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An immunoglobulin Y that specifically binds to an in silico-predicted unique epitope of Zika virus non-structural 1 antigen

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Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 2022年第1期15卷 35-43页

作者： Leonardo A.Guevarra Jr Scott Dean P.De Sagon Treena Rica D.Teh Maria Katrina Diana MCruz Nikki Cyrill C.Capistrano Austine James Z.StaMaria Laarni Grace M.Corales Leslie Michelle M.Dalmacio Department of Biochemistry and Molecular Biology College of MedicineUniversity of the Philippines ManilaPhilippines Department of Biochemistry Faculty of PharmacyUniversity of Santo TomasPhilippines Research Center for Natural and Applied Sciences University of Santo TomasPhilippines

Objective:To identify unique immunogenic epitopes of Zika virus non-structural 1(NS1)antigen and produce immunoglobulin Y(igy)for potential use in he diagnosis of of Zika virus infection.Methods:Immunogenic epitopes were identified using in silico B-cell epitope prediction.A synthetic peptide analog of the predicted epitope was used to induce antipeptide igy production in hens which was purified using affinity chromatography.Presence of purified igy and its binding specificity were performed by gel electrophoresis and ELISA,respectively.Results:Out of the nine continuous epitopes identified,the sequence at position 193-208(LKVREDYSLECDPAVI)was selected and used to produce anti-peptide igy.The produced igy was found to bind to the synthetic analog of the Zika virus NS1 immunogenic epitope but not to other flaviviruses and random peptides from other pathogens.Conclusions:In this study,we identified an immunogenic epitope unique to Zika virus that can be used to develop a serodiagnostic tool that specifically detect Zika virus infection.

关键词： Immunoglobulin Y igy B-cell epitope prediction Flavivirus Non-structural 1 antigen Zika virus

Chicken egg yolk antibodies (igy) as non-antibiotic production enhancers for use in swine production： a review

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Journal of Animal Science and Biotechnology 2016年第1期7卷 57-66页

作者： Xiaoyu Li Lili Wang Yuhong Zhent Shuying Li Yongping Xu School of Life Science and Technology Dalian University of TechnologyDalian 116024China Ministry of Education Center for Food Safety of Animal Origin Dalian 116620China Department of Pharmacy Dalian Medical UniversityDalian 116044China Dalian SEM Bio-Engineering Technology Co.Ltd Dalian 116620China

In recent years, the use of in-feed antibiotics for growth and disease prevention in livestock production has been under severe scrutiny. The use and misuse of in-feed antibiotics has led to problems with drug residues in animal products and increased bacterial resistance. Chicken egg yolk antibodies （igy） have attracted considerable attention as an alternative to antibiotics to maintain swine health and performance. Oral administration of igy possesses many advantages over mammalian IgG such as cost-effectiveness, convenience and high yield. This review presents an overview of the potential to use igy immunotherapy for the prevention and treatment of swine diarrhea diseases and speculates on the future of igy technology. Included are a review of the potential applications of igy in the control of enteric infections of either bacterial or viral origin such as enterotoxigenic Escherichia coil, Salmonella spp., rotavirus, porcine transmissible gastroenteritis virus, and porcine epidemic diarrhea virus. Some potential obstacles to the adoption of igy technology are also discussed.

关键词： Diarrhea Disease control Egg yolk antibodies igy Swine

Anti-Recombinant Gametocyte 56 Protein igy Protected Chickens from Homologous Coccidian Infection

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Journal of Integrative Agriculture 2012年第10期11卷 1721-1728页

作者： DING Jun LIU Qiao-rong HAN Jin-peng QIAN Wei-feng LIU Qun Key Laboratory of Animal Epidemiology and Zoonosis Ministry of Agriculture/College of Veterinary Medicine China Agricultural University

