌球蛋白磷酸化亚单位（p-MYPT）、nephrin、lc3-I／、p62、磷酸化（P）．ULKl（ULKl是一种丝，苏氨酸氨酸激酶）的表达水平；Dil-ox-LDL与足细胞共孵育4h，荧光显微镜观察各组足细胞脂质的含量情况。结果与对照组相比，ox-LDL刺激增加足细胞ROCK活性，同时伴有nephrin、lc3-ⅱ表达下降（P〈0．05），p62、p-ULKl表达上升（P〈0．05），细胞内胆固醇含量增加（P〈0．05）。增加ROCKl表达能进一步增加ox-LDL诱导的P-MYPT水平，并进一步降低nephrin、lc3-ⅱ的表达，增加p62、P-ULKl的表达（P〈O．05）和细胞内胆固醇含量（P〈0．05）；与之相反，抑制ROCKl表达能抑制ox-LDL诱导的P-MYPT水平上调，同时上调nephrin、lc3-ⅱ的表达（P〈0．05），下调p62、P-ULKl的表达（P〈0．05），降低细胞内胆固醇含量（P〈0．05）。结论ROCKl介导的脂质自噬障碍是ox-LDL诱导足细胞损伤的重要途径。

关键词：足细胞脂蛋白类 LDL 自噬 rho相关激酶类 lc3-ⅱ

自噬相关蛋白lc3-ⅱ在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

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安徽医科大学学报 2015年第5期50卷 628-631页

作者：于婷赵洪萍周颖赵卫东刘培淑山东大学附属齐鲁医院妇产科济南250012 安徽医科大学附属省立医院妇产科合肥230001

目的本研究检测微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(lc3-ⅱ)在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌发生、发展的相关性和意义。方法选取204例上皮性卵巢肿瘤标本,其中,卵巢浆液性囊腺瘤46例,交界性浆液性肿瘤28例,浆液... 详细信息

目的本研究检测微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(lc3-ⅱ)在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌发生、发展的相关性和意义。方法选取204例上皮性卵巢肿瘤标本,其中,卵巢浆液性囊腺瘤46例,交界性浆液性肿瘤28例,浆液性囊腺癌40例,黏液性囊腺瘤32例,交界性黏液性囊腺瘤30例,黏液性囊腺癌28例,另选取正常卵巢上皮组织28例作为对照。使用SP法检测正常卵巢上皮组织、上皮性卵巢肿瘤组织中lc3-ⅱ的表达,并结合浆液性癌、黏液性癌临床病理因素进行分析。结果1正常卵巢上皮中lc3-ⅱ无表达,卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤及浆液性癌中lc3-ⅱ的阳性率分别为4.5%、71.0%、95.0%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中lc3-ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(Plc3-ⅱ的阳性率分别为6.7%、66.7%、92.9%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中lc3-ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(Plc3-ⅱ表达与患者年龄、FIGO分期及病理学分级等临床病理特征均无关。结论 lc3-ⅱ在卵巢上皮性交界性肿瘤、癌中表达增高,自噬活性增强,可能与卵巢上皮性恶性肿瘤的进展有关。

关键词：卵巢肿瘤自噬 lc3-ⅱ

系统性红斑狼疮患者外周血T、B细胞自噬水平及其临床意义

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中国免疫学杂志 2015年第10期31卷 1380-1384,1388页

作者：陈燕文王超王旭光冯永民安宁吴洪銮李尚妹陶静莉刘伟敬刘华锋潘庆军广东医学院附属医院肾脏疾病研究所湛江524001 沈阳医学院附属第二医院肾内科沈阳110000 广东医学院附属医院临床研究中心湛江524001

目的:探讨系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血T、B淋巴细胞自噬水平及其临床意义。方法:入组就诊前4周内未用药的SLE患者68例;用流式细胞术检测23例正常人和68例经激素和免疫抑制剂治疗前后的SLE患者外周血T、... 详细信息

目的:探讨系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血T、B淋巴细胞自噬水平及其临床意义。方法:入组就诊前4周内未用药的SLE患者68例;用流式细胞术检测23例正常人和68例经激素和免疫抑制剂治疗前后的SLE患者外周血T、B淋巴细胞的自噬水平及其变化情况,并分析其与补体c3、SLEDAI评分和血清Anti-ds DNA水平的相关性。结果:治疗前SLE患者T淋巴细胞自噬水平显著高于正常人,活动组(SLEDAI score≥10)SLE患者显著高于稳定组(SLEDAI scorec3水平呈正相关(rs=0.371,P3 d后,SLE患者预后良好组的B淋巴细胞自噬水平即可显著升高(P<0.05);预后不良组治疗前后T、B淋巴细胞的自噬水平变化无统计学意义。结论:SLE患者外周血T、B淋巴细胞自噬水平异常,其变化与疾病活动度相关,有望作为疾病活动度指标和潜在的临床治疗靶标。

关键词：系统性红斑狼疮 T细胞 B细胞自噬 lc3-ⅱ

耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)损伤小鼠耳蜗基底膜miR-34a的作用及机制

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中国药理学通报 2021年第12期37卷 1757-1762页

