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作者：邓智中延安大学

学位级别：硕士

研究背景:脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是一种毁灭性的疾病,会对患者生理、心理以及其家人与社会造成很重的负担,目前仍缺乏有效治疗手段。巨噬细胞迁移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)作为一种多效性的生... 详细信息

研究背景:脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是一种毁灭性的疾病,会对患者生理、心理以及其家人与社会造成很重的负担,目前仍缺乏有效治疗手段。巨噬细胞迁移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)作为一种多效性的生物因子,近年来在肿瘤、自身免疫性等疾病中被广泛研究。但是其在中枢神经系统中,特别炎症方向的研究仍旧很少。iso-1作为MIF的一款经典抑制剂,其衍生物已被应用于包括多发性骨髓瘤(Multiple myeloma)等疾病的临床实验中。本实验将探究iso-1对于SCI的作用,以及MIF在SCI后炎症反应中扮演的角色。目的:1.通过脊髓损伤大鼠模型,探究巨噬细胞迁移抑制因子抑制剂iso-1对于脊髓损伤大鼠的组织形态、神经元以及运动功能的作用;2.通过建立脊髓损伤大鼠模型,探讨巨噬细胞迁移抑制因子抑制剂iso-1对于脊髓损伤大鼠炎症反应的影响及机制;3.明确iso-1对脂多糖诱导的小胶质细胞炎症反应的影响及机制。方法:1.雌性SD大鼠(230g左右),用HI-0400脊髓打击器打击大鼠脊髓T10段,建立大鼠急性SCI模型;之后腹腔注射iso-1(2mg/kg)。将大鼠随机分为Sham组、SCI组、SCI+DMSO组和SCI+iso-1组四组。BBB量表评价不同分组大鼠运动功能恢复情况;HE染色观察不同分组大鼠脊髓组织形态学变化;尼氏染色观察不同分组大鼠脊髓组织尼氏体变化。*** Blot检测脊髓损伤大鼠巨噬细胞迁移抑制因子MIF随损伤时间变化的趋势及不同分组大鼠脊髓损伤区域MIF、炎症相关通路NF-κB及炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达。免疫荧光染色检测不同分组大鼠脊髓损伤区域MIF、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β表达。3.通过CCK-8筛选出最适的LPS诱导浓度,建立小胶质细胞的炎症模型;通过CCK-8筛选出后续实验所需的最适iso-1保护浓度。将小胶质细胞分为Control组、LPS组、LPS+iso-1组三组。免疫荧光和Western Blot检测不同分组小胶质细胞M1型标志物INOS及小胶质细胞M2型标志物Arg-1、MIF、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β的表达;电镜白光观察不同分组小胶质细胞形态变化;TUNLE染色观察不同分组小胶质细胞凋亡情况。结果:***评分结果显示:SCI+iso-1组的分数自损伤7d后明显高于SCI+DMSO组;Sham组的评分高于SCI组。HE染色结果显示:Sham组脊髓组织形态完整,结构正常,无明显损伤;SCI组及SCI+DMSO组脊髓组织有大量空洞存在,损伤明显,结构疏松,神经元破碎,存活数量减少;与SCI+DMSO组相比,SCI+iso-1组脊髓组织形态更加完整,空洞减少,结构较为紧密,神经元存活数量较多,核仁较为明显,轮廓相对清晰。尼氏染色结果显示:Sham组脊髓灰质形态完整,尼氏体轮廓清晰,排列整齐;SCI组及SCI+DMSO组脊髓灰质损伤明显,结构疏松,组织之间不紧密,尼氏体破碎,存活数量减少;与SCI+DMSO组相比,SCI+iso-1组脊髓灰质更加完整,结构较为紧密,尼氏体存活数量较多,轮廓相对清晰。*** Blot结果显示:SCI大鼠MIF蛋白表达量随损伤时间而变化,在损伤后3d时MIF蛋白表达达到高峰;SCI组及SCI+DMSO组MIF、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达相对于SCI+iso-1组上调。SCI组及SCI+DMSO组MIF、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白免疫荧光染色结果与Western Blot结果一致。3.用浓度为700ng/m L的LPS刺激小胶质细胞24 h,得到的细胞相对活力最适合后续实验,通过CCK-8法筛选出iso-1的最佳保护浓度为4μM。4.电镜白光结果显示:Control组小胶质细胞多呈静息态,细胞形态较小,呈多角形,部分有伪足,边界清晰;LPS组小胶质细胞多呈阿米巴样态,胞体变大变圆且呈多形态改变,细胞内有空泡形成;iso-1组小胶质细胞形态介于正常对照组与LPS处理组之间。Western Blot结果及免疫荧光结果显示:LPS+iso-1组相较于LPS组小胶质细胞Arg-1蛋白上调、INOS蛋白下调。*** Blot及免疫荧光结果显示:LPS+iso-1组相较于LPS组小胶质细胞MIF、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达量下调。***染色结果显示LPS+iso-1组相较于LPS组小胶质细胞凋亡减少。研究结论:***-1可以促进由SCI引起的SD大鼠的组

