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l-selectin靶向微泡声学特性的初步实验研究

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L-Selectin靶向微泡声学特性的初步实验研究

作者：赵敏遵义医学院

学位级别：硕士

目的：探讨靶向脂质微泡造影剂增强淋巴结超声显像的可行性,为肿瘤转移淋巴结的超声诊断提供理论依据和实验数据。方法：1)采用静电吸附法将抗兔l-selectin多克隆抗体结合到脂质膜微泡表面,制备靶向脂质膜微泡造影剂;荧光免疫染色实验... 详细信息

目的：探讨靶向脂质微泡造影剂增强淋巴结超声显像的可行性,为肿瘤转移淋巴结的超声诊断提供理论依据和实验数据。方法：1)采用静电吸附法将抗兔l-selectin多克隆抗体结合到脂质膜微泡表面,制备靶向脂质膜微泡造影剂;荧光免疫染色实验验证抗体与脂质膜微泡的结合;流式细胞仪检测靶向微泡的结合率;B超声像图对比分析生理盐水组、普通脂质膜超声造影剂组和l-selectin靶向脂质超声造影剂组的灰度值。2)建立兔外阴癌转移淋巴结动物模型。经外周静脉对5只实验兔分别先后注射l-selectin靶向脂质膜超声造影剂和普通脂质膜超声造影剂,分为第一组、第二组,采用灰阶显像模式(GSIM),利用视频灰阶分析技术,来评价靶向微泡增强淋巴结超声显像的效果。结果：1)靶向脂质膜微泡的免疫荧光染色实验为阳性;抗体浓度为5ug/ml、15ug/ml、35ug/ml时靶向微泡的平均结合率分别为9.88±1.49%、29.59±2.23%、86.66±4.71%,两两比较均有统计学意义(Pl-selectin靶向脂质超声造影剂(TUCA)组B超声像图的平均灰度值分别为16.64±3.86dB、75.77±7.08dB、73.72±8.19dB。生理盐水组和UCA组二者比较有统计学意义(P0.05)。2)5只实验兔外阴癌腹股沟转移淋巴结造影显像后,视频定量分析：第一组先注射靶向微泡造影剂后平均灰度值为97.18±8.38dB,后注射脂质造影剂后平均灰度值为83.12±2.81dB,前后比较有统计学意义(Pl-selectin靶向微泡,结合率与加入抗体的浓度有关,同时在保持了一定的声学特性的基础上还具有良好的靶向性,可以增强兔外阴癌转移淋巴结的超声显像效果。

关键词：靶向微泡淋巴结多克隆抗体荷瘤兔 l-selectin

l-selectin、CD44、α6β1基因、蛋白表达与子宫颈癌发展及淋巴转移关系的研究

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L-selectin、CD44、α6β1基因、蛋白表达与子宫颈癌发展及淋巴转...

作者：陈江平河北北方学院

学位级别：硕士

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,严重危害女性身体健康,目前主要以手术治疗和放化疗为主,但是局部复发和浸润转移严重困扰临床手术治疗效果,影响患者生活质量。淋巴结转移不仅导致临床分期的滞后,而且治疗手段受到限制,不能彻底治疗,预后... 详细信息