作者：楚敏阎希芮龚永昌刘晴施建蓉董杨上海中医药大学教学实验中心上海201203 上海中医药大学基础医学院上海201203

目的探讨耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)致小鼠耳蜗基底膜损伤模型miR-34a的作用及其机制。方法采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜的离体培养,实验分为对照组、H_(2)O_(2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))、耳聋左慈丸组(5 mg·L^(-1)、10 mg·L^(-1)和50 mg... 详细信息

目的探讨耳聋左慈丸对H_(2)O_(2)致小鼠耳蜗基底膜损伤模型miR-34a的作用及其机制。方法采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜的离体培养,实验分为对照组、H_(2)O_(2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))、耳聋左慈丸组(5 mg·L^(-1)、10 mg·L^(-1)和50 mg·L^(-1))。q-RTPCR检测miR-34a表达,免疫荧光法检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,lc3)和选择性自噬接头蛋白(p62/sequestosome 1,SQSTM1)在耳蜗基底膜毛细胞的表达;TUNEL法检测基底膜毛细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,模型组小鼠耳蜗基底膜miR-34a表达明显升高(P34a表达下降(Plc3-ⅱ和p62蛋白表达明显增加(Plc3-ⅱ和p62蛋白表达降低(P34a,调节SIRT1蛋白,进而影响耳蜗毛细胞的自噬和凋亡,达到抑制H_(2)O_(2)致毛细胞氧化损伤的作用。

关键词：耳聋左慈丸老年性聋 miR-34a SIRT1 lc3-ⅱ p62 自噬凋亡

白藜芦醇通过TFEB调节细胞自噬的机制研究

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营养学报 2019年第4期41卷 374-378页

作者：陆晶韩莎莎何蒙娇陈良亮金家列连福治杭州师范大学医学院

目的研究白藜芦醇对HeLa细胞自噬的影响,探讨白藜芦醇通过转录因子TFEB调节自噬的可能机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理HeLa细胞后,CCK-8法检测细胞活性;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白lc3-... 详细信息

目的研究白藜芦醇对HeLa细胞自噬的影响,探讨白藜芦醇通过转录因子TFEB调节自噬的可能机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理HeLa细胞后,CCK-8法检测细胞活性;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白lc3-ⅱ和TFEB总蛋白水平以及TFEB在核提取液中的水平;荧光显微镜观察GFP-lc3融合蛋白在细胞内分布;荧光定量PCR检测TFEB及其靶基因mRNA水平。结果白藜芦醇处理24 h后HeLa细胞活性降低,激活型Caspase-3蛋白水平增加。白藜芦醇处理增加细胞lc3-ⅱ蛋白水平,在12h达到高峰,且呈剂量依赖性变化,同时GFP-lc3荧光在细胞内呈点状聚集。白藜芦醇处理增加总细胞和核提取液中TFEB蛋白水平,并增加TFEB自身mRNA及其靶基因mRNA水平。结论白藜芦醇可能通过TFEB在转录水平调节细胞自噬。

关键词：白藜芦醇 lc3-ⅱ 自噬 TFEB

基于PI3K/Akt通路探讨电针血清对肌卫星细胞自噬的影响

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中华中医药杂志 2020年第7期35卷 3642-3646页

作者：刘通于佳妮刘悦邝伟川陈欢王小寅文希江烨邱晓佳曾遥邹汉宏广东省第二中医院针灸康复科广州510095 广东省中医院康复科广州510120 南京医科大学第一附属医院针灸科南京210000

目的:观察电针血清调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路对肌卫星细胞自噬的影响。方法:原代培养多裂肌卫星细胞,选择传至第3代的肌卫星细胞,按本课题组前期的实验方法获取电针血清,先以空白血清(无血清,仅含培养基)干预细胞12... 详细信息

目的:观察电针血清调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路对肌卫星细胞自噬的影响。方法:原代培养多裂肌卫星细胞,选择传至第3代的肌卫星细胞,按本课题组前期的实验方法获取电针血清,先以空白血清(无血清,仅含培养基)干预细胞12h诱导肌卫星细胞自噬,后将各组细胞随机分为空白血清组、10%电针血清组、10%电针血清+LY294002组、3-MA组,各组分别干预12、24h后,采用CCK-8检测各组细胞的增殖能力,Western blot检测各组细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Beclin1、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(lc3-ⅱ)、Pax7蛋白的表达变化。结果:CCK-8结果显示,培养12h时,10%电针血清组细胞增殖能力优于其余3组(P3组及12h时电针血清组(P3-MA组优于空白血清组(P3-MA组p-Akt、Pax7蛋白表达显著升高(Pc3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P3-MA组p-Akt蛋白表达显著升高(Plc3-ⅱ蛋白表达显著降低(P3-MA组Pax7蛋白表达显著高于空白血清组(Plc3-ⅱ蛋白表达均显著升高(P3K/Akt通路有关。

关键词：电针血清肌卫星细胞 PI3K/Akt通路自噬 Beclin1 lc3-ⅱ Pax7