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柠檬精油防龋作用的动物实验研究

柠檬精油防龋作用的动物实验研究

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作者：史艳芬天津医科大学

学位级别：硕士

目的：天然药物防龋是龋病预防和治疗的重要策略,目前已经成为龋病研究的焦点之一。前期研究证实,LEO (Lemon essential oil, LEO)对常见口腔致龋菌有抑制作用,并且在低于最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration, MIC)时仍然具... 详细信息

目的：天然药物防龋是龋病预防和治疗的重要策略,目前已经成为龋病研究的焦点之一。前期研究证实,LEO (Lemon essential oil, LEO)对常见口腔致龋菌有抑制作用,并且在低于最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration, MIC)时仍然具有抑制变异链球菌、远缘链球菌(Streptococcus sobrinus, S. sobrinus)等致龋菌早期粘附、产酸、产胞外多糖等致龋毒力因子的作用。本研究在前期工作的基础上,建立大鼠龋病模型,对LEO及其主要有效成分柠檬烯(Limonene, LIM)的体内防龋效能进行客观评价,为进一步的临床研究提供依据。方法： 1.水蒸气蒸馏法提取精油,气相-色谱-质谱-数据库联用系统分析其成分。 2.纸片扩散法测定LEO. LIM对S. sobrinus的MIC。 ***及LIM防龋作用的动物实验研究 (1)饲喂keyes2000#致龋饲料建立大鼠龋病动物模型： (2)实验分组：阳性对照组：洗必泰溶液(Chlorhexidine, CHX,0.12%);阴性对照组：蒸馏水(H20);实验组：LEO乳浊液(LEO,2.25mg/mL即MIC/2);LIM乳浊液(LIM,10.50mg/mL即MIC/2)。 (3)实验过程：在大鼠接种S. sobrinus第二天,取大鼠唾液,稀释涂平板,连续三天(28天-30天)检测S. sobrinus定植情况。鼠龄31天开始,用不同药物对大鼠进行口腔处理,连续5周,每天2次。64天时,采集大鼠唾液,稀释涂平板,菌落计数,随后,乙醚麻醉处死大鼠,制备牙颌骨标本。 (4)观察指标：以下检测值作为衡量各组防龋效果的指标大鼠唾液中总菌落数、S. sobrinus菌落数;S. sobrinus水平(S. sobrinus菌落数/总菌落数*100%);keyes记分;激光龋齿诊断仪探测荧光值。结果： ***的提取及成分分析： LEO的气相色谱-质谱总离子流色谱图(TIC)中,共检测出100余个色谱峰,鉴定了其中的40个色谱峰,其含量占挥发油总量的93.95%。主要成分是LIM及其衍生物。 ***及LIM对S sobrinus的MIC:LEO对S. sobrinus的MIC为4.50mg/mL;LIM对S. sobrinus的MIC为21.00mg/mL。 3.大鼠唾液中细菌水平： (1)唾液中***菌落数： CHX组0.05)。 (2)唾液中总菌落数及S. sobrinus菌落数／总菌落数： CHX组0.05)。 4.大鼠磨牙keyes龋齿记分： (1)大鼠磨牙平滑面龋keyes记分： CHX组keyes记分：窝沟E级和Dx级龋损keyes记分中,CHX组0.05),CHX组与LIM组之间差异有统计学意义(Pkeyes记分中,CHX组0.05)。 5.激光龋齿诊断仪探测荧光值：激光龋齿诊断仪探测荧光值,CHX组

关键词：柠檬精油龋病动物模型龋齿诊断 keyes记分

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不同能量密度HMME-PDT对防龋效果影响的实验研究

不同能量密度HMME-PDT对防龋效果影响的实验研究

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作者：张蕾天津医科大学

学位级别：硕士

龋病是一种由口腔中多种因素复合作用所导致的牙体硬组织进行性病损,大量临床及流行病学调查结果显示,中国居民各年龄段的患龋率均居高不下。龋病中细菌因素为主要的致龋因素,变形链球菌为主要致龋菌之一。致龋菌在口腔内的产酸代谢活... 详细信息

