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INHBA在膀胱癌中的表达和生物学功能研究

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INHBA在膀胱癌中的表达和生物学功能研究

作者：童永华华中科技大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在探究INHBA在膀胱癌中的表达和生物学功能,阐释其在膀胱癌发生和进展中的作用。方法:采用生物信息学分析从TCGA和GEO数据库获得的膀胱癌患者的临床资料和RNA测序数据,并结合RT-q PCR实验、Western Blot实验、CCK-8细胞增... 详细信息

目的:本研究旨在探究INHBA在膀胱癌中的表达和生物学功能,阐释其在膀胱癌发生和进展中的作用。方法:采用生物信息学分析从TCGA和GEO数据库获得的膀胱癌患者的临床资料和RNA测序数据,并结合RT-q PCR实验、Western Blot实验、CCK-8细胞增殖实验、Ed U增殖实验、划痕实验、Trans-Well迁移实验、小鼠皮下成瘤实验等,探究INHBA在膀胱癌中的重要调控作用。结果:1)INHBA在膀胱癌组织中高表达,且与膀胱癌的分期和分级呈正相关;2)与INHBA低表达患者相比,INHBA高表达患者的总体生存期和疾病特异性生存期显著缩短,且基于INHBA表达水平的列线图能较好地预测膀胱癌患者的预后;3)INHBA相关的差异表达基因富集于上皮-间充质转化(EMT)通路,INHBA对EMT过程的关键调控因子SNAI1和RBM49的表达具有潜在调节作用;4)敲低INHBA可显著抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移,而过表达INHBA则与之相反;5)膀胱癌中INHBA的表达水平与抑制性免疫细胞的浸润水平呈正相关;6)膀胱癌中INHBA与关键免疫检查点基因显著共表达,且CD274的表达水平受INHBA调控;7)敲低INHBA的表达水平可显著减小小鼠的肿瘤体积,抑制膀胱癌的进展。结论:INHBA在膀胱癌中高表达,且与较差的生存预后及较高的临床分级、分期相关。INHBA既可以通过促进膀胱癌的EMT过程,也可以通过重塑免疫微环境和调控免疫检查点基因表达来调控膀胱癌的进展。INHBA可作为膀胱癌的预后标志物和潜在治疗靶点。

关键词： INHBA 膀胱癌上皮-间充质转化肿瘤微环境

miR-29c-5p通过靶向INHBA调控水牛卵泡颗粒细胞功能状态的研究

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miR-29c-5p通过靶向INHBA调控水牛卵泡颗粒细胞功能状态的研究

作者：程佳瑞广西大学

学位级别：硕士

卵泡颗粒细胞是卵泡中重要的功能细胞,其凋亡、增殖和类固醇激素分泌等功能状态的变化与卵泡发育密切相关。microRNA(miRNA)是一类小非编码RNA分子,广泛参与颗粒细胞凋亡、增殖、自噬、类固醇激素合成等多种生理过程。根据前期水牛健康... 详细信息

