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内源性血管生成抑制因子A rresten在*** jm109中的表达及抗新生血管生成的药理学研究

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中国药理学通报 2006年第10期22卷 1229-1232页

作者：郑金平唐海英解军陈显久山西医科大学毒理学教研室山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西太原030001

目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体，并进行表达，抑制新生血管的药理学实验中发现，该表达产物具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的功能。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA，经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PC... 详细信息

目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体，并进行表达，抑制新生血管的药理学实验中发现，该表达产物具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的功能。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA，经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增出Arresten基因，构建重组质粒pBV220-Art转化*** jm109进行原核表达，大量表达提取Arresten蛋白，用鸡胚绒毛尿囊膜实验进行活性测定。结果成功构建的重组质粒pBV220-Arr在*** jm109菌株中2～8h均可获得表达，其中诱导4h表达效率最高，Arresten蛋白可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长，活性功能明显强于血管抑素。结论成功构建Arresten基因重组质粒pBV220-Arr，并可在*** jm109菌株中获得表达，Arresten蛋白具有明显的抑制血管生成的作用。

关键词： Arresten 原核表达载体 E.coli jm109 基因表达活性

高效jm109感受态细胞制备及转化条件的优化

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湖北农业科学 2012年第21期51卷 4902-4904页

作者：许彤刘钦松张丛丛刘孟刚山东博奥克生物科技有限公司山东聊城252000

采用不同的转化液制备大肠杆菌(Escherichia coli)jm109感受态细胞,并进行pUC18质粒的转化,考察细菌生长状态、转化液、转化的热激时间和转化后所用培养基对转化率的影响。结果表明,菌液A600 nm为0.705时采用TB转化液制备感受态细胞,在4... 详细信息

采用不同的转化液制备大肠杆菌(Escherichia coli)jm109感受态细胞,并进行pUC18质粒的转化,考察细菌生长状态、转化液、转化的热激时间和转化后所用培养基对转化率的影响。结果表明,菌液A600 nm为0.705时采用TB转化液制备感受态细胞,在42℃热激45 s,转化后采用SOC培养基振荡培养,转化效率最高,可达8.59×108CFU/μg质粒。

关键词： jm109 感受态细胞转化效率

人Leptin基因在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其生物学活性研究

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生物工程学报 2001年第2期17卷 175-178页

作者：赵跃然王郡甫游力高春义田志刚张捷韩娜尹进孙汭山东省肿瘤生物治疗研究中心

将人Leptin表达质粒pBV2 2 0 OB转化E .colijm 10 9,经热诱导获得了目的蛋白的表达。经SDS PAGE鉴定分析 ,表达产物以包涵体形式存在 ,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的 40 %以上。通过包涵体分离 ,SephacrylS2 0 0HR凝胶和DEAE5 2离子交... 详细信息

将人Leptin表达质粒pBV2 2 0 OB转化E .colijm 10 9,经热诱导获得了目的蛋白的表达。经SDS PAGE鉴定分析 ,表达产物以包涵体形式存在 ,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的 40 %以上。通过包涵体分离 ,SephacrylS2 0 0HR凝胶和DEAE5 2离子交换层析及HypersilC18柱反相色谱纯化 ,获得纯度在 95 %以上 ,内毒素含量小于10EU/mg的高纯度的重组人Leptin。Western blot鉴定表明 ,纯化表达产物能和抗Leptin抗体特异性结合 ;蛋白质N端 15个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致。纯化产物经复性处理 ,其分子中Cys96和Cys146形成二硫键。体内活性检测显示 ,纯化和复性的rh Leptin明显抑制BALB/c小鼠的进食和体重增长 ,提示其具有明显的生物学活性。

关键词： Leptin 基因表达大肠杆菌 jm109 蛋白纯化肥胖基因

中国强毒赖型钩端螺旋体新基因OmpL17的表达及其免疫原性

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生物医学工程学杂志 2005年第2期22卷 250-253页

作者：朱庆平赵计林鲍朗张会东赵明才黎光四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041

将Omp L17基因克隆于p GEX- 1λT载体,在大肠杆菌jm10 9中表达分子量约为5 4 KDa的GST-Omp L17融合蛋白,凝血酶切割后得到了大小约2 8KDa的Omp L17蛋白。用纯化的Omp L17蛋白免疫大白兔,制备了高滴度的特异性抗体(1∶4 896 )。本研究获... 详细信息

