检索结果-南通市图书馆

中国生物工程杂志 2002年第3期22卷 45-49页

作者：周素芳黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院广西医科大学生化教研室北京100005

ig融合蛋白是指在基因水平将目的基因同ig部分片段基因相连 ,克隆并表达的重组蛋白。该蛋白具有目的蛋白的功能 ,又获取ig的新特性。本文综述了Fab融合蛋白及Fc融合蛋白在临床及科学研究应用方面的进展。

关键词： ig融合蛋白应用研究进展免疫球蛋白

抗ig融合蛋白Fc段单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第2期19卷 170-171,175页

作者：户义刘雪松朱勇刘莹许晓光薛江楠金伯泉第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710032

目的 :制备并鉴定抗ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体 (mAb) ,建立用于检测ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法 :以hBCMA ig融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠 ,通过细胞融合制备抗Fc段mAb ,用ELISA等方法鉴定mAb的ig亚... 详细信息

目的 :制备并鉴定抗ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体 (mAb) ,建立用于检测ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法 :以hBCMA ig融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠 ,通过细胞融合制备抗Fc段mAb ,用ELISA等方法鉴定mAb的ig亚类、表位以及种属特异性 ,建立用于检测ig融合蛋白的夹心ELISA法 ;Westernblot检测mAb对变性ig融合蛋白的反应性。将mAb与Sepharose4B交联 ,制备亲和层析柱 ,对LAIR1 ig融合蛋白进行纯化。结果 :获得 7株稳定分泌抗Fc段mAb的杂交瘤 (FMUFc1～FMUFc7)。利用FMUFc4作为包被mAb ,FMUFc5作为酶标记mAb ,成功地建立了检测ig融合蛋白的ELISA法 ,敏感度达到 2 μg/L ;在 7株mAb中 ,FMUFc6可用于ig融合蛋白的Westernblot检测。用FMUFc6mAb制备的亲和层析柱 ,可有效地纯化LAIR1 ig融合蛋白。结论 :成功地制备了抗ig融合蛋白Fc段的mAb ,建立了可用于ig融合蛋白检测和纯化的方法。

关键词： ig融合蛋白 Fc段单克隆抗体夹心ELISA法亲和层析法

单克隆抗体和ig融合蛋白治疗银屑病的有效性和长期安全性

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药学与临床研究 2008年第1期16卷 32-36页

作者：李玲珺马鹏程中国医学科学院皮肤病研究所南京210042

银屑病是一种慢性T细胞介导的炎性皮肤病,发病机理尚不完全清楚,目前所采用的化学药物的疗效也欠佳,本文综述了近年新研制的单克隆抗体、融合蛋白等生物制剂,它们由于疗效高,副作用少,有可能成为银屑病治疗的更好选择。

关键词：银屑病生物疗法单克隆抗体 ig融合蛋白

CTLA-4ig与ICAM-1单抗联合DCp诱导同种移植耐受

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第二军医大学学报 2004年第8期25卷 849-851页

作者：丁国善傅志仁王全兴张明刘玉杉第二军医大学长征医院器官移植中心上海200003

目的:利用细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 ig融合蛋白(CTLA-4 ig)和细胞问黏附分子1(ICAM-1)单克隆抗体联合治疗经供者树突状细胞前体(DCp)免疫的移植受者诱导移植耐受。方法:实验分4组:对照组、CTLA-4 ig组、ICAM-1单抗组和联合组,每组8只... 详细信息