卵泡颗粒细胞是卵泡中重要的功能细胞,其凋亡、增殖和类固醇激素分泌等功能状态的变化与卵泡发育密切相关。microRNA(miRNA)是一类小非编码RNA分子,广泛参与颗粒细胞凋亡、增殖、自噬、类固醇激素合成等多种生理过程。根据前期水牛健康与闭锁卵泡颗粒细胞高通量测序发现miR-29c-5p在水牛闭锁卵泡中高表达,提示其可能参与调控水牛卵泡闭锁。本试验运用qRT-PCR、Western blot、ELISA、流式细胞术、EdU等技术,结合基因过表达、干扰以及共转染等方法,探讨miR-29c-5p及其靶基因调控水牛卵泡颗粒细胞功能状态的机理,为深入研究水牛卵泡发育、闭锁的调控机制,提高水牛繁殖效率提供理论基础。1、miR-29c-5p调控水牛卵泡颗粒细胞功能状态研究miR-29c-5p对水牛颗粒细胞增殖、凋亡及类固醇激素合成功能的影响。结果表明,miR-29c-5p在水牛闭锁卵泡颗粒细胞中的表达量高于健康卵泡(PINHBA基因调控水牛卵泡颗粒细胞功能状态。生物信息学分析、qRT-PCR、双荧光素酶报告实验检测结果表明,INHBA是miR-29c-5p的靶基因;过表达INHBA显著促进水牛卵泡颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,并显著促进类固醇激素E2与PROG的分泌(PINHBA过表达载体,结果显示,INHBA逆转了 miR-29c-5p对水牛颗粒细胞功能状态的调控作用,进一步表明miR-29c-5p通过靶基因INHBA调控水牛颗粒细胞的功能状态。3、初步探讨INHBA调控水牛卵泡颗粒细胞功能状态的作用机理。INHBA编码的βA亚基是激活素A(ActivinA,ACV-A)和抑制素A(InhibinA,INH-A)的组成部分。进一步验证INHBA是否通过增加激活素A和抑制素A的分泌,进而调节水牛卵泡颗粒细胞功能状态。结果表明,miR-29c-5p mimics显著减少体外培养的水牛卵泡颗粒细胞激活素A和抑制素A的分泌,而INHBA的过表达显著增加激活素A和抑制素A的分泌(PINHBA基因促进水牛卵泡颗粒细胞凋亡、抑制增殖和类固醇激素E2、PROG合成;INHBA基因通过促进激活素A和抑制素A的产生进而调控水牛卵泡颗粒细胞功能状态。

关键词： miR-29c-5p INHBA 水牛颗粒细胞卵泡闭锁激活素A 抑制素A

SLC7A11-AS1与INHBA共同高表达在胰腺癌细胞干性获得中的作用

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SLC7A11-AS1与INHBA共同高表达在胰腺癌细胞干性获得中的作用

作者：王菲哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

胰腺癌的病情发展迅速且患者的预后较差。吉西他滨是目前最主要的抗肿瘤药物,长期使用会引起患者对化疗的抗药性。肿瘤干细胞是胰腺癌的化疗耐药进程、导致肿瘤的转移和复发的主要原因。针对肿瘤干细胞的靶向性清除是治疗胰腺癌的重要... 详细信息