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,严重危害女性身体健康,目前主要以手术治疗和放化疗为主,但是局部复发和浸润转移严重困扰临床手术治疗效果,影响患者生活质量。淋巴结转移不仅导致临床分期的滞后,而且治疗手段受到限制,不能彻底治疗,预后不良。因此对子宫颈癌淋巴结转移机制的分子具有重要现实意义。本课题选取与淋巴归巢有关的受体及其相关因子l-selectin、CD44、α6β1,通过原位杂交、免疫组化方法检测各种指标在子宫颈癌原发灶、淋巴结转移灶、脉管内癌栓等处的表达,结合临床病理参数,判断分析这些因子与子宫颈癌淋巴转移的关系,以期为临床预测子宫颈癌转移及综合治疗提供理论指导。本试验通过收集河北北方学院附属第一医院病理科手术切除的子宫颈癌组织蜡块标本104例。应用原位杂交检测发现l-selectin mRNA、 CD44mRNA、α6β1mRNA在子宫颈癌原发灶、淋巴结转移灶以及脉管癌栓处均存在阳性表达,同时检测发现l-selectin mRNA在低分化癌、浸润肌层超过内1/2、存在淋巴结转移、脉管内癌栓中存在高表达;CD44mRNA在浸润肌层超过内1/2、肿瘤体积大于3cm、存在淋巴结转移中存在高表达;α6β1mRNA在低分化癌、淋巴结转移、脉管内癌栓、肿瘤体积大于2cm组存在高表达,差别有统计学意义;l-selectin mRNA、CD44mRNA以及l-selectin mRNA、α6β1mRNA表达存在明显相关;CD44mRNA、α6β1mRNA表达间不存在明显相关。免疫组织化学结果显示：在子宫颈癌原发灶、淋巴结转移灶以及脉管癌栓处均存在l-selectin、CD44、α6β1的阳性表达,同时检测发现l-selectin表达水平与组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、脉管内癌栓病理参数间存在显著相关;CD44表达水平与肿瘤浸润深度、肿瘤体积、淋巴结转移病理参数存在明显相关;α6β1与临床分期、淋巴结转移、脉管内癌栓、肿瘤体积间存在明显相关;l-selectin、CD44以及l-selectin、α6p1表达存在明显相关;CD44、α6β1表达间不存在明显相关。子宫颈癌原发灶中l-selectin、CD44基因及蛋白的表达明显升高,而在淋巴结转移灶中明显降低;相反α6β1基因及蛋白在淋巴结转移灶中出现高表达。通过实验得出以下结论：1子宫颈癌组织中细胞高表达l-selectin mRNA、CD44mRNA、 α6β1mRNA可能促进其淋巴结转移。2. l-selectin、CD44、α6β1在子宫颈癌发展和淋巴结转移过程中起协同作用。3. l-selectin、CD44、α6β1基因及蛋白的高表达在子宫颈癌发展过程中起协同作用。

关键词：子宫颈癌淋巴归巢 l-selectin CD44 α6β1 淋巴转移

Elevated Birth Rates in CD62l (l-selectin)-Deficient BAlB/c Mice: Potential Involvement of NK Cells

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Open Journal of Immunology 2014年第4期4卷 148-156页

作者： Balint Farkas Jozsef Bodis Aaron R. Mangold Adrienn Angyal Ferenc Boldizsar Katalin Mikecz Tibor T. Glant Department of Obstetrics and Gynecology University of Pecs Clinical Center Pécs Hungary Section of Molecular Medicine Department of Orthopedic Surgery Biochemistry Internal Medicine (Section of Rheumatology) at Rush University Medical Center Chicago USA Janos Szentagothai Research Centre University of Pecs Pécs Hungary Department of Dermatology Mayo Clinic Scottsdale USA Department of Cardiovascular Science University of Sheffield Sheffield UK Department of Immunology and Biotechnology University of Pecs Pécs Hungary

Background: l-selectin (CD62l) is a cell surface adhesion molecule recently shown to play a critical role in determining endometrial receptivity and implantation in humans. By contrast, the l-selectin ligand is missing from the rodent endometrium. Interestingly, CD62l (l-selectin)-deficient BAlB/c mice delivered significantly higher numbers of viable offspring than wild type controls via mechanisms yet to be defined. Methods: Nulliparous CD62l-deficient (8-10-week-old, n = 25) or wild type (n = 18) females were mated with 43 age-matched males. Animals were sacrificed at gestational day (GD) 9.5. Tissue samples were analyzed by immunostaining and flow cytometry. Results: Mating wild type and CD62l-deficient BAlB/c mice revealed that the increased birth rate was due to the CD62l deficiency in females. Flow cytometric analysis demonstrated significant differences in the number of natural killer (NK) cells present in the uterus of pregnant CD62l- deficient mice compared to controls. Immunohistochemistry confirmed NK cell accumulation at the fetal-maternal interface. Discussion: Uterine NK cells have been shown to peak at GD 8-10 at the fetal-maternal interface. NK cells might regulate mouse fertility rates by facilitating development of the maternal spiral arteries, thereby stimulating the formation of larger vessels that facilitate intrauterine survival, however, their role is not obligate to spiral artery development. Conclusions: Diminished CD62l expression modified immune cell trafficking into the uterus of pregnant mice generating a microenvironment primarily dominated by NK cells resulting in improved embryonic survival rates.