Coccidiosis is caused by intra-cellular infection of Eimeria spp., which goes through a complex life cycle in the intestinal mucosa of infected hosts. Specific immunoglobulins （igy） could be produced in egg yolk by immunizing hens with specific antigens. In the present study, we cloned the E. maxima gain56 gene, expressed the GST-GAM56 fusion protein and raised igy to GST-GAM56 in hens. The anti-GST-GAM56 igy antibody was isolated and used to treat chickens infected with E. maxima oocysts. Intramuscular injection of the antibodies provided minimal protection against parasite infection. However, oral dosing of the igy 3 or 5 d after oocyst inoculation significantly improved body weight gain, reduced oocyst output and intestinal lesion score were reduced at 3 or 5 d after oocyst challenging, compared to the untreated control group. Our findings suggest that the igy to gam56 could be an effective prophylactic or therapeutic agent against E. maxima infection in chickens and should have a practical application value.

关键词： Eimeria maxima recombinant GST-GAM56 igy therapeutic agent

恩诺沙星与环丙沙星特异性igy制备及其ELISA检测方法的建立

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恩诺沙星与环丙沙星特异性IgY制备及其ELISA检测方法的建立

作者：史圣锐山西农业大学

学位级别：硕士

氟喹诺酮类药物（FQs）在畜牧水产养殖业中广泛应用,但在临床中的过量使用与不规范应用常常导致FQs在动物体内与环境介质中的残留,对人类健康与公共安全构成威胁。FQs现有的检测方法以仪器分析法与免疫检测法为主。仪器检测兽药残留的... 详细信息

氟喹诺酮类药物（FQs）在畜牧水产养殖业中广泛应用,但在临床中的过量使用与不规范应用常常导致FQs在动物体内与环境介质中的残留,对人类健康与公共安全构成威胁。FQs现有的检测方法以仪器分析法与免疫检测法为主。仪器检测兽药残留的方法存在设备昂贵、处理复杂、不适合现场检测等问题。因此,研究简便、快速、敏感、低成本的免疫检测方法对保障动物源性食品安全有着重要的意义。本研究通过活性酯法分别构建环丙沙星（CIP）与恩诺沙星（ENR）人工抗原,分别免疫产蛋鸡,制备CIP和ENR特异性卵黄抗体（igy）,并建立基于igy的间接竞争ELISA检测方法,为动物性食品性中氟喹诺酮类药物的残留检测奠定基础。研究结果如下:将人工抗原分别与猪甲状腺球蛋白（Thy）、血蓝蛋白（KLH）和牛血清白蛋白（BSA）进行偶联,制备免疫原和包被原。免疫蛋鸡,定期收集鸡蛋,采用聚乙二醇沉淀法提取igy抗体。通过对ENR间接竞争ELISA工作条件的优化,建立了基于igy的快速检测方法,基于ENR-igy的ELISA检测方法,其IC为3.50 ng/m L,最低检出限为0.25 ng/m L,线性检出范围为0.63～25.2 ng/m L。对基于igy的ENR间接竞争ELISA方法进行交叉试验,结果发现,所研制的抗体对ENR的特异性极高,与所有的结构相似物的交叉反应性均小于1%。回收试验表明,样品在20倍稀释下,可以消除样品基质对基于igy的ENR间接竞争ELISA方法的干扰。基于igy的ELISA检测方法,ENR在牛奶和猪尿样品中的回收率分别在85.30～122.30%和75.4～115.70%之间,变异系数分别在4.12～5.33%和4.12～7.24%之间。高效液相色谱荧光检测器（HPLC-FLD）方法的平均回收率范围为85.30～122.30%和75.40～115.70%,变异系数在3.55～4.35%和3.25～5.24%,两方法测定结果一致。以上结果表明,基于igy的ENR-ELISA检测方法可用于动物源性食品与动物尿液样品中ENR残留分析。通过对CIP间接竞争ELISA工作条件的优化,建立了基于igy的快速检测方法,基于CIP-igy的ELISA检测方法,其IC为4.77 ng/m L,最低检出限为0.29 ng/m L,线性检出范围为0.78～32.47 ng/m L。对基于igy的ENR间接竞争ELISA方法进行交叉试验,结果显示该ELISA方法除与沙拉沙星、马波沙星的交叉反应性高于10%外,与其结构类似物的交叉反应性均低于10%,说明该卵黄抗体的特异性较强,对环丙沙星的检测特异性良好。回收试验表明,样品在10倍稀释下,即可消除样品基质对基于igy的ENR间接竞争ELISA方法的干扰。基于igy的ELISA检测方法,CIP在牛奶和自来水样品中的回收率分别在78.40～112.3%和79.80～95.40%之间,变异系数分别在3.64～5.36%和3.43～5.37%之间。HPLC-FLD方法的平均回收率范围为78.40～112.30%和79.80～95.40%之间,变异系数在3.26～4.54%和2.43～6.31%之间,两方法测定结果一致。以上结果表明,基于igy的CIP-ELISA检测方法可用于牛奶与自来水样品中的CIP残留分析。

