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丹酚酸B对间歇性高糖诱导的JNK活化和ins-1细胞凋亡的影响

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中国药理学通报 2017年第1期33卷 68-73页

作者：郑书国朱元美陶善珺郑浩文任尤楠赵梦秋杨解人吴元洁皖南医学院药理教研室安徽芜湖241002 安徽人口职业学院基础医学教研室安徽池州247009 安徽中医药大学中医基础学教研室安徽合肥230038

目的观察丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对间歇性高糖诱导的大鼠胰岛素瘤细胞(ins-1)c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化和细胞凋亡的影响。方法 ins-1细胞与丹酚酸B预孵24 h后暴露于间歇性高糖(11.1 mmol·L^(-1)12 h,33.3 mmol·L^(-1)12... 详细信息

目的观察丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对间歇性高糖诱导的大鼠胰岛素瘤细胞(ins-1)c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化和细胞凋亡的影响。方法 ins-1细胞与丹酚酸B预孵24 h后暴露于间歇性高糖(11.1 mmol·L^(-1)12 h,33.3 mmol·L^(-1)12 h)72 h。MTT法测定细胞活力,ELISA法测定葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力,荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot法检测胰十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白表达和JNK活化水平。结果丹酚酸B可明显减轻间歇性高糖诱导的ins-1细胞损伤和凋亡(P细胞内ROS水平、抑制JNK活化,并提高PDX-1蛋白表达水平(Pins-1细胞损伤和凋亡,提高胰岛素分泌水平,其机制可能与降低细胞内ROS水平、抑制JNK活化和上调PDX-1蛋白表达有关。

关键词：丹酚酸B ins-1细胞 2型糖尿病间歇性高糖 JNK 凋亡

海马胆碱能神经刺激肽通过活化3型毒蕈碱受体促进ins-1细胞胰岛素释放

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南方医科大学学报 2012年第4期32卷 580-582页

作者：高飞陈宏张桦郭南京徐艳花蔡德鸿南方医科大学珠江医院内分泌科广东广州510282

目的明确海马胆碱能神经刺激肽(HCNP)对ins-1细胞胰岛素分泌影响,并对其可能作用的毒蕈碱样胆碱能受体途径进行分析。方法 ins-1细胞随机分为3组:对照组、HCNP组、HCNP+佛波酯(PMA)组。对照组给予RPMI 1640液培养,HCNP组给予人工合成HCN... 详细信息

目的明确海马胆碱能神经刺激肽(HCNP)对ins-1细胞胰岛素分泌影响,并对其可能作用的毒蕈碱样胆碱能受体途径进行分析。方法 ins-1细胞随机分为3组:对照组、HCNP组、HCNP+佛波酯(PMA)组。对照组给予RPMI 1640液培养,HCNP组给予人工合成HCNP(50 pg/ml)与RPMI 1640液共培养,HCNP+PMA组予人工合成HCNP与RPMI 1640液共培养后,行胰岛素释放前18 h加入PMA(10 nmol/L);应用放射免疫方法检测各组不同浓度葡萄糖培养液中胰岛素含量。实时定量PCR检测对照组、HCNP组HCNP前体蛋白(HCNP-pp)、胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)、3型毒蕈碱样受体(3-typemuscarinic receptor,M3R)基因水平表达情况。结果浓度为3.3 mmol/L葡萄糖,三组间胰岛素含量无明显差异。浓度为5.6mmol/L、16.7 mmol/L葡萄糖作用下,HCNP组胰岛素含量均高于对照、HCNP+PMA组,差异具有统计学意义。HCNP组ins-1细胞HCNP-pp、ChAT、M3R三者mRNA含量均高于对照组,差异具有统计学意义。结论 HCNP通过提高ChAT活性,推测影响乙酰胆碱合成,进一步活化M3R,促进胰岛素分泌,PMA可阻断此作用。