胰腺癌的病情发展迅速且患者的预后较差。吉西他滨是目前最主要的抗肿瘤药物,长期使用会引起患者对化疗的抗药性。肿瘤干细胞是胰腺癌的化疗耐药进程、导致肿瘤的转移和复发的主要原因。针对肿瘤干细胞的靶向性清除是治疗胰腺癌的重要手段。LncRNA是一种能够与多种不同类型的分子发生交互作用的非编码RNA。可通过调控细胞内多种信号通路进而参与肿瘤发生发展、化疗耐药、转移复发。激活素A由INHBA基因所编码,其参与经典的TGF-β信号转导途径,激活素A/TGF-β能够诱导Smad2/3磷酸化,随即与Smad4结合转运到核内以调控靶基因转录。从而促进靶癌干性基因的转录,导致干性增强。因此,靶向激活素A可能会降低PDAC细胞的癌干性特性。但Smad不能持续磷酸化,PPM1A可以将活化的p-Smad2/Smad3蛋白特异性的去磷酸化终止了TGF-β信号通路。本课题组前期研究表明SLC7A11-AS1结合RSL1D1,会使PPM1A结合RSL1D1能力降低,抑制PPM1A发生豆蔻酸化出核的去磷酸化作用,从而导致Smad去磷酸化过程降低而发生持续磷酸化。本研究根据SLC7A11-AS1可能影响Smad的去磷酸化,而INHBA会影响Smad磷酸化,如果两个同时高表达,会引起Smad持续磷酸化。会导致干性的增强,导致肿瘤耐药来进行研究。基于上述理论基础,本研究探索SLC7A11-AS1和INHBA是以何种方式调控胰腺癌耐药的,首先构建过表达INHBA的pc DNA3.1-INHBA载体,然后建立四组稳定过表达细胞系,分别是;对照组、单独过表达SLC7A11-AS1、单独过表达INHBA、SLC7A11-AS1和INHBA共同过表达的细胞株。为后续研究工作做好铺垫。进一步分析了SLC7A11-AS1、INHBA在肿瘤干细胞中的表达情况,并研究其两者共同高表达与胰腺癌患者不良预后的相关性,采用悬浮培养法对胰腺癌细胞进行富集,结果显示SLC7A11-AS1、INHBA在体外的表达水平高于贴壁培养的细胞。进行直观的细胞悬浮培养发现,SLC7A11-AS1和INHBA共同高表达的细胞成球能力增强。且两者共同高表达的患者生存时间有显著降低。这可能提示我们两者与肿瘤的恶性程度相关。最后,进行两者共同过表达对胰腺癌细胞干性的影响的分析,进行自分泌、旁分泌水平Smad蛋白磷酸化分析、干性相关蛋白分析以及两者共同高表达是否影响胰腺癌细胞的吉西他滨抗药性等实验进行验证。结果表明,SLC7A11-AS1、INHBA共同高表达可以增强CSCs的表型特征,单独或共同过表达SLC7A11-AS1、INHBA可增强Smad蛋白磷酸化水平,而加入抑制剂SB505124可以中和SLC7A11-AS1和INHBA共同高表达引起的Smad蛋白磷酸化水平上升的作用,证实SLC7A11-AS1和INHBA能够促进细胞干性。进一步通过分析干细胞标志物的表达。证实SLC7A11-AS1和INHBA参与胰腺癌细胞的化疗耐药,相对于无处理对照组,SLC7A11-AS1和INHBA共同高表达显著增强了CSCs标志因子CD133、CD44、Sox2和Nanog的表达。并且MTT实验说明在SLC7A11-AS1、INHBA单独或共同高表达的对照组中,均可提高吉西他滨的抗性及增殖能力。这进一步验证了SLC7A11-AS1、INHBA可影响肿瘤细胞的恶性。综上所述,本课题探讨LncRNA SLC7A11-AS1和INHBA共同高表达对细胞干性的作用。研究其与胰腺癌耐药的相关性及调控机制,可以为胰腺癌的临床治疗提供理论与试验依据。加深对这种恶性疾病的认识,便于制定新的治疗方案。

关键词：胰腺癌化疗耐药性 LncRNA SLC7A11-AS1 INHBA 干性 Smad磷酸化

HPV整合靶基因INHBA与宫颈癌患者预后的综合性分析

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标记免疫分析与临床 2023年第6期30卷 1017-1023页

作者：沈从乐李韦杰任博马建和王雅杰首都医科大学附属北京地坛医院检验科北京100015

目的利用生物信息学和细胞学实验探究INHBA基因在宫颈癌中的临床意义和相关机制。方法利用TCGA、GEO等数据库检测INHBA在宫颈癌样本中的表达变化;利用GEPI2A数据库分析INHBA表达与宫颈癌患者预后的相关性;利用LinkedOmics数据库挖掘宫... 详细信息

目的利用生物信息学和细胞学实验探究INHBA基因在宫颈癌中的临床意义和相关机制。方法利用TCGA、GEO等数据库检测INHBA在宫颈癌样本中的表达变化;利用GEPI2A数据库分析INHBA表达与宫颈癌患者预后的相关性;利用LinkedOmics数据库挖掘宫颈癌中与INHBA共表达的基因并进行GO和KEGG信号通路分析;利用ENCORI数据库探究INHBA的上游调控miRNA,并在CancerMIRNome数据库中验证相关miRNA在宫颈癌中的表达。在宫颈癌细胞HeLa和SiHa中敲低INHBA表达,进行CCK-8、细胞划痕和Transwell小室实验,探究INHBA对细胞增殖和迁移的影响;结果与正常样本相比,INHBA基因在宫颈癌样本中高表达,并且与患者的不良预后相关。miR-532-5p可能是INHBA的上游调控分子。INHBA能够通过调控细胞增殖和迁移影响癌症进展。结论INHBA表达升高是宫颈癌患者不良预后的潜在指标。

关键词： INHBA 宫颈癌预后

INHBA基因表达上调与左、右半结肠癌临床病理特征及预后的相关性

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临床与实验病理学杂志 2018年第9期34卷 953-957页