关键词：脊髓损伤小胶质细胞巨噬细胞迁移抑制因子 iso-1 炎症反应

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巨噬细胞移动抑制因子抑制剂iso-1对重症肺炎大鼠炎症反应的影响

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中国感染与化疗杂志 2023年第3期23卷 334-340页

作者：李虎年张淑敏杜芳刘杰何婷湖北医药学院附属人民医院急危重症中心急诊科湖北十堰442000 湖北医药学院附属人民医院神经内科湖北十堰442000

目的分析巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抑制剂iso-1对重症肺炎大鼠炎症反应影响。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠45只,随机数字表法将大鼠分成3组,正常组、模型组、iso-1组,每组各15只。除正常组外,其他大鼠制备重症肺炎模型,成功造模后正常... 详细信息

目的分析巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抑制剂iso-1对重症肺炎大鼠炎症反应影响。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠45只,随机数字表法将大鼠分成3组,正常组、模型组、iso-1组,每组各15只。除正常组外,其他大鼠制备重症肺炎模型,成功造模后正常组和模型组大鼠经尾部注射100 mL生理盐水,iso-1组注射溶解iso-1(7 mg/kg)的5%二甲基亚砜溶液(2 mL/kg)。分别在实验结束后观察各组大鼠肺组织病理情况,并行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,检测肺组织内髓过氧化物酶(MPO)活性,检测各组大鼠BALF内炎症标志物CD14、降钙素原、C反应蛋白(CRP)水平,炎性因子白细胞介素(IL)-10、IL-6、IL-1及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测干扰素调节因子(IRF3)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子(NF)-κB p65、IκB-α蛋白表达。结果正常组大鼠肺部结构正常,无组织病理改变;模型组大鼠肺组织表征为广泛病理学异常与形态学受损,表现肺泡水肿、萎缩,肺泡壁厚度增大,嗜中性粒细胞浸润至肺泡腔内;iso-1组大鼠相对于模型组大鼠其组织病理学受损显著减轻。与正常组相比,模型组大鼠动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、BALF内细胞数量、MPO活性,TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10、MyD88、IRF3蛋白表达水平均升高,CO_(2)含量、动脉血氧分压(PaO_(2))及氧饱和度(SO_(2))均降低;与模型组相比,iso-1组PaCO_(2)、BALF内细胞数量、MPO活性,TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10、MyD88、IRF3蛋白表达水平均降低,CO_(2)含量、PaO_(2)及SO_(2)均升高(Piso-1可显著降低重症肺炎大鼠机体内炎性因子水平,改善大鼠肺组织病理情况,其作用机制可能与降低MyD88、NF-κB p65、IκB-α蛋白表达有关。

关键词：重症肺炎巨噬细胞移动抑制因子炎症反应 iso-1

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巨噬细胞移动抑制因子（MIF）抑制剂iso-1对SPA介导下骨髓炎rBMSCs模型成骨分化的调控作用

巨噬细胞移动抑制因子（MIF）抑制剂ISO-1对SPA介导下骨髓炎rBMSC...