关键词：海马胆碱能神经刺激肽 ins-1细胞胰岛素 3型毒蕈碱受体

骨髓间充质干细胞条件培养基对ins-1细胞凋亡的影响

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解放军医学杂志 2015年第5期40卷 339-343页

作者：赵坤郝好杰臧丽杨国庆李祥韩为东母义明解放军总医院内分泌科北京100853 解放军总医院基础医学所分子生物室北京100853

目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSC-CM)对促炎因子诱导大鼠胰岛素瘤细胞(ins-1)凋亡的影响及其作用机制。方法培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)至第3代,收集、浓缩其上清液,获得富含BMSCs分泌因子的条件培养基。用含促炎因子TNF... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSC-CM)对促炎因子诱导大鼠胰岛素瘤细胞(ins-1)凋亡的影响及其作用机制。方法培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)至第3代,收集、浓缩其上清液,获得富含BMSCs分泌因子的条件培养基。用含促炎因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ的培养基处理ins-1细胞48h,造成炎症损伤β细胞模型,加入不同浓度的BMSC-CM继续培养12h,所获细胞分为以下5组:正常对照组,促炎因子组,1×BMSC-CM组,2×BMSC-CM组,4×BMSC-CM组。采用CCK-8法检测ins-1细胞存活率,膜连蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)检测细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成量。结果与正常对照组相比,促炎因子组ins-1细胞存活率下降至正常对照组的75.84%±1.53%,细胞凋亡率增加(17.23%±1.77%),细胞内ROS水平明显升高(34.3%±0.80%),差异均具有统计学意义(P1)。而BMSC-CM有效对抗了促炎因子导致的ins-1细胞损伤,其作用呈剂量依赖性,4×BMSC-CM组效果最佳,该组ins-1细胞存活率较促炎因子组升高了11.86%,达到87.7%±2.08%,细胞凋亡率下降至8.67%±1.59%,ROS生成量减少至17.1%±2.14%,差异均具有统计学意义(Pins-1细胞凋亡,其作用机制可能与BMSC-CM降低细胞内ROS水平有关。

关键词：间质干细胞细胞凋亡炎症 ins-1细胞

核转录因子-κB在高浓度葡萄糖诱导ins-1细胞凋亡中的作用

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南方医科大学学报 2010年第10期30卷 2307-2309页

作者：张巧玲薛耀明朱波李佳沙建平李圣坚南方医科大学南方医院内分泌科广东广州510515

目的研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导ins-1细胞凋亡中的作用。方法大鼠胰岛素瘤细胞系(ins-1)细胞以RPMI1640培养基常规培养。实验分对照组(11.1mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3mmol/... 详细信息

目的研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导ins-1细胞凋亡中的作用。方法大鼠胰岛素瘤细胞系(ins-1)细胞以RPMI1640培养基常规培养。实验分对照组(11.1mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3mmol/l葡萄糖+NF-κB抑制剂(5μmol/l)干预组)3组。以荧光定量RT-PCR检测IKKβ mRNA水平,Western blot法检测细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达量,Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率。结果与对照组相比较,高糖组IKKβ mRNA水平显著升高(Pins-1细胞胞核内P65蛋白表达显著增多(P细胞凋亡率显著升高(Pins-1细胞凋亡率显著下降(Pins-1细胞NF-κB活化,抑制NF-κB活化可有效抑制高糖诱导的ins-1细胞凋亡。

关键词：高浓度葡萄糖 ins-1细胞 NF—kaapaB P65

胰淀素抑制高糖刺激ins-1细胞内钙离子浓度升高的作用机制

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中华内科杂志 2013年第5期52卷 407-411页

作者：陈延延朱铁虹刘如明贺秉军赵新王英姿李代清徐晏 300052天津医科大学总医院内分泌科南开大学生命科学院天津医科大学代谢病医院

目的分析阐明胰淀素短时间作用于ins-1细胞、抑制高糖刺激的细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）升高的机制.方法采用钙离子荧光指示剂Fluo-4/AM负载细胞后,激光共聚焦显微镜下连续动态观察ins-1细胞经胰淀素孵育前后在葡萄糖、KCl、咖啡因... 详细信息