作者：周薇毕嘉欣冶亚平丁彦青南方医科大学附属南方医院病理科广州510515 南方医科大学基础医学院病理学系广州510515 广东省肿瘤分子病理重点实验室广州510515

目的初步探讨左、右半结肠癌基因转录水平的分子差异,及其差异表达基因INHBA与结肠癌临床病理特征及预后的相关性。方法收集具有完整随访资料的结肠癌标本,分析左、右半结肠癌患者的生存情况,同时利用公共数据库中的结肠癌数据,筛选左... 详细信息

目的初步探讨左、右半结肠癌基因转录水平的分子差异,及其差异表达基因INHBA与结肠癌临床病理特征及预后的相关性。方法收集具有完整随访资料的结肠癌标本,分析左、右半结肠癌患者的生存情况,同时利用公共数据库中的结肠癌数据,筛选左、右半结肠癌组织的差异表达基因,并应用RT-PCR及免疫组化分析差异表达基因INHBA的表达水平与结肠癌临床病理特征及预后的相关性。结果结直肠癌公共数据库分析结果显示,左、右半结肠癌转录组水平差异表达基因在TGF-β、NF-κB等信号通路中显著富集,TGF-β通路中的相关差异表达基因INHBA在右半结肠癌组织中的mRNA及蛋白表达水平显著高于左半结肠癌(P INHBA高表达与右半结肠癌的脉管浸润、远处转移及不良预后呈正相关(P INHBA基因在右半结肠癌组织中的表达水平显著高于左半结肠癌,并且其表达与患者的恶性进展及不良预后密切相关,INHBA表达上调可能在右半结肠癌的发生和演进过程中发挥着重要作用。

关键词：结肠肿瘤左、右半结肠癌 INHBA 预后 TGF-β

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乳腺癌中INHBA表达及与临床预后的关系

临床与实验病理学杂志 2018年第3期34卷 331-333页

作者：茅育蕾蔡宜玲绍兴市文理学院附属医院病理科绍兴312000 浙江省诸暨中医院病理科诸暨312000

目的检测INHBA(inhibin-βA)在乳腺癌及癌旁乳腺组织中的表达,探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系及对乳腺癌患者预后的意义。方法应用免疫组化法检测85例乳腺浸润性导管癌及35例癌旁乳腺组织中INHBA的表达。结果INHBA在乳腺癌和癌旁组... 详细信息

目的检测INHBA(inhibin-βA)在乳腺癌及癌旁乳腺组织中的表达,探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系及对乳腺癌患者预后的意义。方法应用免疫组化法检测85例乳腺浸润性导管癌及35例癌旁乳腺组织中INHBA的表达。结果INHBA在乳腺癌和癌旁组织中的表达差异有统计学意义(PINHBA高表达和肿瘤较低的分化程度、淋巴结转移及较高的Ki-67增殖指数具有相关性(PINHBA高表达乳腺癌患者的生存期明显短于低表达组(PINHBA表达可以作为判断乳腺癌患者的独立危险因素(PINHBA表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及Ki-67增殖指数密切相关,可能参与乳腺癌的发生发展,可以作为乳腺癌患者预后的判断指标。

关键词：乳腺癌 INHBA 预后免疫组织化学

INHBA与COL11A1促进结直肠癌细胞增殖和侵袭的机制研究

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INHBA与COL11A1促进结直肠癌细胞增殖和侵袭的机制研究

作者：林康南昌大学

学位级别：硕士

目的:结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）目前仍是一种危害极大的恶性肿瘤,发病率和致死率都在恶性肿瘤中排前三位。研究针对结直肠癌的特异性诊断与治疗肿瘤标志物,是很有意义的。本研究主要研究INHBA和COL11A1在结直肠癌中表达情况和... 详细信息

