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电针神庭、百会穴对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及大鼠皮质和海马区lc3蛋白表达的影响

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时珍国医国药 2018年第8期29卷 2020-2024页

作者：冯晓东黄金李瑞青刘仁超河南中医药大学第一附属医院河南郑州450000 河南中医药大学河南郑州450000

目的观察电针神庭、百会穴对缺血再灌注大鼠学习记忆能力的影响,以及对大鼠皮质区和海马区中lc3蛋白表达的变化分析。方法54只Sprague-Dawley大鼠随机数字法分为电针组(18只)、模型组(18只),假手术组(18只)。电针组及模型组行线栓法制... 详细信息

目的观察电针神庭、百会穴对缺血再灌注大鼠学习记忆能力的影响,以及对大鼠皮质区和海马区中lc3蛋白表达的变化分析。方法54只Sprague-Dawley大鼠随机数字法分为电针组(18只)、模型组(18只),假手术组(18只)。电针组及模型组行线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型,假手术组行假手术。三组大鼠分别于造模后2h,5d,7d进行神经功能缺损评分。电针组于造模2h后取神庭、百会穴进行治疗,每次30min,每日1次。同时于针灸干预后第4～8d行Morris水迷宫实验观察大鼠的学习记忆能力;荧光定量PCR检测大鼠海马及皮质区lc3Ⅱ的含量及Western Blot法检测脑组织中细胞自噬相关蛋白lc3Ⅰ、lc3Ⅱ及lc3Ⅰ/Ⅱ比值。14d后处死3组大鼠,立即断头取脑,用TTC染色法观察大鼠脑梗死区域并计算脑梗死的体积。结果①神经功能学评分:与模型组相比较,电针组大鼠经针灸干预治疗后神经功能缺损评分明显降低(Plc3结果:与模型组相比较,电针组大鼠皮质及海马区lc3Ⅰ及lc3Ⅱ蛋白表达均明显升高,差异具有统计学意义(Plc3Ⅱ结果:与假手术组相比较,电针组与模型组大鼠海马及皮质区lc3Ⅱ含量明显升高,差异具有统计学意义(Plc3Ⅱ含量升高,差异具有统计学意义(P<0.001);⑤脑梗死体积计算:与模型组相比较,电针组脑梗死的区域和体积明显缩小(P<0.001)。结论电针神庭、百会穴可显著改善脑缺血再灌注损伤大鼠的学习及记忆能力。对自噬网络及其调控机制在脑卒中患者认知障碍的研究中起着至关重要的作用。

关键词：电针缺血再灌注自噬学习记忆 lc3蛋白

流感病毒M2蛋白与细胞自噬相关蛋白lc3对流感病毒生物学特性的影响

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流感病毒M2蛋白与细胞自噬相关蛋白LC3对流感病毒生物学特性的影响

作者：陆晨阳中国农业科学院

学位级别：硕士

A型流感病毒是一种囊膜病毒,其复制过程需要经过出芽步骤才能将完整的子代病毒粒子从宿主细胞中释放。目前的研究表明病毒蛋白中的M2是与出芽功能密切相关的,最新研究发现M2蛋白在流感病毒感染宿主细胞的过程中,会特异性的招募宿主细胞... 详细信息