目的分析阐明胰淀素短时间作用于ins-1细胞、抑制高糖刺激的细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）升高的机制.方法采用钙离子荧光指示剂Fluo-4/AM负载细胞后,激光共聚焦显微镜下连续动态观察ins-1细胞经胰淀素孵育前后在葡萄糖、KCl、咖啡因和卡巴胆碱存在条件下[Ca2＋]i荧光强度变化.结果（1）单纯16.7 mmol/L葡萄糖刺激使细胞内钙离子荧光强度变化的曲线下面积（AUC）为990±16;0.5μmol/L胰淀素使16.7 mmol/L葡萄糖刺激的胞内荧光强度有所下降（AUC为831±10）,1.0、5.0、10.0μmoL/L胰淀素均可使细胞内荧光强度显著降低（AUC分别为555±9、535±6、531±5）,与单纯葡萄糖刺激组比较差异有统计学意义,且呈现剂量依赖趋势.（2）10.0 μmol/L胰淀素可使30 mmol/L KCl刺激的荧光强度明显减低,与单纯KCl刺激组相比（AUC：168 ±5比311 ±11）差异有统计学意义.（3） 10.0 μmol/L胰淀素预处理后咖啡因和卡巴胆碱刺激的胞内荧光强度与单纯咖啡因和卡巴胆碱刺激组相比差异无统计学意义.结论高浓度胰淀素的短时间作用对ins-I细胞经咖啡因和卡巴胆碱刺激的内质网鱼尼丁受体（ryanodine receptor,RyR）、三磷酸肌醇（IP3）钙库释放没有影响,但可使高糖及KCl刺激的胞内荧光强度降低.推测胰淀素短时间作用使[Ca2＋]i减少的现象,主要是通过影响膜上钙通道实现的,与胞内钙库的释放无直接相关性.

关键词：胰淀素 ins-1细胞钙库钙离子

胰淀素对格列苯脲刺激ins-1细胞胰岛素分泌作用的影响及其机制

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中华内科杂志 2015年第3期54卷 214-218页

作者：肖金凤李晓通赵新贺秉军商学良韩丽鑫吴广彦丁雪梅朱铁虹天津医科大学总医院内分泌科 300052 南开大学生命科学院

目的研究胰淀素短时间条件下对格列苯脲刺激ins-1细胞胰岛素分泌的影响及机制.方法分别采用全细胞膜片钳技术、激光共聚焦显微镜技术及ELISA分析不同浓度胰淀素短时间孵育前后格列苯脲刺激下ins-1细胞ATP敏感性钾通道（KATP通道）电... 详细信息

目的研究胰淀素短时间条件下对格列苯脲刺激ins-1细胞胰岛素分泌的影响及机制.方法分别采用全细胞膜片钳技术、激光共聚焦显微镜技术及ELISA分析不同浓度胰淀素短时间孵育前后格列苯脲刺激下ins-1细胞ATP敏感性钾通道（KATP通道）电生理学特性、细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）及胰岛素含量变化.结果（1） ELISA结果显示：与1μmol/L格列苯脲刺激下胰岛素释放量（11.43 ±1.22） μg/L比较,0.1μmol/L胰淀素预处理组[（11.45 ±1.20） μg/L]无明显差异,而1 μmol/L及10 μmol/L胰淀素预处理组均显著下降,分别为（9.40±0.87）μg/L和（7.11±0.85） μg/L,且呈剂量相关性（P＜0.05）;（2）激光共聚焦显微镜测钙结果显示：1μmol/L格列苯脲刺激后[Ca2＋]i荧光强度变化的AUC为427.78±2.32,0.1μmol/L胰淀素预处理组（424.09 ±2.21）与之差异无统计学意义;而1 μmol/L及10 μmol/L胰淀素预处理组均可使其AUC显著降低（分别为380.59 ±1.49和246.53±8.41）,并呈剂量相关性（P＜0.05）;（3）全细胞膜片钳结果显示：在1μmol/L、10 μmol/L胰淀素预处理组中,1μmol/L格列苯脲刺激下KATP通道半数激活电压（V0.5）分别为（28.75 ±0.77）mV和（46.95 ±1.81）mV,均显著高于单纯格列苯脲组（14.59±0.69）mV,并呈剂量相关性（P＜0.05）.结论高浓度胰淀素短时间作用可抑制格列苯脲对KATP通道的关闭,进而抑制[Ca2＋]i增加,推测这种作用是ins-1细胞胰岛素分泌减少的机制之一.