将Omp L17基因克隆于p GEX- 1λT载体,在大肠杆菌jm10 9中表达分子量约为5 4 KDa的GST-Omp L17融合蛋白,凝血酶切割后得到了大小约2 8KDa的Omp L17蛋白。用纯化的Omp L17蛋白免疫大白兔,制备了高滴度的特异性抗体(1∶4 896 )。本研究获得了纯化的Omp L17及其特异性抗体,为该外膜蛋白致病作用及免疫保护力研究奠定基础。

关键词： OmpL17 钩体外膜蛋白 GST融合表达免疫原性赖型钩端螺旋体新基因特异性抗体中国融合蛋白 jm109

稳定沉默Beclin1的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系的构建

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生物医学工程学杂志 2014年第5期31卷 1085-1089页

作者：魏传杰肖双江岚谭琰黄波龙鼎新南华大学公共卫生学院衡阳421001

为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌jm109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴... 详细信息

为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌jm109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒pGenesil-1-Beclin1和空白对照质粒pGenesil-1转染SH-SY5Y细胞,G418抗性筛选,在荧光显微镜下挑取单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株,经RT-PCR和Western blot检测Beclin1基因的表达。经酶切和DNA测序鉴定重组真核表达载体构建正确,成功筛选出两株细胞系。和对照组转染pGenesil-1的细胞系相比,转染pGenesil-1-Beclin1细胞系的Beclin1mRNA表达下降71.28%±1.45%(P<0.05),Beclin1蛋白表达下降75.50%±2.63%(P<0.05)。提示已经成功构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体并建立了Beclin1基因稳定沉默的SH-SY5Y细胞系,为研究Beclin1功能提供了细胞模型。

关键词： jm109 SH-SY5Y pGenesil-1-Beclin1 G418筛选细胞克隆

翅碱蓬CMO cDNA基因克隆、测序及重组植物表达载体的构建

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中国生物工程杂志 2006年第7期26卷 80-83页

作者：仲崇斌刘长江费腾袁晓东孙丽慧东北大学理学院生物技术研究所沈阳110004 沈阳农业大学食品学院沈阳110161 宝生物工程有限公司大连116600

从翅碱蓬叶片中提取总RNA,根据相关同源序列设计引物,使用反转录试剂盒进行RT- PCR,扩增得到翅碱蓬胆碱单加氧酶(CMO)cDNA,进行PCR产物测序;然后将CMO cDNA T-A克隆至pMD18-T-simple载体上,经测序正确后亚克隆至pBI121植物表达载体,进... 详细信息

从翅碱蓬叶片中提取总RNA,根据相关同源序列设计引物,使用反转录试剂盒进行RT- PCR,扩增得到翅碱蓬胆碱单加氧酶(CMO)cDNA,进行PCR产物测序;然后将CMO cDNA T-A克隆至pMD18-T-simple载体上,经测序正确后亚克隆至pBI121植物表达载体,进行酶切及克隆测序鉴定。

关键词：胆碱单加氧酶 pMD18-T-simple载体 pBI121植物表达载体大肠杆菌 jm109

肺炎链球菌不同菌株自溶酶基因的克隆、序列分析及重组表达

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中华传染病杂志 2005年第2期23卷 87-90页

作者：袁竹青吴忠道余新炳张扣兴郑焕钦徐劲中山大学中山医学院病原生物学研究所广州510089 中山大学第三附属医院呼吸内科

目的克隆肺炎链球菌自溶酶(LytA)的基因序列,并进行重组表达。方法分别提取不同临床分离株的基因组DNA,根据已知肺炎链球菌野生R6株LytA基因序列设计引物,进行PCR扩增,将获得的目的基因片段克隆入原核表达质粒,然后测序;利用生物信息学... 详细信息

目的克隆肺炎链球菌自溶酶(LytA)的基因序列,并进行重组表达。方法分别提取不同临床分离株的基因组DNA,根据已知肺炎链球菌野生R6株LytA基因序列设计引物,进行PCR扩增,将获得的目的基因片段克隆入原核表达质粒,然后测序;利用生物信息学方法,对不同临床分离株LytA基因序列进行比较分析,同时进行LytA基因的重组表达。结果从不同临床分离株的基因组中均扩增出完整的LytA基因片段,成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-L-ytA。比较不同临床分离株LytA基因的DNA序列及推测的氨基酸序列,发现各株LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异。通过异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导,LytA基因在大肠埃希菌jm109中得到高效表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结果显示pGEX-4T-1-L-ytA融合蛋白相对分子质量约62000,与理论预测一致。结论序列分析发现各分离株的LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异,但同源性极高,推测LytA基因序列保守,可用于疫苗研发。

