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线粒体途径参与LASS2/TMSG1基因诱导人肺癌95C细胞凋亡的机制

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临床与实验病理学杂志 2022年第12期38卷 1426-1431页

作者：李艳伟刘水仙刘峥璐徐晓艳内蒙古医科大学基础医学院病理学教研室呼和浩特010059

目的探讨LASS2/TMSG1对人肺癌95C细胞增殖和凋亡的影响及发病机制。方法采用RT-PCR、Western blot法检测LASS2/TMSG1在人不同转移潜能肺癌细胞系95C(低转移潜能)和95D(高转移潜能)中的表达。应用慢病毒转染法将靶向沉默LASS2/TMSG1基因... 详细信息

目的探讨LASS2/TMSG1对人肺癌95C细胞增殖和凋亡的影响及发病机制。方法采用RT-PCR、Western blot法检测LASS2/TMSG1在人不同转移潜能肺癌细胞系95C(低转移潜能)和95D(高转移潜能)中的表达。应用慢病毒转染法将靶向沉默LASS2/TMSG1基因的LV-CERS2-RNAi(30011-1)转染至95C细胞;流式细胞术及MTT检测肿瘤细胞的体外增殖和凋亡情况;倒置显微镜观察细胞常规培养下的状态,透射电镜观察细胞线粒体超微结构的变化;荧光显微镜结合JC-1染液观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blot法检测细胞中LASS2/TMSG1、Akt3、P-Akt3、Bax、BCL-2的表达水平。结果LASS2/TMSG1在95C细胞中的mRNA(t=16.85,P=0.004)及蛋白表达水平(t=15.26,P=0.004)明显高于95D细胞;LASS2/TMSG1沉默后,95C细胞中LASS2/TMSG1 mRNA(F=164.053,P1)和蛋白(F=18.293,P=0.003)的表达明显降低;流式细胞术检测LASS2/TMSG1基因沉默组细胞的凋亡率明显降低(F=17.340,P=0.003);MTT检测显示LASS2/TMSG1沉默组细胞从第4天(F=66.318,P1)、第5天(F=224.582,P1)开始,细胞增殖率明显增高;电镜和荧光显微镜观察发现,LASS2/TMSG1基因沉默,对线粒体膜电位水平的下降有干扰作用(F=14.687,P=0.005);P-Akt3蛋白(F=28.628,P1)及BCL-2蛋白(F=6.049,P=0.036)表达水平升高;Akt3、Bax蛋白表达量无相关性。结论LASS2/TMSG1基因可能抑制V-ATPase活性,使细胞内H+浓度升高,线粒体膜电位降低,线粒体凋亡通路中的相关蛋白释放促进95C细胞凋亡。

关键词：肺肿瘤 LASS2/TMSG1 肿瘤转移抑制基因线粒体途径凋亡

肿瘤转移抑制基因LASS2/TMSG1 S248A突变体通过增加ATP6V0C表达促进前列腺癌的侵袭

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北京大学学报（医学版） 2019年第2期51卷 210-220页

作者：张宽根周雨禾邵雅昆梅放由江峰刘北英裴斐北京大学基础医学院病理学系北京100191 北京科技大学机械学院北京100083 北京大学第三医院病理科北京100191

目的:探讨LASS2/TMSG1及其突变体在前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的分子作用机制。方法:构建表达LASS2/TMSG1全长及其4个突变体的pc DNA3真核表达载体,并稳定转染到高转移潜能前列腺癌PC-3M-1E8细胞系中;采用q PCR和Western blot法鉴... 详细信息

目的:探讨LASS2/TMSG1及其突变体在前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的分子作用机制。方法:构建表达LASS2/TMSG1全长及其4个突变体的pc DNA3真核表达载体,并稳定转染到高转移潜能前列腺癌PC-3M-1E8细胞系中;采用q PCR和Western blot法鉴定稳定转染效果,并分析不同点突变体对LASS2/TMSG1和ATP6V0C表达量的影响;采用生长曲线测定、四甲基偶氮唑蓝(MTT)掺入实验、软琼脂集落形成实验、细胞划痕修复实验、Matrigel穿膜侵袭实验和流式细胞术研究LASS2/TMSG1及其4个点突变体的细胞生物学功能,并通过免疫双重荧光染色分析LASS2/TMSG1不同突变体和ATP6V0C的相互作用情况。结果:q PCR和Western blot检测显示LASS2/TMSG1 S248A组较LASS2/TMSG1野生型组ATP6V0C表达增加了3倍(PLASS2/TMSG1 S248A组ATP6V0C表达明显增加;与LASS2/TMSG1野生型组相比,LASS2/TMSG1 S248A组的细胞增殖能力、锚着不依赖生长能力、细胞迁移能力(细胞迁移率从35.3%±3.2%增加到70.3%±3%)和侵袭能力(穿膜细胞数从50.0±3.2增加到203.0±6.5)明显提高(PLASS2/TMSG1第248位丝氨酸突变为丙氨酸后(S248A)能促进前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,其分子机制可能是lass2/tmsg S248A使ATP6V0C表达量增加,进而促进前列腺癌的侵袭,提示LASS2/TMSG1蛋白第248位丝氨酸是抑制前列腺癌侵袭的重要功能位点。