关键词：环丙沙星恩诺沙星 igy ELISA 残留检测

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甲苯咪唑异源包被ELISA检测方法的建立

甲苯咪唑异源包被ELISA检测方法的建立

作者：朱米山西农业大学

学位级别：硕士

甲苯咪唑(Mebendazole,MBZ)是一种苯并咪唑类抗寄生虫药物,在畜牧水产养殖中应用广泛,极易在动物源性食品中残留。目前检测MBZ的方法主要有仪器分析和免疫分析,仪器分析所需设备昂贵、成本高,不适合对大量样品进行快速检测。免疫分析相... 详细信息

甲苯咪唑(Mebendazole,MBZ)是一种苯并咪唑类抗寄生虫药物,在畜牧水产养殖中应用广泛,极易在动物源性食品中残留。目前检测MBZ的方法主要有仪器分析和免疫分析,仪器分析所需设备昂贵、成本高,不适合对大量样品进行快速检测。免疫分析相比于仪器分析,样本前处理简单,检测速度快且成本低,其中酶联免疫吸附法(ELISA)是应用最广泛的一种检测技术。目前研究报道检测MBZ的ELISA方法主要采用同源包被ELISA,近年来许多研究表明异源包被ELISA的灵敏度高于同源包被ELISA。因此开发基于异源包被的MBZ检测方法,有助于提高MBZ检测的准确度和分析效率,对于分析MBZ的残留具有重大意义。本研究在前期研究工作的基础上,利用与MBZ结构相似的代谢产物氨基甲苯咪唑(MBZ-NH)作为异源半抗原,运用戊二醛法与牛血清白蛋白(BSA)偶联,构建MBZ-NH-BSA人工抗原;纯化已获取的甲苯咪唑兔源IgG和禽源igy抗体,优化ELISA检测条件,构建MBZ异源包被ELISA检测方法。结果如下:(1)通过使用戊二醛作为交联剂将MBZ-NH与BSA进行偶联,获取异源包被物MBZ-NH-BSA;运用紫外光谱扫描,同时利用前期制备的抗MBZ兔源IgG和禽源igy,通过ELISA方法验证异源包被物MBZ-NH-BSA是否偶联成功。实验结果表明,戊二醛法能够将MBZ-NH与BSA偶联。另外,未经优化条件下,基于IgG的异源包被ELISA检测MBZ的最大半数抑制浓度(IC)为4.27 ng/m L;基于igy的异源包被ELISA检测MBZ的IC为2.57 ng/m L。这表明在使用MBZ-NH-BSA作为包被原时,基于igy的ELISA方法对MBZ具有较高的灵敏度,故后续对igy异源包被ELISA进行优化,并用于构建MBZ的ELISA检测。(2)通过棋盘法确定MBZ-NH-BSA包被原浓度和igy抗体稀释倍数,通过对封闭液、封闭时间和标准品稀释液(p H、Na Cl浓度以及DMSO浓度)的优化,建立基于异源包被原的MBZ ELISA快速检测方法。结果表明,MBZ-NH-BSA包被浓度为10μg/m L,igy稀释约1:4000,选用1%明胶封闭约1.5 h,缓冲液PBS工作条件为p H6.0,10%DMSO时,其ELISA方法的IC为1.83 ng/m L,最低检测限为0.13 ng/m L,线性检出范围为0.34～10.54 ng/m L。对基于igy的MBZ异源包被ELISA方法进行特异性评价,结果表明,所构建的ELISA方法除了与MBZ-NH的交叉反应性为75.8%,与MBZ结构类似物的交叉反应性(CR)均小于1%,说明所构建的异源包被ELISA方法,对MBZ有较好的特异性,这与我们前期获取的结果一致。添加回收试验表明,猪和鸡的肌肉组织提取液在工作缓冲液10倍稀释下,可以消除样品基质的干扰,经异源包被ELISA测得MBZ在动物肌肉组织中的组内回收率为83.65%～109.75%,组内变异系数为2.24%～8.57%,组间回收率为92.51%～103.23%,组间变异系数为1.55%～6.32%。以上结果表明,基于igy的异源包被ELISA方法,具有较高的灵敏度,满足国家标准需要,可用于动物源性食品中MBZ的残留分析,为MBZ检测试剂盒的研制和异源包被ELISA方法提供理论基础和参考依据。