关键词：胰淀素 ins-1细胞格列苯脲胰岛素

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配伍对芒果苷在ins-1细胞药代动力学的影响及其在细胞内的分布

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中国药理学通报 2021年第4期37卷 579-584页

作者：方佳周鸿黎梓霖林爱华刘奕明广州中医药大学第二附属医院Ⅰ期临床研究室广东广州510120 广州中医药大学第二附属医院珠海医院广东广州510120 广州中医药大学第二附属医院广东省中医证候临床研究重点实验室广东广州510120

目的考察配伍黄柏对知母中芒果苷(mangiferin,MGF)在ins-1细胞药代动力学特征的影响,及芒果苷在正常和氧化损伤状态的ins-1细胞内的分布变化。方法以芒果苷单体、知母和知母-黄柏药对形式等剂量给药ins-1细胞,运用LC-MS/MS测定ins-1细胞... 详细信息

目的考察配伍黄柏对知母中芒果苷(mangiferin,MGF)在ins-1细胞药代动力学特征的影响,及芒果苷在正常和氧化损伤状态的ins-1细胞内的分布变化。方法以芒果苷单体、知母和知母-黄柏药对形式等剂量给药ins-1细胞,运用LC-MS/MS测定ins-1细胞中MGF的含量;设置正常组和模型组(140μmol·L^(-1 )H _(2)O _(2)处理ins-1细胞1 h),给药100μmol·L^(-1 ) MGF,分离线粒体、细胞核及胞质并检测其中的MGF。结果与单体给药相比,知母和药对给药后MGF在细胞内的浓度升高,药对组AUC_((0-t))明显高于单体组和知母组(P1);ins-1细胞单次给药MGF 100μmol·L^(-1 )后,正常组MGF主要分布于细胞核,模型组MGF主要分布于胞质;与正常组相比,MGF在模型组的线粒体和胞质中C _(max)和AUC_((0-t))升高(P1),细胞核中C _(max)和AUC_((0-t))明显降低(Pins-1细胞具有促进作用;氧化损伤处理会改变MGF在ins-1细胞内的分布。

关键词：知母-黄柏芒果苷 ins-1细胞细胞药代动力学线粒体细胞核细胞质

LC-MS/MS法测定芒果苷在ins-1细胞中药代动力学

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中国药理学通报 2020年第7期36卷 1024-1029页

作者：周鸿郑丽婷林爱华刘奕明广州中医药大学第二附属医院Ⅰ期临床研究室广东广州510120 广州中医药大学第二附属医院珠海医院药剂科广东广州510120 广州中医药大学第二附属医院广东省中医证候临床研究重点实验室广东广州510120

目的建立LC-MS/MS法测定芒果苷(mangiferin,MGF)在ins-1细胞的含量,考察不同剂量芒果苷在ins-1细胞药代动力学特征,及同剂量下正常和模型组的药动学参数。方法以芦丁为内标,细胞样品采用乙腈∶乙酸(40∶1)液液萃取。色谱柱为C18柱(150×... 详细信息

