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Endo180半胱氨酸富集区与i型胶原蛋白C末端分子的体外相互作用

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第5期31卷 521-526页

作者：赵沛梁朋四川大学生命科学学院成都610064

i型胶原蛋白（type i collagen）是由2条α1链和1条α2链构成的纤维状异源三聚体.它是构成细胞外基质最主要的成分.i型胶原蛋白和内吞胶原蛋白受体Endo180（Endocytic 180）之间的相互作用在细胞基质的粘附和降解过程中起着关键性作用.... 详细信息

i型胶原蛋白（type i collagen）是由2条α1链和1条α2链构成的纤维状异源三聚体.它是构成细胞外基质最主要的成分.i型胶原蛋白和内吞胶原蛋白受体Endo180（Endocytic 180）之间的相互作用在细胞基质的粘附和降解过程中起着关键性作用.但内吞胶原蛋白受体Endo180与胶原蛋白的结合区域尚未有相关的报道.本研究在体外通过酶联免疫吸附、蛋白免疫沉淀和Western印迹等多种定量分析实验发现,用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）标记i型胶原蛋白C末端（氨基酸1151~1464）后形成的分泌型三聚体融合蛋白AP-Coll-S,可与用抗体恒定区（antibody constant fragment,Fc）标记的Endo180的半胱氨酸富集区（CysR）结合.从而表明,AP-Coll-S和CysR-Fc之间存在相互作用.本研究结果为进一步研究胶原蛋白和其受体Endo180的分子间相互作用提供新依据.

关键词： i型胶原蛋白内吞胶原蛋白受体(Endo180) 半胱氨酸富集区碱性磷酸酶(AP)-标签

Decorin对僵直膝关节滑膜B型细胞增殖及i型胶原蛋白表达的影响

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中国病理生理杂志 2015年第7期31卷 1277-1281页

作者：邢帮荣陈郁鲜曾花杨晓燕梁彩倩周伟雄孔庆磊韩建华张永标中山大学附属第三医院急诊科广东广州510630 中山大学附属第三医院骨科广东广州510630

目的:探讨重组核心蛋白聚糖(decorin)对人僵直膝关节滑膜B型细胞的增殖和Ⅰ型前胶原蛋白(PcⅠ)mRNA表达及Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)合成的影响,为decorin治疗人膝关节僵直提供理论依据。方法:分离培养人僵直膝关节滑膜B型细胞,分别加入不同浓... 详细信息

目的:探讨重组核心蛋白聚糖(decorin)对人僵直膝关节滑膜B型细胞的增殖和Ⅰ型前胶原蛋白(PcⅠ)mRNA表达及Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)合成的影响,为decorin治疗人膝关节僵直提供理论依据。方法:分离培养人僵直膝关节滑膜B型细胞,分别加入不同浓度(0.1、5和10 mg/L)的decorin;培养24 h、48 h和72 h后用MTT法测定关节滑膜B型细胞的活力;用流式细胞术检测滑膜B型细胞的周期和凋亡;RT-PCR法检测滑膜B型细胞的PcⅠmRNA表达;Western blot检测ColⅠ的合成。结果:5和10 mg/L的decorin可有效降低滑膜B型细胞的活力(Pin可抑制人僵直膝关节滑膜B型细胞的增殖、PcⅠmRNA的表达和ColⅠ的合成,在防治膝关节僵直中可能起一定的作用。

关键词：膝关节僵直滑膜B型细胞核心蛋白聚糖 i型胶原蛋白

纳米羟基磷灰石表面阿伦膦酸钠和i型胶原蛋白复合膜对成骨细胞形态和增殖的影响

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口腔医学研究 2016年第3期32卷 253-256页

作者：姜燕姚江武厦门市口腔医院修复科福建厦门361003

目的:探讨经化学结合阿伦膦酸钠(alendronate sAium,ALN)和i型胶原蛋白(collagen type i,COL i)修饰的纳米羟基磷灰石(nano-hydroxyapatite,nHA)涂层对成骨细胞在其表面黏附、生长和增殖的影响。方法:建立nHA涂层、nHA/ALN、nHA/COL i、nHA/ALN/COL i和nHA/COL i/ALN复合膜,将成骨细胞接种于复合膜表面,分别培养7d和14d,扫描电镜观察成骨细胞在不同膜层表面的黏附形态的变化,WST-1法对各膜层表面细胞数量进行定量检测。结果:成骨细胞在nHA/ALN/COL i和nHA/COL i/ALN复合膜表面的增殖活性最高(Pi和nHA/COL i/ALN复合膜表面生长状态优于其他膜层,在COL i膜直接作用下,成骨细胞伸展更为完全,并有较多伪足突起和微绒毛结构呈分化表型。结论:将ALN和COL i修饰于nHA表面能够协同促进成骨细胞的黏附和增殖。nHA/ALN/COL i复合膜促进成骨细胞的黏附与分化。