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作者：施翔文昆明医科大学

学位级别：硕士

【目的】骨髓炎是骨科领域难治性疾病之一,迁延不愈,复发频繁,目前缺乏有效的治疗方式。其病理生理机制尚不明确,探讨其发生发展的具体机制,有利于寻找治疗的分子靶点。越来越多的证据表明,巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration i... 详细信息

【目的】骨髓炎是骨科领域难治性疾病之一,迁延不愈,复发频繁,目前缺乏有效的治疗方式。其病理生理机制尚不明确,探讨其发生发展的具体机制,有利于寻找治疗的分子靶点。越来越多的证据表明,巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)作为一种多效性促炎介质,不仅参与炎症的各种病理生理过程,还在成骨分化中发挥重要作用,但其在骨髓炎中的具体调控机制尚不清楚。【方法】本研究首先使用葡萄球菌菌壁蛋白A(staphylococcal protein A,SPA)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,r BMSCs)构建骨髓炎细胞模型,并通过GEO数据库中的GSE30119数据集,骨髓炎大鼠和细胞模型验证MIF的表达水平;进一步行功能实验探讨MIF特异性小分子抑制剂iso-1和MIF基因敲减(knockdwn,KD)对骨髓炎细胞模型向成骨分化的具体调控机制。【结果】我们发现MIF在大鼠和骨髓炎细胞模型中的表达水平上调,随后GSE30119数据集也证明MIF在骨髓炎患者的外周血中显著上调。此外,SPA以剂量依赖方式促进r BMSCs中MIF的表达,并通过激活核因子-kappa B(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路抑制成骨相关基因的表达,如Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和1型胶原(collagen type-1,COL-1)。在体内实验中,我们进一步发现在胫骨病灶处局部注射iso-1显著提高了大鼠骨髓炎模型的成骨活性。重要的是,我们还证明了MIF-KD和iso-1通过抑制NF-κB信号通路的激活而逆转了SPA介导的r BMSCs成骨分化的抑制作用,表现为成骨相关基因的上调和骨矿化的增加。【结论】iso-1和MIF-KD通过抑制NF-κB信号通路逆转SPA介导的对r BMSCs成骨分化的抑制作用,这为骨髓炎提供了一个潜在的治疗靶点。

关键词：骨髓炎 iso-1 巨噬细胞移动抑制因子葡萄球菌菌壁蛋白A 成骨分化

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iso-1对糖尿病大鼠心肌中巨噬细胞游走抑制因子表达的影响

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临床心血管病杂志 2012年第2期28卷 111-114页

作者：杨博张晓李京倡朱庆博郭瑞霞陈龙郑州大学第一附属医院心内科

目的:检测巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在糖尿病大鼠心肌中的表达,探讨MIF在糖尿病心肌病变中的作用和用iso-1[(S,R)-3-(4-hydroxypheny l)-4,5-dihydro-5-iso-1xazole acetic acid methyl ester]干预后对MIF表达水平的影响及意义。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照(NOR)组、糖尿病(DM)组和iso-1组,每组各10只。用超声多普勒观察大鼠心脏左室舒张功能及免疫组织化学染色法检测各组大鼠心肌中MIF的表达。结果:与NOR组比较,DM组与iso-1组舒张早期心室充盈速度最大值(E值)与舒张晚期心室充盈速度最大值(A值)的比值(E/A)明显降低(P1),且DM组低于iso-1组(P1);NOR组心肌MIF表达水平显著低于DM组及iso-1组(P1),且iso-1组低于DM组(P1)。结论:MIF可能参与糖尿病心肌病的发生,其表达水平对预测心脏左室舒张功能障碍有重要价值,早期应用MIF抑制剂可能延缓糖尿病心肌病的发生,具有潜在治疗价值。

关键词：糖尿病心肌病巨噬细胞游走抑制因子 iso-1

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iso-1在卵巢癌侵袭中的作用

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山东大学学报（医学版） 2012年第9期50卷 33-39页

作者：张庆露侯桂华梁婷宋静张超山东大学医学院实验核医学研究所济南250012

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子MIF特异抑制剂(S,R)-3-(4-羟苯基)-4,5-二氢-5-异噁唑乙酸甲酯(iso-1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭的作用以及对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factorreceptor-2,VEGFR-2)的影响,为卵巢癌C... 详细信息