A型流感病毒是一种囊膜病毒,其复制过程需要经过出芽步骤才能将完整的子代病毒粒子从宿主细胞中释放。目前的研究表明病毒蛋白中的M2是与出芽功能密切相关的,最新研究发现M2蛋白在流感病毒感染宿主细胞的过程中,会特异性的招募宿主细胞中的一种自噬相关的蛋白lc3,并将其定位至细胞膜表面。M2蛋白的胞内区域存在与lc3蛋白互作区域（lc3Interaction Region,LIR）,将该区域进行突变消除两者之间的相互作用后所得到突变型病毒的形态与稳定性都会受到影响,然而分子机制尚不清楚,M2蛋白的LIR区域与lc3蛋白在流感病毒出芽过程中如何影响子代病毒的形态与稳定性也不清楚。为了揭示lc3蛋白在流感病毒复制、子代病毒形态与稳定性的作用,本研究利用CRISPRCas9技术构建了lc3蛋白敲除的A549细胞系（A549-lc3KO）,通过对流感病毒在A549与A549-lc3KO的复制、产生病毒粒子的形态以及对胰酶耐受能力等进行比较,结果显示,流感病毒在A549-lc3KO细胞上的复制速率慢于A549,说明lc3蛋白对流感病毒的复制发挥作用。对在两种细胞上繁殖的病毒粒子形态与胰酶耐受性进行检测,结果显示在A549细胞中繁殖的病毒形态呈圆形均一,大小较为一致,囊膜完整,而在A549-lc3KO中复制的病毒粒子形态不均一,大小也存在较大差异。但两种病毒对胰酶处理的耐受性较为接近,没有明显差别。此结果说明lc3蛋白对流感病毒的复制、形态与大小存在一定影响,但对病毒的稳定性,也就是外源胰酶耐受能力没有影响。M2蛋白与lc3蛋白互作的LIR结构域是一个疏水结构域,为了进一步研究M2蛋白的LIR区域本身对病毒复制、形态以及稳定性的影响,分别将M2蛋白的LIR区域的氨基酸（FVI）突变为亲水性氨基酸SSS或者疏水性氨基酸AAA,利用反向遗传技术,拯救出两种突变病毒M2-FVI/AAA与M2-FVI/SSS,并对其生长特性、胰酶耐受力、病毒形态、致病性进行评估。结果显示与野生病毒比较,两种突变病毒和野毒在MDCK细胞上的复制能力类似。胰酶耐受实验结果显示M2-FVI/AAA与野毒株对胰酶处理具有耐受性,M2-FVI/SSS对胰酶处理较为敏感,内部蛋白会被胰酶消化降解,暗示此病毒的囊膜结构可能不完整。进一步对病毒粒子进行电镜观察显示M2-FVI/SSS病毒的囊膜存在缺损,这是此病毒对胰酶处理不耐受的原因,这也会导致病毒稳定性下降。致病性实验结果也显示M2-FVI/SSS对小鼠的致病性明显降低,在小鼠肺脏中的复制能力也显著下降,说明流感病毒M2蛋白的LIR区域亲疏水性对于流感病毒粒子的外膜完整性、致病性非常重要。本文对于A型流感病毒lc3蛋白与M2蛋白的LIR结构域对流感病毒生物学特性影响进行研究,发现M2蛋白的LIR区域的亲疏水性会对流感病毒的囊膜完整性以及致病性发挥重要作用。

关键词： A型流感病毒 M2蛋白 lc3蛋白病毒出芽

五味子乙素对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡及自噬蛋白lc3的影响

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广东医学 2018年第S2期39卷 23-26页

作者：王丽敏张勉之吴银娜天津市公安医院肾内科天津300040 天津市中医药研究院附属医院肾内科天津300120

目的探讨五味子乙素(Sch B)对顺铂(CDDP)诱导的小鼠急性肾损伤(AKI)肾小管上皮细胞凋亡与自噬的影响及作用机制。方法 30只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、Sch B对照组、模型组以及Sch B干预(Sch B浓度分别为20 mg/kg、100 mg/kg)组,每... 详细信息

目的探讨五味子乙素(Sch B)对顺铂(CDDP)诱导的小鼠急性肾损伤(AKI)肾小管上皮细胞凋亡与自噬的影响及作用机制。方法 30只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、Sch B对照组、模型组以及Sch B干预(Sch B浓度分别为20 mg/kg、100 mg/kg)组,每组6只。采用腹腔注射CDDP法建立AKI模型,收集各组血及肾组织,检测血肌酐(SCr)水平,免疫组化检测各组肾组织中p53蛋白含量,蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测各组肾组织p53蛋白、自噬标志蛋白微管相关蛋白L轻链3(lc3)的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测肾小管上皮细胞凋亡情况,光镜观察肾组织形态改变。结果 (1)与空白对照组比较,模型组SCr、肾小管上皮细胞凋亡数均升高(P3蛋白含量、p53蛋白表达、lc3蛋白表达均降低(P3蛋白、lc3蛋白表达(P3蛋白、lc3蛋白表达水平,改善细胞DNA损伤修复,增强肾组织的自噬有关。