关键词：肺炎链球菌重组表达十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳酶基因分析及临床分离株氨基酸序列基因序列自溶菌株基因组DNA 原核表达质粒相对分子质量基因片段 PCR扩增生物信息学 DNA序列 jm109 大肠埃希菌 A基因

天然蒙脱石防治烧伤后肠道细菌移位的实验研究

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中华烧伤杂志 2005年第2期21卷 89-92页

作者：苏海涛李宜姝陆树良孙曼青春李宗瑜邵铁滨黄丽滨曲滨杨心波张秀英哈尔滨市第五医院烧伤科 150040 上海第二医科大学瑞金医院烧伤科

目的　探讨天然蒙脱石对烧伤大鼠肠道细菌移位的防治作用。　方法　SD大鼠54只,分为正常对照组6只、烧伤对照组与烧伤治疗组各24只。后两组大鼠预先喂服转染了质粒pUC19的示踪菌jm109,证实质粒已定植于其肠道后,制成30%TBSAⅢ度烫伤(以... 详细信息

目的　探讨天然蒙脱石对烧伤大鼠肠道细菌移位的防治作用。　方法　SD大鼠54只,分为正常对照组6只、烧伤对照组与烧伤治疗组各24只。后两组大鼠预先喂服转染了质粒pUC19的示踪菌jm109,证实质粒已定植于其肠道后,制成30%TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤)模型。烧伤治疗组大鼠伤后立即喂服天然蒙脱石0. 6g d-1 kg-1,烧伤对照组大鼠不喂服药物。观察正常对照组大鼠以及烧伤对照组、烧伤治疗组大鼠伤后12h和1、3、5d血液、肠系膜淋巴结细菌移位情况,并行酶切鉴定;检测大鼠肠组织丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量;用病理学方法观察整段小肠的损伤情况,测量空肠黏膜绒毛高度并计算基底膜细胞核分裂相。　结果　血液细菌培养:伤后1、5d,烧伤对照组阳性鼠数多于正常对照组,烧伤治疗组阳性鼠数少于烧伤对照组(P<0 05).肠系膜淋巴结细菌定量:烧伤治疗组伤后1、5d为(38±16)、(68±20)集落形成单位(CFU) /g;烧伤对照组伤后1、5d为( 228±67 )、( 183±29 )CFU/g,明显高于前者(P<0. 01 ).MDA、SOD含量:烧伤治疗组与烧伤对照组伤后各时相点比较,差异有统计学意义(P<0. 05).烧伤治疗组大鼠伤后各时相点空肠绒毛高度及基底膜细胞核分裂相明显高于或多于烧伤对照组(P<0. 05或0. 01)。

关键词：肠道细菌移位蒙脱石烧伤后天然实验研究超氧化物歧化酶(SOD) 丙二醛(MDA) 肠系膜淋巴结正常对照组基底膜细胞血液细菌培养集落形成单位核分裂相治疗组 jm109 肠黏膜屏障防治作用 SD大鼠 Ⅲ度烫伤 TBSA 酶切鉴定

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中华医学信息导报 2010年第19期25卷 14-16页

鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白基因影响高转移人前列腺癌细胞体外生物学行为的机制探讨为了探讨鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白（PAG1）基因对高转移人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8细胞体外生物学行为影响的机制，于文娟（北京大学医学部... 详细信息

鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白基因影响高转移人前列腺癌细胞体外生物学行为的机制探讨为了探讨鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白（PAG1）基因对高转移人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8细胞体外生物学行为影响的机制，于文娟（北京大学医学部病理学系，现在青岛大学医学院附属医院病理科）等采用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导jm109细菌中GST—Rafl—Ra5结合域（GST—Rafl—RBD）融合蛋白的表达，其中Rafl—RBD能特异性地与活性Ras（GTP—Ras）结合，

关键词：人前列腺癌细胞系青岛大学医学院附属医院北京大学医学部生物学行为磷酸化蛋白导读蛋白基因 jm109