关键词：前列腺癌点突变液泡型ATP酶 ATP6V0C LASS2/TMSG1

肿瘤转移抑制基因LASS2/TMSG1全长及其截短体对人前列腺癌细胞生物功能的影响

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临床与实验病理学杂志 2020年第7期36卷 787-793页

作者：刘浩云裴斐北京大学基础医学院病理学系北京100191 北京大学第三医院病理科北京100191

目的构建肿瘤转移抑制基因LASS2/TMSG1全长及其截短体质粒,探讨其对人前列腺癌细胞生长、迁移、侵袭等生物学功能的影响。方法构建LASS2/TMSG1基因全长以及3个截短体的慢病毒质粒(pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro),并将其稳定转染到... 详细信息

目的构建肿瘤转移抑制基因LASS2/TMSG1全长及其截短体质粒,探讨其对人前列腺癌细胞生长、迁移、侵袭等生物学功能的影响。方法构建LASS2/TMSG1基因全长以及3个截短体的慢病毒质粒(pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro),并将其稳定转染到人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8中,采用Western blot法鉴定稳定转染的效果;然后采用软琼脂集落形成实验、细胞划痕修复试验、Transwell体外侵袭实验等分析LASS2/TMSG1基因全长以及3个截短体对人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8生物学功能的影响。结果LASS2/TMSG1蛋白和缺失Homeobox(Hox)结构域的截短蛋白,可以有效抑制PC-3M-1E8细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P均1);缺失TLC结构域的LASS2/TMSG1蛋白则丧失抑制前列腺癌细胞生长的功能。结论LASS2/TMSG1蛋白的TLC结构域是抑制前列腺癌细胞生长的关键功能域。

关键词：前列腺肿瘤截短体 LASS2/TMSG1

非小细胞肺癌中LASS2/TMSG1的表达及其临床意义

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临床与实验病理学杂志 2020年第3期36卷 323-325页

作者：赵挺祺李时荣王静媛韩希然胡飘飘乌云嘎徐晓艳内蒙古医科大学基础医学院病理学教研室呼和浩特010059

目的探讨LASS2/TMSG1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与临床病理特征、预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测NSCLC和癌旁正常组织中LASS2/TMSG1蛋白的表达,分析其表达与NSCLC临床病理特征的关系,并进行术... 详细信息

目的探讨LASS2/TMSG1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与临床病理特征、预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测NSCLC和癌旁正常组织中LASS2/TMSG1蛋白的表达,分析其表达与NSCLC临床病理特征的关系,并进行术后随访。结果LASS2/TMSG1蛋白在NSCLC组织中的表达(21/87,24.13%)明显低于正常肺组织(15/25,60.00%)。LASS2/TMSG1在NSCLC组织中的表达与肿瘤分化、淋巴结转移呈负相关(PLASS2/TMSG1阳性患者的总生存期及无瘤生存期均明显高于LASS2/TMSG1阴性患者(PLASS2/TMSG1是NSCLC患者的独立预后因素。结论LASS2/TMSG1可能抑制肺癌的发生、分化及转移,有望成为肺癌患者的预后指标之一。

关键词：肺肿瘤非小细胞肺癌 LASS2/TMSG1 预后

人肺癌A549细胞中LASS2/TMSG1调控的凋亡相关基因和通路的全基因组转录分析

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人肺癌A549细胞中LASS2/TMSG1调控的凋亡相关基因和通路的全基因...

作者：乌云嘎内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的LASS2/TMSG1是近年来新发现的一种肿瘤转移抑制基因,研究显示其包含TLC和Homeo-domain两个保守结构域,影响着肿瘤细胞的生长、侵袭、转移、代谢、细胞凋亡、分化等。基于全基因组表达谱芯片检测技术探究人肺癌A549细胞中lass2/tmsg... 详细信息