关键词：五味子乙素顺铂 p53蛋白 lc3蛋白 DNA损伤修复自噬

胰腺癌中自噬相关蛋白Beclin1、lc3和P62的表达及临床意义

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世界最新医学信息文摘 2017年第19期 50-50页

作者：李平原山东省青岛市城阳区第二人民医院检验科

目的探讨胰腺癌中自噬相关蛋白Beclin1、lc3和P62的表达及临床意义。方法本次实验选取外科手术切除的胰腺癌组织标本36例为研究组,并选取相应癌旁正常组织中自噬相关蛋白Beclin1、lc3和P62的表达情况为对照组进行结果分析。结果采用免... 详细信息

目的探讨胰腺癌中自噬相关蛋白Beclin1、lc3和P62的表达及临床意义。方法本次实验选取外科手术切除的胰腺癌组织标本36例为研究组,并选取相应癌旁正常组织中自噬相关蛋白Beclin1、lc3和P62的表达情况为对照组进行结果分析。结果采用免疫组织化学法检测Beclin1蛋白在影响组织及癌旁正常组织中呈阳性的表达率分别为27.8%、91.7%;lc3蛋白的阳性表达率则为36.1%、75%;P62蛋白的阳性表达率是77.8%、47.2%。结论自噬相关蛋白Beclin1、lc3和P62参与了进展期胰腺癌的发展,胰腺癌自噬蛋白中Beclin1与lc3表达水平具有正比例关系,P62表达水平则与TNM分期相关。

关键词：胰腺癌自噬Beclin1蛋白 lc3蛋白 P62蛋白

长链非编码RNA在PEDV感染Vero-E6细胞中对自噬的调控作用

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中国畜牧兽医 2022年第5期49卷 1942-1950页

作者：王梓行邓兴梅邱润辉朱德馨李佳陶婷婷朱嘉乐孙志华张辉石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室石河子832000 动物健康养殖国家国际联合研究中心石河子832000

【目的】试验旨在研究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea viru,PEDV)感染非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)过程中对自噬的调控作用,以期为抗PEDV新型药物靶点的开发提供新思路。【方法】根... 详细信息

【目的】试验旨在研究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea viru,PEDV)感染非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)过程中对自噬的调控作用,以期为抗PEDV新型药物靶点的开发提供新思路。【方法】根据GenBank上公布的人lncRNA-HOTAIR基因序列(登录号:NR_047517.1),利用LongMan在线工具筛选lncRNA-HOTAIR的猴源同源序列(lncRNA-M),并利用RNAfold、LncLocator在线预测工具预测其二级结构和核质分布。建立PEDV感染的Vero-E6细胞模型,在0、6、12、24、36和48 h收集细胞,利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测微管相关蛋白1-轻链3(lc3)蛋白的表达,以明确病毒感染细胞后不同时间点自噬的发生情况。通过实时荧光定量PCR检测lncRNA-M在PEDV感染Vero-E6细胞模型中0、6、12、24、36和48 h的表达水平。设计并合成3条lncRNA-M的干扰片段:siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3,分别转染Vero-E6细胞,待细胞汇合度达到90%时接毒,感染48 h后利用实时荧光定量PCR检测lncRNA-M的表达情况,筛选出干扰效率最高的干扰片段。将干扰效率最高的干扰片段转染至Vero-E6细胞并接种PEDV后,通过Western blotting检测感染后24和48 h lc3蛋白的表达水平,以验证自噬的发生情况。【结果】成功筛选出lncRNA-HOTAIR猴源同源序列为lncRNA 0.1,并根据RNAfold预测结果生成lncRNA 0.1的RNA最小自由能二级结构;LncLocator预测结果表明,lncRNA 0.1在细胞核和细胞质中的分布分别为41.88%和37.78%。PEDV感染Vero-E6细胞48 h后,细胞皱缩、聚集成团,细胞膜融合形成合胞体;1.0%琼脂糖凝胶电泳结果显示,在1326 bp处出现目的条带,说明PEDV感染Vero-E6细胞模型成功建立。在PEDV感染的Vero-E6细胞模型中,Western blotting结果显示,6、12、24、36和48 h lc3Ⅱ的表达量呈上升趋势,lc3Ⅱ/lc3Ⅰ的比值在48 h最高且极显著高于0 h(Plc3的mRNA表达量在48 h最高,且极显著高于0 h(Plc3蛋白表达量均低于对照组,自噬受到抑制。【结论】PEDV感染Vero-E6细胞能够诱导自噬发生,lncRNA 0.1在感染过程中起到了促进自噬的作用。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) 自噬长链非编码RNA lc3蛋白