目的:利用细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 ig融合蛋白(CTLA-4 ig)和细胞问黏附分子1(ICAM-1)单克隆抗体联合治疗经供者树突状细胞前体(DCp)免疫的移植受者诱导移植耐受。方法:实验分4组:对照组、CTLA-4 ig组、ICAM-1单抗组和联合组,每组8只BALB／c受鼠。每组均以2×106C57BL／6供者DCp经尾静脉输注受鼠。CTLA-4 ig组和ICAM 1单抗组分别自DCp输注之日起连续2周向受鼠腹腔内注射CTLA-4 ig或ICAM-1单抗(0.1 mg／d);联合组以同样剂量两药注射2周;对照组则仅输注DCp。DCp输注1周后4组均行异位心脏移植并观察移植心存活时间,进一步作皮肤移植确认耐受状态。结果:对照组、ICAM-1单抗组和CTLA-4 ig组的C57BL／6供心平均存活时间分别为(20.13±1.64)d、(45.00±2.62)d和(90.00±3.07)d,联合组8例中除1例存活98 d外,其他7例均超过100 d。前3组C57BL／6来源皮肤平均存活时间分别为(4.25±0.89)d、(9.00±0.76)d和(44.50±3.42)d,联合组8例中1例存活91 d,3例存活95 d,其他4例均超过100 d。结论:在供者DCp输注受者后以ICAM-1单抗和CTLA-4 ig联合处理受者能够诱导针对供者的耐受状态。

关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 ig融合蛋白细胞间黏附分子1 抗体,单克隆树突状细胞前体移植耐受

抗融合标签单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究

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抗融合标签单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究

作者：户义中国人民解放军第四军医大学

学位级别：硕士

融合蛋白(fusion protein)是将两个或两个以上的基因通过一定方式连接在一起共同表达出的重组蛋白。标签融合蛋白(tag fusion protein)是融合蛋白的一种，它是由目的蛋白(target protein)和融合标签(fusion tag)共同构成的蛋白嵌合体。... 详细信息

融合蛋白(fusion protein)是将两个或两个以上的基因通过一定方式连接在一起共同表达出的重组蛋白。标签融合蛋白(tag fusion protein)是融合蛋白的一种，它是由目的蛋白(target protein)和融合标签(fusion tag)共同构成的蛋白嵌合体。常见的融合标签包括：多聚组氨酸(poly-His)、FLAG多肽、葡萄球菌蛋白A(SPA)、免疫球蛋白的Fc段以及谷胱甘肽转移酶(GST)等。融合标签的使用不仅方便了目的蛋白的表达和纯化，同时为目的蛋白结构和功能的研究提供了便利手段。随着人类基因组计划(Human Genome Project，HGP)的完成，后基因组学(post-genomics)和蛋白质组学(proteomics)已经成为生命科学发展的重点，这一时期，科学家面临的最大挑战是在整体水平上系统地、综合地研究蛋白质的结构、功能以及蛋白质与蛋白质、核酸等生物大分子之间的相互作用。蛋白质的表达和纯化是蛋白质研究的关键环节。与标签蛋白融合表达提供了一个高通量(high-through)表达和筛选功能蛋白的平台，因而为学者广泛重视，已成为一条联系基因组和蛋白质组的重要纽带。另外，融合蛋白在蛋白复合物的分离、药物筛选以及临床治疗等领域也发挥着重要作用。单克隆抗体技术是1975年由Khler和Milstein共同创立的用于生产针对单一表位抗体的免疫学技术。由于单克隆抗体具有纯度高、特异性强、效价高、少或无交叉反应等优点，被广泛应用于生命科学的各个领域。在蛋白质组学的研究中，针对融合标签的单克隆抗体不但可以作为亲和层析介质对融合蛋白进行分离和纯化，还可以方便地研究目的蛋白质的分布和功能，是后基因学研究的重要工具。一本实验中，我们制备了7株稳定分泌抗ig融合蛋白FC段单克隆抗体的杂交瘤细胞株FMUI7CI～7，其中FMUFCZ、F刚FC4、FMUFCS和F删FC6 为 igGI（K）;FMUFCI、F删FC3及 FMwC7为 igGZb（K）。7株 InAb所未腹水效价为在 0．5～IXIO－’，酶标 a效价为在 10叫～10刁。竞争 ELISA u 生物传感器分析表明，获得的7株单克隆抗体识别7个不同的表位，其中 FMUFCS、FMUFC6和FMUFC3的表位比较接近，FMUF。2和FMU’FC4的表位相差最远。在表位分析的基础上，我们利用FMUFC4作为包被抗体， H肚F 作为酶标记抗体，构建了用于检测ig融合蛋白的双单抗夹心 ELISA系统，并通过选择包被抗体和酶标抗体的最佳工作浓度对其进行了优化。敏感性与特异性试验表明该系统的检测水平达到Zv叭且与其它物种的igG没有交叉反应。利用该系统对COS河细胞表达的LAIRl工g融合蛋白和抗Notch配体Deftal的嵌合抗体进行了测定，均获得浓度依赖的A 值曲线。这表明，该夹心ELISA系统能够用于细胞培养上清中的ig融合蛋白和嵌合抗体水平的检测。有趣的是尽管 F则FC3、FMUFCS和 F刚FC6 的表位非常接近，但在免疫印迹只有FMUFC6可同时用于ig融合蛋白和 hlgG的免疫印迹检测，提示在蛋白质变性过程中，随着蛋白质空间结构的破坏，许多抗体识别的表位会消失或减弱，进一步说明抗原抗体之间的特异性反应有赖于抗原和抗体分子在空间结构上的识别，而不仅仅取决于氨基酸在蛋白质中的线性排列。利用 FMUFCS InAb制备的亲和层析柱，对转染后COS河细胞培养上清的LAIR1 融合蛋白进行纯化，纯化产物经 ***后显示层析所得蛋白质的分子量与理论值相符，纯度大于 80％。这说明免疫亲和层析能够有效的纯化培养基中的ig融合蛋白，为ig融合蛋白纯化提供了新的有效途径。另外，我们对我室制备的5株抗GST、5株抗m 和 1株抗FLAG单克隆抗体进行了比较系统的鉴定，并对其中部分单克隆抗体进行了初步应用研究。结果表明除抗FLAG单克隆抗体的腹水效价较低，不能用于相应融合蛋白的免疫印迹外，其他 10株单克隆抗体的腹水效价均在 10’～10’之间，并且全部可以用于相应融合蛋白的免疫印迹检测。比较发现，抗His标签的单克隆抗体制备的亲和层析柱对m 融合蛋白的纯化效果优于以 N iu十TA 为基质的金属亲和层析。 FasL是重要的凋亡诱导配体（poptosis inducing ligand，AIL），在免疫防御和免疫自稳中发挥着重要作用。FasL抗原以及抗 FasL ti体在基础和临床研究中有巨大的应用价值。我们采用基因工程技术，构建并表达了人FasL 胞膜外区与GST的融合蛋白并利用抗GST和抗hFasL的单克隆抗