关键词： l-selectin Pregnancy BAlB/c CD62l NK Cells lymphocyte Homing

Comparative study on traumatic effect and l-selectin change made by two blooddrawing modes in rat

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Journal of Nanjing Medical University 2005年第4期19卷 206-209页

作者： Jingye Pan Dakai Chen Zhijian Shen lei Chen Weixing Zhu ICU the First Affilliated Hospital of Wenzhou Medical Collage Wenzhou 325000 China

Objective： To compare carotid catheters blooddrawing and tail-cut blooddrawing in traumatizing rats and changing their intemal l-selectin. Methods： Two ways of bloodletting were selected to produce hemorrhagic shock models. Monoclonal antibody sign and flow cytometer were used to test neutrophil l-selectin dynamic expression in rats. Results： No remarkable differences were shown among different time points in neutrophil l-selectin expressing amount （ average fluorescence index）（ P 〉 0.05）. Compared with the normal control group, all cell surface expressions in empirical control group increased. Cell surface expressions reached the summit at 3 hours and kept the high level at 4-5 hours. A progressive increase of the mRNA expression peaked at 5 hours; the expressions in both groups of carotid catheters blooddrawing increased compared with normal control group, and remained stable after 3 hours compared with the Tail-cut Blooddrawing Group. Conclusion： l-sclectin expressions changed little in tail-cut blooddrawing rats, while carotid catheters resulted moderate or sever trauma. Therefore, it was suggested that it should not be set as hemorrhagic shock control model. As neutrophil l-selection expressions increased after trauma, the adhesion of leucocytes to the venule wall may be beneficial to the healing of wound and enhance the ability of anti-infection. The immediate increasing of neutrophil surface l-selectin expressions in this study was likely due to the direct release of lselectin from cytoplasm granules that do not depend on protein synthesis.

关键词： traumatic l-selectin rat

膀胱癌患者血清及尿中l-selectin检测的临床意义

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中华泌尿外科杂志 2003年第4期24卷 259-260页

作者：石冰冰李汉忠郝存勖臧美孚中国医学科学院北京协和医院泌尿外科 100730 石家庄市第二人民医院泌尿外科

目的　探讨膀胱移行细胞癌 (TCC)患者检测血、尿细胞粘附因子l selectin的临床意义。　方法　采用ElISA法测定 46例膀胱癌患者 (浸润性 2 0例 ,浅表性 2 6例 )及 14例良性前列腺增生患者血清及尿l selectin浓度。　结果　 3组患者术前l ... 详细信息

目的　探讨膀胱移行细胞癌 (TCC)患者检测血、尿细胞粘附因子l selectin的临床意义。　方法　采用ElISA法测定 46例膀胱癌患者 (浸润性 2 0例 ,浅表性 2 6例 )及 14例良性前列腺增生患者血清及尿l selectin浓度。　结果　 3组患者术前l selectin血清浓度分别为 :浸润性癌患者 ( 76 6 .3± 135 .1)ng ml,浅表性癌患者 ( 5 6 3.8± 118.2 )ng ml,良性前列腺增生患者 ( 5 44 .1± 12 1.2 )ng ml。浸润性癌组与浅表性癌组及良性增生组分别比较 ,差异有显著性意义 (P l selectin浓度显著低于术前 (P l selectin水平显著高于浅表癌组及良性前列腺增生组 (P l selectin浓度水平与TCC浸润程度有关 ,对TCC患者治疗前临床分期及选择手术方案有参考价值。

关键词：膀胱癌血清尿 l-selectin 检测组织细胞化学

复方双苓止泻散治疗大鼠腹泻对l-selectin在小肠黏膜表达的影响

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中国中医基础医学杂志 2007年第12期13卷 915-916页

作者：田铮李艳丽王慧娟赵昱河北医科大学组织学与胚胎学教研室河北石家庄050017

腹泻是常见病，具有很高发病率，复方中药治疗腹泻这一课题在研究领域中占有重要地位。选择素（selectin）家族是和白细胞运行密切相关的C类动物凝集素，包括E-、P-、l-选择素3个成员，它们分别存在于激活的血管内皮细胞表面、血小板和... 详细信息

腹泻是常见病，具有很高发病率，复方中药治疗腹泻这一课题在研究领域中占有重要地位。选择素（selectin）家族是和白细胞运行密切相关的C类动物凝集素，包括E-、P-、l-选择素3个成员，它们分别存在于激活的血管内皮细胞表面、血小板和白细胞表面，表达具有严格的细胞特异性。