目的:结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）目前仍是一种危害极大的恶性肿瘤,发病率和致死率都在恶性肿瘤中排前三位。研究针对结直肠癌的特异性诊断与治疗肿瘤标志物,是很有意义的。本研究主要研究INHBA和COL11A1在结直肠癌中表达情况和生物学功能,其次研究它们发挥这些功能的具体生物学机制以及这两个蛋白之间的相互作用关系。最后阐明其共同作用在结直肠癌中的更广泛的意义。方法:1、生物信息学分析联合免疫蛋白印迹法分析INHBA在结直肠癌中的表达情况。2、通过转染si RNA沉默INHBA蛋白的表达,然后观察结直肠癌细胞的生物学功能,包括细胞增殖、侵袭和迁移的变化。3、生物信息学共表达分析筛选出在结直肠癌中与INHBA表达趋势最一致的蛋白质,然后分析该蛋白的表达情况以及对结直肠癌细胞生物学功能的影响。4、通过Co-IP以及细胞转染技术,验证INHBA与另一蛋白的结合情况,同时验证它们之间的上下游调控关系,最后验证这两个蛋白对PI3K/AKT/m TOR通路的影响。结果:1、INHBA蛋白质在结直肠癌细胞中高表达。2、沉默INHBA蛋白表达后,结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力减弱。3、基因共表达分析表明INHBA与COL11A1的表达量存在显著的正相关关系。并且COL11A1在结直肠癌中也显著高表达,沉默COL11A1之后发现结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力也相应减弱。4、Co-IP结果显示INHBA与COL11A1存在结合关系,但是转染后分析却发现这两个蛋白并不存在上下游调控关系。此外我们还发现,同时沉默INHBA和COL11A1的蛋白表达,结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力比单一沉默单个基因弱,表明这两个蛋白在结直肠癌细胞中产生协同作用,其高表达共同促进结直肠癌细胞的生长和转移。结论:INHBA与COL11A1在结直肠癌细胞中均高表达,他们存在结合关系但是不属于上下游调控关系。在结直肠癌中其高表达共同通过激活PI3K/AKT/m TOR通路从而促进结直肠癌增殖侵袭和迁移能力。这为结直肠癌的特异性诊断和靶向治疗药物的开发提供了基础,这些潜在能力需要更多分子生物学实验和临床实验验证。

关键词：结直肠癌 INHBA COL11A1 PI3K/AKT/mTOR通路增殖侵袭迁移

宫颈癌免疫细胞浸润及INHBA对宫颈癌生物学行为的影响

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宫颈癌免疫细胞浸润及INHBA对宫颈癌生物学行为的影响

作者：苏亚妮延安大学

学位级别：硕士

研究背景:癌症是全球主要的死亡原因之一,宫颈癌是全球范围排名第4位的常见恶性肿瘤,也是女性面临的主要健康问题,发病率在我国女性恶性肿瘤中居第二位。由于基因测序的蓬勃发展,GEO在生物信息学分析中的作用越来越重要。这些数据库为... 详细信息