目的LASS2/TMSG1是近年来新发现的一种肿瘤转移抑制基因,研究显示其包含TLC和Homeo-domain两个保守结构域,影响着肿瘤细胞的生长、侵袭、转移、代谢、细胞凋亡、分化等。基于全基因组表达谱芯片检测技术探究人肺癌A549细胞中LASS2/TMSG1基因调控的凋亡相关基因和信号传导通路,探索基因之间的相互联系,发现影响生物体差异基因的协助脉络,并在复杂的作用链条中,系统地挖掘LASS2/TMSG1基因参与人肺癌细胞凋亡过程的作用机理。方法采用慢病毒感染实验构建LASS2/TMSG1基因沉默细胞株;采用划痕实验检测LASS2/TMSG1基因沉默对A549细胞迁移能力的影响;采用克隆形成实验检测LASS2/TMSG1基因沉默对A549细胞增殖能力的影响;采用Tunel/DAPI双染实验、Hoechst/PI双染实验检测LASS2/TMSG1基因对于A549细胞凋亡的影响;对LASS2/TMSG1基因沉默前后的人肺癌A549细胞采用全基因组表达谱芯片检测,筛选出差异基因、对差异基因和信号传导通路进行显著性分析、获得全局信号转导网络、信号通路作用网络、共表达调控网络;采用荧光实时定量PCR法和Western blot法验证全基因组表达谱芯片的一部分结果;应用小干扰RNA瞬转实验构建p3 8MAPK干扰细胞株,反向验证p3 8MAPK与LASS2/TMSG1的关系;采用SPSS22.0统计软件进行数据分析处理,两组样本均数比较采用t检验,P＜0.05表示两组数据差异显著,具有统计学意义。结果LASS2/TMSG1基因沉默组中的LASS2/TMSG1 mRNA及蛋白水平显著低于空白对照组、阴性对照组（荧光实时定量 PCR 法:t=3.36,P=0.028;t=5.56,P=0.005;Western blot 法:t=4.30,P=0.013;t=5.22,P=0.006）;与空白对照组、阴性对照组相比,LASS2/TMSG1基因沉默组的细胞迁移率均显著高于其他两组（t=29.72,P=0.000;t=53.06,P=0.000）;LASS2/TMSG1基因沉默组的细胞增殖能力均显著高于空白对照组、阴性对照组（t=17.20,P=0.000;t=12.27,P=0.000）;Tunel/DAPI双染实验结果显示,LASS2/TMSG1基因沉默组的凋亡率显著低于空白对照组、阴性对照组（t=3.21,P=0.033;t=4.54,P=0.011）;Hoechst/PI双染实验结果显示,LASS2/TMSG1基因沉默组的早期凋亡率显著低于空白对照组、阴性对照组（t=4.61,P=0.001;t=3.31,P=0.030）,但晚期凋亡和坏死情况三组差异不明显（晚期凋亡统计学数值:t=0.42,P=0.697;t=0.23,P=0.832;t=0.34,P=0.754;坏死情况统计学数值:t=0.74,P=0.501;t=0.44,P=0.682;t=0.96,P=0.389）;全基因组表达谱芯片检测筛选出2289个差异基因,其中上调基因1237个,下调基因1051个。上调差异基因的显著性分析主要分布在细胞分裂、核分裂、有丝分裂细胞周期的G2/M转换、细胞增殖等生物学过程,上调信号通路主要有细胞周期、DNA复制、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等;下调差异基因的显著性分析主要分布在细胞粘附、炎症反应、血管生成、ERK1和ERK2级联调节等生物学过程,下调信号通路主要有补体和凝血级联、细胞因子-细胞因子受体相互作用、肿瘤坏死因子信号通路、自噬-动物、细胞凋亡等;全局信号转导网络显示MAP2K6（MEK6）、MAP3K7（TAK1）呈现degree值最高且下调;信号通路作用网络显示细胞凋亡信号通路degree值位列第一且下调,MAPK信号通路degree值位列第二且上调;共表达调控网络显示degree值排在前十位的为TMX3、KIF23、HMMR、WISP2、PAPPA、UACA、CDC25C、CHP1、DBF4、TOP2A,其中 UACA为抗凋亡基因与细胞凋亡相关;通过荧光实时定量PCR法和Western blot法检测LASS2/TMSG1 基因沉默组中的 MAP2K6（MEK6）、MAP3K7（TAK1）、p38MAPK的mRNA及蛋白水平均显著低于空白对照组、阴性对照组,差异有统计学意义（均P＜0.01,详细结果见文中结果部分）,与基因芯片结果相符;p38MAPK干扰组中的p38MAPK mRNA水平及蛋白水平均显著低于空白对照组、阴性对照组（荧光实时定量 PCR 法:t=23.46,P=0.000;t=26.09,P=0.000;Western blot 法:t=9.24,P=0.000;t=14.81,P=0.000）;p38MAPK 干扰组的 LASS2/TMSG1 mRNA 及蛋白水平亦显著低于空白对照组、阴性

关键词：肺癌 LASS2/TMSG1 全基因组表达谱芯片技术 MAP2K6（MEK6） MAP3K7（TAK1） p38MAPK

LASS2/TMSG1基因通过神经酰胺途径参与人肺癌A549细胞增殖、凋亡及其机制的研究

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LASS2/TMSG1基因通过神经酰胺途径参与人肺癌A549细胞增殖、凋亡...