关键词：复方双苓止泻散腹泻 l-selectin 黏附

KlF2与l-selectin、CXCR1/2对哮喘患者中性粒细胞粘附迁移的影响

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KLF2与L-selectin、CXCR1/2对哮喘患者中性粒细胞粘附迁移的影响

作者：雷雪春南华大学

学位级别：硕士

背景及目的:支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,既往认为哮喘是以嗜酸粒细胞(EOS)炎症为特征的变应性疾病。但近年来,越来越多的研究发现有一部分是以中性粒细胞为主,尤其是重症哮喘、难治性哮喘患者,但对于支... 详细信息

背景及目的:支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,既往认为哮喘是以嗜酸粒细胞(EOS)炎症为特征的变应性疾病。但近年来,越来越多的研究发现有一部分是以中性粒细胞为主,尤其是重症哮喘、难治性哮喘患者,但对于支气管哮喘患者气道内中性粒细胞增多的机制至今并未阐明。本实验在前期细胞及动物研究的基础上主要从临床水平去阐述KlF2与l-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18对支气管哮喘患者中性粒细胞粘附迁移的影响。方法:随机收集哮喘患者29例,并按照病情程度分为轻度哮喘组(l组)13例、中度哮喘组(M组)11例、重度哮喘组(S组)5例,并收集与哮喘患者性别及年龄相匹配的健康对照组(C组)12例,进行白细胞分类计数,利用梯度离心法分离中性粒细胞并利用迪夫染色鉴定中性粒细胞,Real-time PCR检测KlF2、l-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18m RNA表达,Western-blot检测KlF2、l-selectin、CXCR1、CXCR2蛋白表达,流式细胞术检测l-selectin、CD11a、CD11b、CD18平均荧光强度,ElISA检测血清中Il-8浓度,Transwell小室检测中性粒细胞的迁移能力,粘附实验检测中性粒细胞的粘附能力。结果:1外周血白细胞分类计数C组、l组、M组、S组中性粒细胞百分比(61.35(51.90～65.70)、62.54(54.75～66.12)、70.20(65.34～75.50)、89.84(73.35～94.57))依次呈上升趋势,且M组与C组、l组比较、S组与C组、l组比较差异均有统计学意义(Pl组比较、M组与l组比较差异均有统计学意义(PlF2、l-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18m RNA表达变化Real-time PCR结果显示:C组、l组、M组、S组KlF2m RNA相对表达量(1.03(0.88～1.95)、0.82(0.55～1.31)、0.70(0.37～0.98)、0.65(0.44～0.81))依次呈下降趋势,而l-selectin m RNA的相对表达量(1.01(0.92～1.14)、1.48(1.07～2.07)、2.93(2.62～3.51)、6.41(5.35～6.96))依次呈增加趋势,CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18 m RNA的表达均呈逐渐增加趋势,且以上因子M、S组与C组比较、l组与S组比较差异均有统计学意义(PlF2、l-selectin、CXCR1、CXCR2蛋白表达变化Western blot结果显示:C组、l组、M组、S组KlF2蛋白相对表达量(0.52(0.39～0.61)、0.45(0.39～0.55)、0.37(0.31～0.43)、0.26(0.25～0.30))依次呈下降趋势,且M、S组与C组比较、l组与S组比较差异均有统计学意义(Pl-selectin蛋白的表达量(0.26(0.22～0.28)、0.35(0.29～0.44)、0.38(0.31～0.46)、0.39(0.36～0.42))依次呈增加趋势,且l、M、S组与C组比较差异均有统计学意义(Pl-selectin、CD11a、CD11b、CD18的平均荧光强度流式细胞术结果显示:l-selectin、CD11a、CD11b、CD18的平均荧光强度在C组、l组、M组、S组中依次呈增加趋势,且M、S组与C组比较、l组与S组比较差异均有统计学意义(Pl-8表达情况ElISA结果显示:C组、l组、M组、S组血清中Il-8的表达量依次呈增加趋势,且M、S组与C组比较、S组与l组比较差异均有统计学意义(Pl的Il-8进行Transwell实验,结果显示:各组研究对象外周血中性粒细胞迁移率:S组>M组>l组>C组,且l、M、S组与C组比较、l组与S组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。8各组研究对象外周血中性粒细胞的粘附情况各组研究对象外周血中性粒细胞粘