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子MIF特异抑制剂(S,R)-3-(4-羟苯基)-4,5-二氢-5-异噁唑乙酸甲酯(iso-1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭的作用以及对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factorreceptor-2,VEGFR-2)的影响,为卵巢癌CD74靶向治疗奠定基础。方法不同浓度iso-1作用于人卵巢癌细胞SKOV3、A2780,对照组以相应浓度的稀释液处理。MTT法检测卵巢癌细胞增殖,L-多巴色素甲酯测定M IF互变异构酶活性,微孔迁移法检测卵巢癌细胞体外侵袭,RT-PCR检测mRNA表达情况。结果 iso-1能显著抑制人卵巢癌细胞SKOV3、A2780的增殖及其MIF互变异构酶活性(P1,P1;A2780:r=0.862,P1);50μmol/L iso-1作用于卵巢癌细胞SKOV3、A2780细胞24 h后,其穿透聚碳酸酯膜的能力显著降低(Piso-1通过抑制CD74的活性下调VEGF、VEGFR-2的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖及侵袭。

关键词： iso-1 卵巢癌细胞巨噬细胞移动抑制因子血管内皮生长因子受体-2 CD74

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巨噬细胞移动抑制因子拮抗物iso-1在IgA肾病大鼠肾损伤中的保护作用

巨噬细胞移动抑制因子拮抗物ISO-1在IgA肾病大鼠肾损伤中的保护作...

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2008年浙江省肾脏病学术年会

作者：刘延霞杨青林瑞霞温州医学院附属育英儿童医院肾内科

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子拮抗物iso-1在实验性IgA肾病大鼠模型。肾损伤中的干预作用。方法:建立IgA肾病大鼠模型,随机分成正常对照组、模型组、IS0-1组、地塞米松组。造模成功后,

关键词： iso-1 巨噬细胞移动抑制因子 IgA肾病大鼠

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Macrophage migration inhibitory factor antagonist,iso-1,lead to cell cycle arrest in G2/M and facilitate migration in CHO cells

Macrophage migration inhibitory factor antagonist,ISO-1,lead...

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中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十九次学术研...

作者： Chen Jiong LI Guohong Zhang Wei Li Lingling Huang Yingxue Zhao Shanting Yin Yupeng Chen Shulin College of Veterinary Medicine Northwest A&F University

Macrophage migration inhibitory factor(MIF) plays divergent roles in different cell types and ***,the function of MIF in Chinese hamster ovary cells(CHO) is still far from *** this study,the migration and cell cycle characteristicsof MIF were investigated in CHO cells using the specific MIF antagonist S,R-3-(4-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-5-isoxazole acetic acid methyl ester(iso-1) by the scratch assay,immunohistochemistry and *** was expressed in CHO ***-1 could markedly enhance the cell migration by the scratch *** results of immunocytochemistry showed that the iso-1 contributed to cell cycle arrest in G/M in MIF-knockdown *** results also demonstrated that iso-1 might be involved in the AKT/GSK-3β pathway during the process of G/M cell cycle *** results partially lay a theoretical foundation for better understanding the biological roles of MIF.

关键词： MIF iso-1 cell migration cell cycle CHO

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拓扑酶抑制剂iso-1对小鼠胚泡植入的影响

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解剖学报 2012年第4期43卷 530-534页

作者：张荣宜叶希平陈晓蓉安徽医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室合肥230032

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)拓扑酶抑制剂iso-1对小鼠胚泡植入的影响及其作用机制。方法将150只妊娠3d小鼠随机分为5组,即低、中、高剂量组及1%二甲基亚砜(DMSO)和生理盐水(NS)两个对照组。低、中、高剂量组分别按2、6、18 mg/k... 详细信息

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)拓扑酶抑制剂iso-1对小鼠胚泡植入的影响及其作用机制。方法将150只妊娠3d小鼠随机分为5组,即低、中、高剂量组及1%二甲基亚砜(DMSO)和生理盐水(NS)两个对照组。低、中、高剂量组分别按2、6、18 mg/kg一次性腹腔注射iso-1,对照组注射等量1%DMSO或NS;妊娠4d各组小鼠处死一半,取出子宫进行HE染色,免疫组织化学SP法检测MIF蛋白的表达,原位杂交检测MIFmRNA的表达;妊娠8d处死另半数妊娠小鼠,观察胚胎数,测量子宫脏器系数。结果与对照组比较,低、中剂量组小鼠胚胎数和子宫脏器系数差异不显著(P>0.05);高剂量组胚胎数显著提高(P0.05);光镜观察未发现各组妊娠小鼠子宫内膜结构的明显差异;MIF蛋白和mRNA主要表达于小鼠子宫内膜的基质细胞团,但实验组阳性细胞的吸光度值与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结论 iso-1可能具有促进小鼠胚泡植入的作用,且此作用具有一定的剂量依赖性;iso-1可能通过拮抗MIF的生物学作用促进小鼠胚泡的植入。