研究背景:癌症是全球主要的死亡原因之一,宫颈癌是全球范围排名第4位的常见恶性肿瘤,也是女性面临的主要健康问题,发病率在我国女性恶性肿瘤中居第二位。由于基因测序的蓬勃发展,GEO在生物信息学分析中的作用越来越重要。这些数据库为发现新的功能基因和分析这些基因对预后的影响提供测序数据。因此,本研究的目的是使用综合生物信息学分析鉴定预后基因。在本研究中,我们试图测定INHBA基因在宫颈癌细胞系中的表达水平,评估其对宫颈癌的预后价值,并探讨INHBA基因的肿瘤相关功能和潜在机制。然而,尚无关于INHBA在宫颈癌中的生物学功能。免疫细胞浸润是指免疫细胞从血液中移向组织,开始发挥它的作用,可以从组织中分离出浸润免疫细胞。通过发挥抗肿瘤作用,浸润肿瘤的免疫细胞对肿瘤的发展和抗癌治疗的成功具有深远的影响。已经有报道,在头颈部鳞癌中免疫浸润与INHBA相关,免疫浸润的B细胞影响预后。然而,INHBA在宫颈癌中与免疫细胞浸润的关系还未见报道。研究目的:研究宫颈癌预后的潜在生物标志物和免疫细胞浸润;分析INHBA在宫颈癌中的表达水平,探讨它在宫颈癌中的生物学作用及相关的分子机制。研究方法:从GEO下载宫颈癌组织的芯片数据集(GSE9750),R的“limma”包鉴定差异表达基因(DEGs),使用R的“colorspace”、“stringi”、“DOSE”、“cluster Profiler”、“pathview”进行GO和KEGG富集分析。利用GEPIA平台验证了宫颈癌肿瘤组织和正常样品中INHBA的表达水平及预测预后。用STRING构建蛋白互作网络(PPI)。在R中经“e1071”、“parallel”、“preprocess Core”三个包用“CIBERSORT”软件获得宫颈癌组织样本的免疫浸润细胞表达情况。将慢病毒sh RNAINHBA转染到宫颈癌细胞中,CCK-8法被用来检测增殖,用流式检测凋亡,Transwell法被用来检测迁移侵袭。Western Blot被用于评估相关蛋白水平变化。结果:1)与正常宫颈组织样本相比,宫颈癌样本中早期CD4 T细胞、未活性NK细胞、M0和M1巨噬细胞均上调;而未活化的CD4记忆性T细胞、单核细胞、未活化的DC在宫颈癌样本中表达明显降低。2)鉴定出与宫颈癌预后高度相关的Hub基因(INHBA),宫颈癌组织中INHBA的表达水平明显升高,高表达INHBA的生存周期明显短于低表达组的生存周期;下调INHBA使宫颈癌细胞增殖能力抑制,迁移能力下降,及侵袭能力延缓;INHBA的下调也促进凋亡。3)宫颈癌中下调INHBA可能通过下调TGF-β1的表达,来抑制Snail,Slug和Twist的表达,从而上调E-cadherin的表达,而下调N-cadherin和Vimentin的表达,从而影响肿瘤细胞的EMT进程。4)在宫颈癌中敲低INHBA可能下调MMP-2和MMP-9的表达来抑制转移能力。结论:1)本研究所得出的与宫颈癌预后高度相关的Hub基因INHBA以及免疫细胞浸润比例给宫颈癌的治疗和预后研究提供了新的依据。2)我们初步证实了INHBA在宫颈癌中起着重要的作用,并且是潜在的致癌基因。3)在宫颈癌中,下调INHBA显著抑制增殖,迁移及侵袭,并有望成为诊断中潜在的肿瘤分子标志物和治疗靶标。在宫颈癌中INHBA可能通过调节TGF-β信号通路的活性来促进EMT进程和转移。

关键词：宫颈癌 INHBA 免疫细胞浸润肿瘤转移 TGF-β

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INHBA在皮肤鳞状细胞癌中高表达

皮肤性病诊疗学杂志 2023年第2期30卷 95-99页

作者：曹雪杨冰燕张弘扬董灵娣刘昱昕喻楠巴彦淖尔市医院内蒙古临河015000 宁夏医科大学总医院宁夏银川750000

目的探讨抑制素β-A(INHBA)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)发生发展中的表达及意义。方法采用免疫组化法、RT-qPCR及Western blot法检测INHBA在30例皮肤鳞状细胞癌(cSCC)皮损组织中的表达水平,并与17例正常皮肤(NS)、30例光线性角化病(AK)进行... 详细信息

目的探讨抑制素β-A(INHBA)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)发生发展中的表达及意义。方法采用免疫组化法、RT-qPCR及Western blot法检测INHBA在30例皮肤鳞状细胞癌(cSCC)皮损组织中的表达水平,并与17例正常皮肤(NS)、30例光线性角化病(AK)进行比较。结果在NS、AK及cSCC组中,INHBA阳性表达呈棕黄色颗粒沉积于细胞质/核,阳性表达率分别为23.53%、66.67%和86.67%(χ^(2)=27.10,P=0.001)。NS、AK及cSCC中的INHBA mRNA相对表达量依次为1.097±0.083、1.328±0.041、1.731±0.064,三组差异具有统计学意义(F=48.53,PINHBA蛋白相对表达量依次为0.850±0.011、0.925±0.020、1.050±0.013,三组差异具有统计学意义(F=86.62,PINHBA在cSCC中高表达,INHBA可能与cSCC形成相关。

关键词： INHBA 光线性角化病皮肤鳞状细胞癌