关键词：支气管哮喘中性粒细胞 KlF2 l-selectin CXCR1/2 粘附迁移

大肠癌中CCR7、l-selectin、CD44v6和MMP9表达及其与淋巴转移的关系

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临床与实验病理学杂志 2013年第1期29卷 32-35页

作者：武欣李坤张凡刘军超林媛媛金春亭河北北方学院研究生部张家口075000 河北北方学院附属第一医院病理科张家口075000 河北北方学院病理学教研室张家口075000

目的探讨CC趋化因子受体7(CCR7)、l-selectin、CD44v6和MMP9在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌淋巴转移的关系。方法采用免疫组化PV 9000两步法检测104例大肠癌组织(大肠癌组)、55例癌旁正常组织(癌旁组)和34例转移灶组织(转移组)中CCR7... 详细信息

目的探讨CC趋化因子受体7(CCR7)、l-selectin、CD44v6和MMP9在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌淋巴转移的关系。方法采用免疫组化PV 9000两步法检测104例大肠癌组织(大肠癌组)、55例癌旁正常组织(癌旁组)和34例转移灶组织(转移组)中CCR7和l-selectin、CD44v6和MMP9的表达。结果大肠癌组、转移组中CCR7、l-selectin、CD44v6和MMP9阳性率明显高于癌旁组(Pl-selectin、MMP9表达呈正相关(Pl-selectin、MMP9表达相关;l-selectin与MMP9的表达呈正相关。结论 CCR7、l-selectin、CD44v6和MMP9在大肠癌中的表达与大肠癌的发生、淋巴转移有关,它们可能共同参与了大肠癌发生及淋巴结转移过程。

关键词：大肠肿瘤 CCR7 l-selectin CD44v6 MMP9 淋巴转移免疫组织化学

KlF2对类中性粒细胞S1PR1与l-selectin启动子活性的影响

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KLF2对类中性粒细胞S1PR1与L-selectin启动子活性的影响

作者：莫磊南华大学

学位级别：硕士

目的:研究KlF2对类中性粒细胞S1PR1与l-selectin启动子活性的影响。方法:1、空载及KlF2质粒转染293T细胞,分别使用PCR、WB检测空白组、空载组、过表达组KlF2 m RNA与蛋白水平的表达变化;2、将KlF2质粒与S1PR1、l-selectin启动子报告质... 详细信息

目的:研究KlF2对类中性粒细胞S1PR1与l-selectin启动子活性的影响。方法:1、空载及KlF2质粒转染293T细胞,分别使用PCR、WB检测空白组、空载组、过表达组KlF2 m RNA与蛋白水平的表达变化;2、将KlF2质粒与S1PR1、l-selectin启动子报告质粒共转染至293T细胞中,利用双荧光素酶报告基因技术,检测KlF2对S1PR1、l-selectin启动子活性的影响;3、使用1.3%二甲基亚砜（DMSO）诱导Hl-60细胞分化为类中性粒细胞（d Hl-60）,通过CHIP实验检测KlF2与S1PR1、l-selectin的启动子区域结合情况。结果:1、质粒瞬时转染293T细胞48小时后,通过荧光显微镜观测空载组、空白组、过表达组的荧光,并计算出转染效率为80%;通过RT-PCR、Westernblot检测KlF2 m RNA及蛋白表达量,结果显示过表达组KlF2的m RNA及蛋白表达较对照组显著增加,差异具有统计学意义（P＜0.01）。实验表明成功构建KlF2质粒进行后续实验。2、将l-selectin、S1PR1启动子报告基因质粒与KlF2质粒共同或分别转染293T细胞时,发现实验组较对照组中KlF2质粒能显著提高S1PR1、l-selectin启动子活性,差异具有统计学意义（P＜0.01）。3、使用1.3%DMSO诱导Hl-60细胞分化为类中性粒细胞,CHIP实验结果显示,KlF2与S1PR1启动子核心区（+75bp,-44bp）及l-selectin启动子核心区（-262bp,-377bp）结合。结论:类中性粒细胞KlF2可上调l-selectin、S1PR1启动子活性,并能结合S1PR1启动子核心区（+75bp,-44bp）及l-selectin启动子核心区（-262bp,-377bp）。

关键词：类中性粒细胞启动子 KlF2 S1PR1 l-selectin