关键词：甲苯咪唑异源包被 IgG igy 动物性食品

抗哇巴因鸡蛋黄igy与兔抗体IgG在酶联免疫检测中的比较

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中国应用生理学杂志 2007年第4期23卷 505-508页

作者：张明娟杨军葛蘅强磊段宗明王聪霞王蓉吕卓人西安交通大学医学院第二附属医院心内科陕西西安710004 西安交通大学医学院第二附属医院病理科陕西西安710004 西安交通大学医学院第一附属医院干部病房陕西西安710061

目的:探讨提高内源性哇巴因(EO)检测方法的准确性及特异性,为哇巴因的研究打下基础。方法:分别制备出鸡蛋黄抗哇巴因多克隆抗体及兔抗体。然后采用酶联免疫吸附法(ELISA)比较两种抗体检测内源性哇巴因的准确性及特异性。结果:采用igy检... 详细信息

目的:探讨提高内源性哇巴因(EO)检测方法的准确性及特异性,为哇巴因的研究打下基础。方法:分别制备出鸡蛋黄抗哇巴因多克隆抗体及兔抗体。然后采用酶联免疫吸附法(ELISA)比较两种抗体检测内源性哇巴因的准确性及特异性。结果:采用igy检测EO的平均批内变异系数为2.03%,批间变异系数为2.34%。兔抗体IgG则分别为2.83%、3.29%;两者均与氢化可的松及地塞米松无交叉结合反应,与西地兰和地高辛分别存在3.45%vs5.95%、3.20%vs5.20%的交叉反应。结论:igy比兔抗体ELISA检测内源性哇巴因的特异性及准确性较高。

关键词：抗哇巴因 igy IgG

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疏水性电荷诱导层析纯化免疫球蛋白igy

化工学报 2011年第6期62卷 1574-1580页

作者：童红飞林东强姚善泾化学工程联合国家重点实验室浙江大学化学工程与生物工程学系浙江杭州310027

利用疏水性电荷诱导层析(HCIC)从鸡血中分离免疫球蛋白igy。采用经辛酸预处理后的血浆上清液作为原料,直接用HCIC分离纯化igy。考察了两种HCIC介质,市售介质MEP HyperCel和实验室自制介质Bestarose-DVS-MMI,优化了上样pH、洗脱pH和上样... 详细信息