线粒体自噬蛋白联合产前超声在子痫前期中的价值研究

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线粒体自噬蛋白联合产前超声在子痫前期中的价值研究

作者：刘洋吉林大学

学位级别：硕士

目的:检测并研究子痫前期及对照组患者外周血血清中及胎盘组织中lc3、p62的表达水平,同时收集其彩色多普勒超声胎儿大脑中动脉PI值、RI值及S/D,将几者与临床数据结合并分析其临床意义,研究上述指标是否与子痫前期的发生、发展及病情严... 详细信息

目的:检测并研究子痫前期及对照组患者外周血血清中及胎盘组织中lc3、p62的表达水平,同时收集其彩色多普勒超声胎儿大脑中动脉PI值、RI值及S/D,将几者与临床数据结合并分析其临床意义,研究上述指标是否与子痫前期的发生、发展及病情严重程度相关。方法:(1)研究对象:2021年04月-2022年12月期间在吉林大学第二医院产科产检并住院分娩的产妇共50例,其中子痫前期产妇25例为子痫前期组(PE组),正常产妇25例为对照组(Con组)。子痫前期诊断标准依据《妇产科学(第9版)》,所有产妇终止妊娠方式均为剖宫产。正常组产妇无其他产科及内外科合并症,因为头盆不称或社会因素行剖宫产手术。(2)实验样本收集:终止妊娠前48h,用无菌紫色采血管抽取孕妇外周静脉血4ml,于室温下静置10-20分钟待血液自然凝固后置于离心机中离心(离心条件:4℃,2500r,20min),取上清液分装到经高压灭菌的1.5ml EP管中,将血清置于-80℃的冰箱中等待进行ELISA试验。在剖腹产术中,待胎盘娩出之后,在接近脐带根部的胎盘母体面处,取1小块大小约为1.0*1.0*1.0cm的胎盘组织,用生理盐水冲洗3遍,再用干纱布吸净表面的水分,置于10%福尔马林溶液中待免疫组化制片染色。(3)实验方法:采用ELISA法测定lc3和p62在血清中的含量;采用免疫组织化学染色(SP法)检测胎盘组织中lc3、p62蛋白的表达水平。采用GE公司的Voluson E10型彩超诊断仪,由经验丰富的超声医生测量胎儿的大小是否与临床孕周相符合并测出MCA的PI值、RI值及S/D。采用SPSS 27.0进行统计学分析,同时结合患者临床资料与胎儿大脑中动脉血流动力学数据进行相关性分析。结果:(1)ELISA实验结果显示:与对照组相比,子痫前期组患者血清lc3蛋白浓度显著高于对照组,具有显著的统计学差异(p蛋白浓度在子痫前期组及对照组之间无统计学差异(p>0.05)。(2)免疫组化染色结果显示:与对照组相比,lc3蛋白在子痫前期组胎盘组织中表达明显升高,具有显著的统计学差异(plc3与胎盘组织中lc3的表达呈正相关(plc3的表达与收缩压、舒张压有正相关性(p0.05)。胎儿大脑中动脉PI值、RI值、S/D与患者血压皆存在负相关性(plc3、P62的表达无相关性(p>0.05)。结论:(1)子痫前期患者线粒体自噬水平升高,可能参与子痫前期的发生发展,对线粒体自噬的研究有望对子痫前期的诊断及治疗提供新的思路。(2)lc3蛋白在血清及胎盘组织中表达趋势一致,其表达水平与患者血压升高程度相关。检测血清lc3蛋白可作为子痫前期患者临床风险评估的有效方式。(3)胎儿大脑中动脉血流动力学可一定程度上反映子痫前期患者的病情严重程度,但其与线粒体自噬蛋白表达水平的相关性尚未完全明确,仍需进一步探讨。