关键词：标签融合蛋白融合标签 ig融合蛋白单克隆抗体免疫印记 ELISA 亲和层析凋亡诱导配体

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免疫学

中国医学文摘（基础医学） 2005年第3期22卷 168-173页

人PD-L1ig融合蛋白的表达及其生物学活性的研究；人B7-H3基因转染及其生物学功能的研究；Ⅳ型Ⅱ类反式激活因子基因新变异体的克隆、鉴定和功能测定；转化生长因子β1基因修饰树突状细胞延长移殖心脏存活时间的研究；基于人DAF框架的酵... 详细信息

人PD-L1ig融合蛋白的表达及其生物学活性的研究；人B7-H3基因转染及其生物学功能的研究；Ⅳ型Ⅱ类反式激活因子基因新变异体的克隆、鉴定和功能测定；转化生长因子β1基因修饰树突状细胞延长移殖心脏存活时间的研究；基于人DAF框架的酵母展示肽库的构建与鉴定；PD—L2剪切异构体与EGFP融合蛋白的表达及其亚细胞定位研究；吞噬感染与非感染凋亡粒细胞对人巨噬细胞的活化具有不同影响；HIV复合多表位DNA疫苗的设计及免疫研究；CD4拮抗类肽分子和非肽类小分子化合物筛选的细胞模型的建立；树突状细胞共表达TGF-β和自身抗原表位的体外研究；鼠抗人OX40L功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定；肿瘤抗原TRAG-3HLA-A2．1限制性CTL表位的鉴定；Clq结合十二肽的筛选与初步鉴定；Clq结合十二肽的活性研究；人脐静脉内皮细胞表达CD137分子及其功能的初步研究。

关键词：免疫学非肽类小分子转化生长因子β1 HLA-A2.1 ig融合蛋白初步鉴定 PD-L1 树突状细胞化合物筛选