目的建立LC-MS/MS法测定芒果苷(mangiferin,MGF)在ins-1细胞的含量,考察不同剂量芒果苷在ins-1细胞药代动力学特征,及同剂量下正常和模型组的药动学参数。方法以芦丁为内标,细胞样品采用乙腈∶乙酸(40∶1)液液萃取。色谱柱为C18柱(150×2.1 mm,3.5μm),1%冰乙酸-甲醇为流动相,在电喷雾离子化和正离子多反应模式下运用QTRAP 6500+型液质联用仪测定。ins-1细胞给药剂量为50、100、500μmol·L^-1 MGF;用140μmol·L^-1 H2O2损伤ins-1细胞1 h后给药100μmol·L^-1 MGF;进行MGF药动学研究。结果在2~500μg·L^-1范围内,MGF线性关系良好。日内、日间RSD均≤14.49%,准确度在93.97%~103.54%。细胞给药MGF低中高剂量后,AUC(0-t)和Cmax随给药剂量增加而增加;正常和造模组ins-1细胞Cmax分别为454.83±45.46和334.00±35.00μg·L^-1,AUC(0-t)分别为13 289.23±1 080.58和9 349.89±1 101.36μg·h·L^-1。结论该方法简单、特异、灵敏、可靠,适用于测定ins-1细胞中MGF。在50~500μmol·L^-1剂量内,MGF在ins-1细胞内未表现出线性药动学特征;模型组ins-1细胞Cmax和AUC(0-t)明显低于正常组。

关键词： LC-MS/MS 芒果苷浓度 ins-1细胞氧化损伤细胞药代动力学

在ins-1细胞中构建胰腺组织硫氧还蛋白相互作用蛋白过表达模型:两种腺病毒感染方法的差异

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中国组织工程研究 2018年第28期22卷 4487-4492页

作者：曹竹杰冯艳金李丹王瑾焦向英山西医科大学生理学系细胞生理学省部共建教育部重点实验室山西省太原市030001

背景:目前,通过腺病毒感染方法在细胞中构建蛋白质过表达模型的方法主要有2种,一是在腺病毒感染细胞4 h后补充1640完全培养基,24 h后换为完全培养基,再继续培养到48 h(方法Ⅰ);另一种是在腺病毒感染细胞4 h后用PBS洗去含有腺病毒的1640... 详细信息

背景:目前,通过腺病毒感染方法在细胞中构建蛋白质过表达模型的方法主要有2种,一是在腺病毒感染细胞4 h后补充1640完全培养基,24 h后换为完全培养基,再继续培养到48 h(方法Ⅰ);另一种是在腺病毒感染细胞4 h后用PBS洗去含有腺病毒的1640培养基,更换4 mL完全培养基培养到48 h,中间不做任何处理(方法Ⅱ)。前者病毒的作用时间较长,感染效果较好,但病毒本身对细胞的损害程度较大,对实验模型的稳定性产生干扰。而后者病毒的作用时间短,对细胞的毒性低,但有时病毒感染效率较低,目的蛋白的表达效果欠佳。目的:在大鼠ins-1胰岛β细胞中,通过比较相同腺病毒载体介导的不同感染细胞的方法而寻找一种更加稳定而高效的硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-interacting protein,TXNIP)过表达模型。方法:构建含有绿色荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP)和TXNIP过表达腺病毒载体(Ad-TXNIP-GFP)。分别设立正常组、空病毒组和TXNIP过表达组,按照上述2种不同的方法进行病毒转染。结果与结论:(1)方法Ⅱ中的绿色荧光蛋白荧光强度和阳性效率高于方法Ⅰ;(2)方法Ⅱ中的细胞形态更好且细胞存活率更高;(3)方法Ⅱ中,目的基因TXNIP在mR NA水平和蛋白质水平的表达情况明显高于方法Ⅰ。由以上结果得出结论,腺病毒感染ins-1细胞4 h后,使用PBS将旧培养基洗去并更换新培养基,继续培养到48 h的方法更有利于在ins-1细胞中构建TXNIP过表达模型。

关键词：腺病毒科感染基因表达调控基因调节胰岛素分泌细胞组织工程腺病毒载体绿色荧光蛋白 ins-1细胞硫氧还蛋白相互作用蛋白 TXNIP 组织构建糖尿病存活率感染效率流式细胞术实时PCR Western blot