关键词：子痫前期 lc3蛋白 p62蛋白线粒体功能血清胎盘组织大脑中动脉

靶向BRD4的ATTECs设计、合成与降解活性研究

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药学实践与服务 2023年第1期41卷 18-25页

作者：周洛竹盛春泉海军军医大学药学系药物化学教研室上海200433

目的基于自噬小体绑定化合物(ATTEC)策略,设计并合成靶向BRD4的自噬降解剂,验证其降解活性。方法以化合物伊斯平斯(ispinesib)为lc3配体,通过不同长度的linker与化合物JQ1相连,产物结构经1H NMR、13C NMR与ESI-MS确证,并使用蛋白印迹法(... 详细信息

目的基于自噬小体绑定化合物(ATTEC)策略,设计并合成靶向BRD4的自噬降解剂,验证其降解活性。方法以化合物伊斯平斯(ispinesib)为lc3配体,通过不同长度的linker与化合物JQ1相连,产物结构经1H NMR、13C NMR与ESI-MS确证,并使用蛋白印迹法(Western Blot)技术测试其在不同细胞系中诱导BRD4的降解活性。结果获得5个首次报道的BRD4-ATTEC分子,化合物4在不同细胞系中显示出一定的BRD4降解活性。结论本研究发现了新型BRD4自噬降解剂,拓展了靶向自噬降解的适用范围。

关键词：自噬小体绑定化合物 BRD4 lc3蛋白伊斯平斯

回转器模拟微重力对神经细胞自噬的影响(英文)

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航天医学与医学工程 2012年第1期25卷 9-12页

作者：乔文艳孙乔梁峰吉吕柯刘鸿宇熊江辉李莹辉中北大学生理学实验室中国航天员科研训练中心航天医学基础与应用国家重点实验室

目的探讨回转模拟微重力对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)自噬的影响。方法利用回转模拟微重力的细胞学效应,回转条件下培养细胞12 h、24 h,相同条件下静置培养细胞作为对照。WesternBlot方法检测lc3蛋白表达变化水平。荧光显微镜观察GFP-... 详细信息

目的探讨回转模拟微重力对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)自噬的影响。方法利用回转模拟微重力的细胞学效应,回转条件下培养细胞12 h、24 h,相同条件下静置培养细胞作为对照。WesternBlot方法检测lc3蛋白表达变化水平。荧光显微镜观察GFP-lc3点状聚集物,计数含有大于5个GFP-lc3点状聚集物的细胞数量。结果回转组SH-SY5Y细胞lc3-II蛋白表达高于对照组,荧光显微镜检测到GFP-lc3点状聚集物也随之增多。结论回转可以引起SH-SY5Y细胞自噬增多。

关键词：模拟微重力回转自噬人神经母细胞瘤 lc3蛋白

迷迭香酸甲酯诱导自噬抑制人胃癌细胞增殖的研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2018年第3期39卷 26-30,36页

作者：庞磊曹桂云吴凡王小洪周芳超王方方李斐邓彬丁岩冰郁多男扬州大学医学院/江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏扬州225001 扬州大学附属医院江苏扬州225001 山东宏济堂制药集团股份有限公司济南250102

迷迭香酸甲酯(MR)梯度处理人胃癌细胞系SGC-7901和AGS细胞24h后,采用CCK-8法测定细胞的增殖活性;应用划痕试验观察细胞迁移能力的变化;流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡率;Western blot检测lc3蛋白水平,探讨MR对人胃癌细胞系SGC-7901和AGS... 详细信息

迷迭香酸甲酯(MR)梯度处理人胃癌细胞系SGC-7901和AGS细胞24h后,采用CCK-8法测定细胞的增殖活性;应用划痕试验观察细胞迁移能力的变化;流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡率;Western blot检测lc3蛋白水平,探讨MR对人胃癌细胞系SGC-7901和AGS细胞的增殖、迁移和凋亡的影响以及其与lc3蛋白的关系。结果表明:MR对人胃癌细胞系SGC-7901和AGS细胞增殖和迁移能力有明显抑制作用,且能够诱导细胞凋亡;同时MR能提高lc3蛋白水平。这一研究提示MR可显著抑制人胃癌细胞的增殖和迁移能力,同时可诱导细胞凋亡,其机制可能与lc3蛋白水平上调有关。

关键词：迷迭香酸甲酯胃癌增殖迁移凋亡 lc3蛋白