利用疏水性电荷诱导层析(HCIC)从鸡血中分离免疫球蛋白igy。采用经辛酸预处理后的血浆上清液作为原料,直接用HCIC分离纯化igy。考察了两种HCIC介质,市售介质MEP HyperCel和实验室自制介质Bestarose-DVS-MMI,优化了上样pH、洗脱pH和上样量等条件。研究发现,以2-巯基-1-甲基咪唑为配基的Bestarose-DVS-MMI介质优于MEP HyperCel介质,前者分离igy的纯度和收率较高,HPLC分析igy纯度可达92%以上,收率约95%。通过配基结构比较和表面电势分析,探讨了HCIC分离igy的机制。结果表明,采用HCIC可以实现igy的高效分离,为从血液中分离免疫球蛋白提供了新方法。

关键词：疏水性电荷诱导层析免疫球蛋白 igy 鸡血浆

疏水性电荷诱导扩张床吸附分离免疫球蛋白igy

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化工学报 2014年第1期65卷 198-204页

作者：施伟林东强姚善泾化学工程联合国家重点实验室浙江大学化学工程与生物工程学系浙江杭州310027

结合疏水性电荷诱导色谱和扩张床吸附两项新型生物分离技术,开发了一个高效分离禽类血液免疫球蛋白igy的新过程。以2-巯基-1-甲基咪唑(MMI)为疏水性电荷诱导配基,偶联于琼脂糖扩张床吸附基质上,制备出疏水性电荷诱导扩张床吸附剂S-MMI... 详细信息

结合疏水性电荷诱导色谱和扩张床吸附两项新型生物分离技术,开发了一个高效分离禽类血液免疫球蛋白igy的新过程。以2-巯基-1-甲基咪唑(MMI)为疏水性电荷诱导配基,偶联于琼脂糖扩张床吸附基质上,制备出疏水性电荷诱导扩张床吸附剂S-MMI。结果表明,S-MMI具有较高的配基密度,约105-mol·g-1,pH7时igy饱和吸附容量达71.26 mg·(ml介质)-1,扩张床内可形成稳定的分级分布,床层稳定。选用经辛酸沉淀预处理后鸡血浆为料液,通过固定床色谱确定了上样和洗脱条件,比较了扩张床中不同膨胀率的影响,优化了分离条件,实现了扩张床吸附分离鸡血igy,纯度达到98.9%,收率为80.5%。结果表明,疏水性电荷诱导色谱结合扩张床吸附,可以实现免疫球蛋白的高效分离,为禽类血液蛋白综合利用提供了新方法。

关键词：生物分离吸附色谱扩张床疏水性电荷诱导 igy 鸡血

抗嗜水气单胞菌igy的提纯及体外抑菌效果研究

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2005年第4期31卷 503-506页

作者：李肖梁尹兆正钱娅朱志刚方维焕浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029 杭州联合肉类集团浙江杭州310004 绍兴市绍鸭原种场浙江绍兴312000

以灭活嗜水气单胞菌(AS 1.927菌株)为抗原免疫蛋鸡,采用水稀释法粗提蛋黄液igy和硫酸铵法纯化粗提物中igy,研究其在上清液中的抗体提取率及其体外抑菌效果.研究表明,pH 5.0、10×水稀释法粗提后上清液中igy抗体提取率为78.34%,33%(v/v)... 详细信息

以灭活嗜水气单胞菌(AS 1.927菌株)为抗原免疫蛋鸡,采用水稀释法粗提蛋黄液igy和硫酸铵法纯化粗提物中igy,研究其在上清液中的抗体提取率及其体外抑菌效果.研究表明,pH 5.0、10×水稀释法粗提后上清液中igy抗体提取率为78.34%,33%(v/v)饱和硫酸铵法纯化后上清液中抗体提取率为64.1%,SDS-PAGE电泳显示纯化后的igy纯度较高.pH 5.0、10×水稀释法粗提后的特异性igy浓度达1.0 mg/mL时,嗜水气单胞菌在18 h内无生长.结果提示,用水稀释法和硫酸铵法提取蛋黄中的抗嗜水气单胞菌特异性igy,具有简便、快捷、高效的特点,所制备的igy活性较高,可用于嗜水气单胞菌感染引起的水生动物疾病预防和控制.

关键词：嗜水气单胞菌 igy 蛋黄粗提纯化抑菌活性