关键词： iso-1 胚泡植入巨噬细胞移动抑制因子免疫组织化学小鼠

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iso-1对大肠癌细胞侵袭的影响

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广东医学 2008年第5期29卷 734-737页

作者：陈萌何兴祥刘成勇苏杭郭海波广州医学院第二附属医院消化科广州510260 广东药学院临床医学院内科教研室广州510330 广州医学院第二附属医院临床分子医学实验中心广州510260

目的研究选择性MIF互变异构酶活性抑制剂iso-1对人大肠癌细胞侵袭的影响并探讨其可能的机制。方法实验组用0．01-100μmol／L的iso-1作用于大肠癌细胞Lovo，对照组为相应浓度的DMSO处理；MIF互变异构酶活性通过L-多巴色素甲酯测定；微... 详细信息

目的研究选择性MIF互变异构酶活性抑制剂iso-1对人大肠癌细胞侵袭的影响并探讨其可能的机制。方法实验组用0．01-100μmol／L的iso-1作用于大肠癌细胞Lovo，对照组为相应浓度的DMSO处理；MIF互变异构酶活性通过L-多巴色素甲酯测定；微孔迁移法检测iso-1对Lovo细胞体外侵袭的影响；ELISA法测定iso-1作用后培养上清中MIF蛋白水平；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测iso-1对Lovo细胞MMP-9和IL-8 mRNA表达的影响。结果较高浓度iso-1（10-100μmol／L）均能明显抑制MIF互变异构酶活性，但不影响细胞外分泌MIF蛋白水平；100μmol／L iso-1作用24h Lovo细胞穿透聚碳酸酯膜显著减少，与对照组比较差异有显著性（153±13vs204±10，P〈0．05）；100μmol／L iso-1作用24h Lovo细胞表达MMP-9和IL-8 mRNA水平显著降低，与对照组比较差异有显著性（MMP-9 mRNA：0．5187±0．072vs0．6757±0．026．P〈0．05；IL-8 mRNA：0．1541±0．019vs0．2081±0．030，P〈0．05）。结论选择性MIF活性抑制剂iso-1降低了Lovo细胞的侵袭，其可能机制为iso-1抑制了MIF互变异构酶活性并下调MMP-9和IL-8的表达。

关键词：大肠肿瘤巨噬细胞移动抑制因子互变异构酶活性 iso-1 RT-PCR

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巨噬细胞移动抑制因子及其拮抗剂iso-1在病理性瘢痕发病机制中的作用

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实用医学杂志 2017年第3期33卷 412-416页

作者：梁大宁柯昌能广东省深圳市龙华新区中心医院烧伤整形外科 518110

目的:探究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)参与病理性瘢痕发病的具体机制,以及其拮抗剂iso-1对病理性瘢痕来源成纤维细胞的影响。方法:收集正常皮肤、正常瘢痕以及病理性瘢痕标本,行HE以及免疫组化染色。利用组织块培养法分离培养人成纤维细... 详细信息

目的:探究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)参与病理性瘢痕发病的具体机制,以及其拮抗剂iso-1对病理性瘢痕来源成纤维细胞的影响。方法:收集正常皮肤、正常瘢痕以及病理性瘢痕标本,行HE以及免疫组化染色。利用组织块培养法分离培养人成纤维细胞,予以不同浓度iso-1干预(0~100μmol/mL)。TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot以及RT-PCR检测成纤维细胞特异性蛋白以及PI3K/Akt/mTOR通路的表达情况。结果:MIF在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中表达强于正常瘢痕和正常皮肤。无干预组凋亡细胞较少,予以不同浓度iso-1干预后,凋亡率逐渐上升。各组各时间点组间迁徙率比较差异均具有统计学意义(Piso-1浓度增加而下降。结论:MIF在不同类型瘢痕组织中表达存在差异,iso-1通过PI3K/Akt/mTOR通路抑制成纤维细胞生物学行为。

关键词：巨噬细胞移动抑制因子病理性瘢痕 iso-1 成纤维细胞

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