龋病是一种由口腔中多种因素复合作用所导致的牙体硬组织进行性病损,大量临床及流行病学调查结果显示,中国居民各年龄段的患龋率均居高不下。龋病中细菌因素为主要的致龋因素,变形链球菌为主要致龋菌之一。致龋菌在口腔内的产酸代谢活动是龋病产生的直接原因。因此,有效的干扰致龋菌的生长和代谢,即可达到预防控制龋病的目的。针对目前防龋方法的缺陷,探索一种安全有效的新型防龋方法显得尤为重要。光动力疗法（Photodynamic therapy, PDT）是一种有效的抗微生物疗法,其灭活细菌的作用受到越来越多的关注,它可有效治疗细菌性疾病而不产生耐药性,有利于在龋病预防中的应用。国内外已有应用PDT方法作用于体外游离菌及人工龋口腔生物膜菌斑中变形链球菌的研究,取得了良好的杀伤效果。本课题就是通过优化、选择合适的PDT参数,在构建的大鼠龋齿模型上探讨PDT的防龋作用及安全性。目的：通过应用532nm和630nm的半导体激光器和光敏剂血卟啉单甲醚（Hematoporyrin monomethyl Ether, HMME）对体外培养的变形链球菌（Streptococcus mutans, ***）进行光动力治疗,优化光敏剂孵育时间、浓度,选择适宜波长的激光器和激光照射参数;建立大鼠龋齿模型并进行光动力实验,从而探讨不同能量密度的PDT对大鼠口腔中***的杀伤作用、对龋齿的预防作用以及对口腔软组织安全性的影响,为PDT防龋的临床实践提供理论与实验依据。方法： 1.将***于37℃恒温培养箱中复苏,厌氧培养24h,制备1×108CFU/m1标准菌液待用。 2.应用532nm和630nm的半导体激光器和光敏剂HMME对96孔板内的***菌液进行PDT体外实验,根据平板菌落计数的结果,选择适宜波长的激光器、光敏剂孵育时间和激光参数,为下一步的大鼠龋齿模型实验提供依据。 3.通过在大鼠口腔接种标准***菌液,并喂以致龋饲料2000#,构建大鼠龋齿模型。 4.将56只Wistar大鼠随机分成七组：能量密度8.4J/cm2PDT组、能量密度12.6J/cm2pDT组、能量密度16.8J/cm2pDT组和单纯光敏剂组、单纯激光组、0.2%（质量分数）NaF阳性对照组、0.9%（质量分数）生理盐水阴性对照组。选择波长532nm,功率密度140mw/cm2的半导体激光为光源,40μg/ml HMME为光敏剂,按照上述分组进行PDT处理,每周进行一次,取样进行平板菌落计数,直至56d实验结束。依照平板菌落计数法观察各组对患龋牙面上***的杀伤作用;通过keyes记分观察龋齿预防效果;通过组织病理观察对大鼠口腔软组织的影响。结果： 1.体外实验光动力照射*** 96孔板的平板菌落计数结果显示,本实验最适合的PDT组合为光敏剂HMME浓度40μg/m1、孵育时间5min,半导体激光波长532nm、功率密度140mw/cm2。 2.根据HMME-PDT对致龋模型中***杀伤作用的平板菌落计数显示,与0.9%生理盐水阴性对照组相比,单纯HMME组***数量无显著差异性（P＞0.05）;单纯激光照射组和0.2%NaF阳性对照组,均能使***数量（CFU/ml）减少（P＜0.05）,杀菌率为50.38%、38.93%;而PDT防龋处理各组均可使大鼠致龋模型口腔中S. mutans数量显著减少（P＜0.05）,能量密度8.4J/cm2、12.6J/cm2、16.8J/cm2pDT组的杀菌率分别为61.49%、96.91%、97.52%。其中能量密度12.6J/cm2、16.8J/cm2pDT组与能量密度8.4J/cm2pDT组相比杀菌率显著提高（P＜0.05）,而能量密度12.6J/cm2pDT组与能量密度16.8J/cm2pDT组之间没有显著性差异（P＞0.05）。 3.在体视显微镜下对大鼠磨牙咬合面窝沟龋齿分别进行keyes记分。由keyes记分结果可以看出,与0.9%生理盐水阴性对照组相比,PDT处理组、NaF组、单纯激光组均有统计学意义（P＜0.05）,单纯光敏剂组无统计学意义（P＞0.05）。各PDT处理组之间相比,随着能量密度的不断增加,keyes记分呈现降低的趋势,但彼此之间并无统计学意义（P＜0.05）。 4.与空白对照组比较,各PDT防龋处理组的口腔软组织样本,都出现不同程度的改变。能量密度8.4J/cm2pDT组和12.6J/cm2pDT组中颊、舌粘膜充血、水肿现象的例数均少于16.8J/cm2pDT组;16.8J/cm2pDT组中,烦、舌粘膜充血水肿例数明显增多,也出现了少数轻度炎症细胞浸润现象,偶

关键词：光动力疗法变形链球菌牙菌斑血卟啉单甲醚 keyes记分

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