柠檬精油防龋作用的动物实验研究

作     者：史艳芬 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张向宇

授予年度：2013年

学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

主      题：柠檬精油 龋病 动物模型 龋齿诊断 Keyes记分 

摘      要：目的：天然药物防龋是龋病预防和治疗的重要策略,目前已经成为龋病研究的焦点之一。前期研究证实,LEO (Lemon essential oil, LEO)对常见口腔致龋菌有抑制作用,并且在低于最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration, MIC)时仍然具有抑制变异链球菌、远缘链球菌(Streptococcus sobrinus, S. sobrinus)等致龋菌早期粘附、产酸、产胞外多糖等致龋毒力因子的作用。本研究在前期工作的基础上,建立大鼠龋病模型,对LEO及其主要有效成分柠檬烯(Limonene, LIM)的体内防龋效能进行客观评价,为进一步的临床研究提供依据。 方法： 1.水蒸气蒸馏法提取精油,气相-色谱-质谱-数据库联用系统分析其成分。 2.纸片扩散法测定LEO. LIM对S. sobrinus的MIC。 ***及LIM防龋作用的动物实验研究 (1)饲喂Keyes2000#致龋饲料建立大鼠龋病动物模型： (2)实验分组：阳性对照组：洗必泰溶液(Chlorhexidine, CHX,0.12%);阴性对照组：蒸馏水(H20);实验组：LEO乳浊液(LEO,2.25mg/mL即MIC/2);LIM乳浊液(LIM,10.50mg/mL即MIC/2)。 (3)实验过程： 在大鼠接种S. sobrinus第二天,取大鼠唾液,稀释涂平板,连续三天(28天-30天)检测S. sobrinus定植情况。鼠龄31天开始,用不同药物对大鼠进行口腔处理,连续5周,每天2次。64天时,采集大鼠唾液,稀释涂平板,菌落计数,随后,乙醚麻醉处死大鼠,制备牙颌骨标本。 (4)观察指标：以下检测值作为衡量各组防龋效果的指标大鼠唾液中总菌落数、S. sobrinus菌落数;S. sobrinus水平(S. sobrinus菌落数/总菌落数*100%);Keyes记分;激光龋齿诊断仪探测荧光值。 结果： ***的提取及成分分析： LEO的气相色谱-质谱总离子流色谱图(TIC)中,共检测出100余个色谱峰,鉴定了其中的40个色谱峰,其含量占挥发油总量的93.95%。主要成分是LIM及其衍生物。 ***及LIM对S sobrinus的MIC:LEO对S. sobrinus的MIC为4.50mg/mL;LIM对S. sobrinus的MIC为21.00mg/mL。 3.大鼠唾液中细菌水平： (1)唾液中***菌落数： CHX组0.05)。 (2)唾液中总菌落数及S. sobrinus菌落数／总菌落数： CHX组0.05)。 4.大鼠磨牙Keyes龋齿记分： (1)大鼠磨牙平滑面龋Keyes记分： CHX组0.05),CHX组与LIM组之间差异有统计学意义(P0.05)。 5.激光龋齿诊断仪探测荧光值： 激光龋齿诊断仪探测荧光值,CHX组LEO组LIM组H2O组,其中,CHX组与实验组及H2O组相比,差异有统计学意义(P0.05),H2O组与其它各组比较差异有统计学意义(P0.05),LEO与LIM组之间差异无统计学意义(P0.05)。 结论： 1.水蒸气蒸馏法提取获得的LEO,主要成分以烯类化合物为主,占总含量78.85%,主要有：LIM(48.00%)及其衍生物β-蒎烯(17.00%)等。 2. LEO、LIM对口腔主要致龋菌***有生长抑制作用。 3.在大鼠龋病模型中,1/2MIC的LEO、1/2MIC的LIM并不影响大鼠口腔微生态平衡。