作者：韩希然内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的本课题旨在深入了解LASS2/TMSG1基因对体外培养人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,并观察LASS2/TMSG1基因在裸鼠皮下移植瘤生长过程中的作用,并初步探讨LASS2/TMSG1基因诱导人肺癌A549细胞凋亡的相关分子机制。方法1.流式细胞术Annexi... 详细信息

目的本课题旨在深入了解LASS2/TMSG1基因对体外培养人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,并观察LASS2/TMSG1基因在裸鼠皮下移植瘤生长过程中的作用,并初步探讨LASS2/TMSG1基因诱导人肺癌A549细胞凋亡的相关分子机制。方法1.流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测LASS2/TMSG1基因过表达前后人肺癌A549细胞的凋亡情况。2.平板克隆形成实验检测LASS2/TMSG1基因过表达前后人肺癌A549细胞的体外增殖能力。3.构建人肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察LASS2/TMSG1基因过表达前后裸鼠皮下移植瘤的生长情况。4.苏木精-伊红染色,观察裸鼠皮下肿瘤组织的镜下形态、克隆形成情况、凋亡坏死情况及肿瘤转移情况。5.免疫组织化学染色观察LASS2/TMSG1基因过表达前后裸鼠皮下肿瘤组织中Ki67的表达情况。6.ELISA方法检测LASS2/TMSG1基因过表达前后人肺癌A549细胞上清液及裸鼠肿瘤组织匀浆中神经酰胺及P38 MAPK蛋白的表达情况。7.运用SPSS22.0软件分析数据,P1)本课题组先前的实验结果显示,在人肺癌A549细胞中,经Western Blot检测发现过表达组肺癌细胞内LASS2/TMSG1蛋白表达水平明显升高,表明已成功构建LASS2/TMSG1基因过表达组。(2)流式细胞术结果显示,LASS2/TMSG1基因过表达组细胞的凋亡率(%)显著高于阴性对照组,分别为:31.51±1.41、11.72±1.07,(t=1.10,PLASS2/TMSG1基因过表达组细胞克隆形成百分比(%)显著低于阴性对照组,分别为:12.17±4.51、31.83±10.13,(t=3.07,PLASS2/TMSG1基因过表达组裸鼠肿瘤体积(mm)增长较慢,但无统计学意义(P>0.05)。测量两组裸鼠肿瘤组织的最终质量与体积,LASS2/TMSG1基因过表达组肿瘤组织的平均质量(g)略低于阴性对照组,分别为0.23±0.10,0.28±0.13,(t=0.75,P>0.05);LASS2/TMSG1基因过表达组肿瘤组织的平均体积(mm)低于阴性对照组,分别为90.60±45.26,143.90±89.40,(t=1.41,P>0.05),差异不显著。(5)通过苏木精-伊红染色观察发现,两组肿瘤细胞均呈现低分化腺癌形态;LASS2/TMSG1基因过表达组肿瘤细胞平均克隆形成数目(1.29±0.49)明显低于阴性对照组(2.29±0.95),(t=2.48,PLASS2/TMSG1基因过表达组肿瘤组织的坏死灶较大较彻底;两组裸鼠均未发现肝、脾、肾及淋巴结转移。(6)通过免疫组织化学染色发现,LASS2/TMSG1基因过表达组的裸鼠肿瘤组织中Ki67阳性率(%)(27.15±9.36)明显低于阴性对照组(44.80±6.05),(t=4.48,PLASS2/TMSG1基因过表达组的神经酰胺含量(μmol/L)显著高于阴性对照组,分别为155.00±3.83、128.50±13.71,(t=3.22,PLASS2/TMSG1基因过表达组的神经酰胺含量(μmol/L)显著高于阴性对照组,分别为265.00±19.34、226.20±7.99,(t=3.21,PLASS2/TMSG1基因过表达组的P38 MAPK蛋白含量(ng/m L)显著高于阴性对照组,分别为86.47±1.04、78.38±1.38,(t=8.14,PLASS2/TMSG1基因过表达组的P38 MAPK蛋白含量(ng/m L)显著高于阴性对照组,分别为89.93±3.92、62.32±3.54,(t=9.06,PLASS2/TMSG1基因作为一种肿瘤转移抑制基因,不仅可以调节肿瘤细胞的增殖,对肿瘤细胞的凋亡过程也有一定影响。LASS2/TMSG1基因可能会通过诱导神经酰胺的合成,进一步激活其下游的效应分子P38 MAPK蛋白等,启动级联信号传导通路,从而发挥促进人肺癌细胞凋亡,抑制人肺癌细胞增殖的作用。

关键词： LASS2/TMSG1 神经酰胺 P38MAPK 增殖凋亡