关键词：纳米羟基磷灰石阿伦膦酸钠 i型胶原蛋白成骨细胞

纳米羟基磷灰石表面阿伦膦酸钠和i型胶原蛋白复合膜的制备

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口腔医学研究 2016年第1期32卷 21-25页

作者：姜燕姚江武厦门市口腔医院修复科福建厦门361003

目的:在纳米羟基磷灰石(nHA)涂层表面制备稳定可重复的阿伦膦酸钠(ALN)和i型胶原蛋白(COL i)复合膜。方法:在纯钛(PT)表面电化学沉积nHA涂层,以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)为偶联剂,在... 详细信息

目的:在纳米羟基磷灰石(nHA)涂层表面制备稳定可重复的阿伦膦酸钠(ALN)和i型胶原蛋白(COL i)复合膜。方法:在纯钛(PT)表面电化学沉积nHA涂层,以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)为偶联剂,在涂层表面结合ALN和COL i,制备nHA/ALN/COL i和nHA/COL i/ALN复合膜。通过扫描电子显微镜(SEM),X射线能谱分析仪(EDS)和X射线衍射仪(XRD)表征nHA涂层,通过X射线光电子能谱仪(XPS)和傅里叶红外光谱仪(FTiR)表征复合膜。结果:ALN和COL i可通过偶联剂结合于nHA涂层,改变其结合次序,可分别形成nHA/ALN/COL i和nHA/COL i/ALN复合膜。结论:通过化学结合法形成的nHA/ALN/COL i和nHA/COL i/ALN复合膜具有不同的ALN缓释潜力。

关键词：纳米羟基磷灰石阿伦膦酸钠 i型胶原蛋白表面修饰

葛根素对极低频电磁场下人胚胎眼巩膜成纤维细胞增殖活性及i型胶原蛋白表达的影响

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中华眼视光学与视觉科学杂志 2013年第8期15卷 479-483页

作者：蔡晓静朱煌赵立全孔繁琪冯婕妤牛宗镇上海交通大学医学院附属新华医院眼科 200092

目的研究葛根素对极低频电磁场（ELF—EMFs）作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞（HFSFs）增殖活性及i型胶原蛋白（COLlAl）表达的影响。方法实验研究。体外培养HFSFs．根据是否暴露于0．2mT电磁场分为暴露组和非暴露组，暴露组又分为不同终... 详细信息

目的研究葛根素对极低频电磁场（ELF—EMFs）作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞（HFSFs）增殖活性及i型胶原蛋白（COLlAl）表达的影响。方法实验研究。体外培养HFSFs．根据是否暴露于0．2mT电磁场分为暴露组和非暴露组，暴露组又分为不同终浓度葛根素组（O．0、0．1、1．0、10．0μmol／L）。MTT比色法检测不同暴露时间（0、12、24、48h）暴露组和非暴露组HFSFs增殖活性，及各浓度葛根素组HFSFs暴露于0．2mT电磁场24h时增殖活性；用***和Western—Blot检测非暴露组和暴露于0．2mT电磁场24h时各浓度葛根素组HFSFsmRNA转录水平和COLlAl蛋白表达。2组间比较采用独立样本t检验，各组整体比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD—t检验。结果暴露组各时间点HFSFs增殖活性差异有统计学意义（t=4．560，P〈0．05）．暴露于0．2mT磁场24h开始即出现HFSFs增殖受抑（t=5．000，P〈0．01）；与非暴露组相比，暴露组细胞内COL1A1蛋白表达下调（t=7．956，P〈0．01），同时mRNA转录也下调（t=17．364，P〈0．01），而1．0μmol／L葛根素开始使HFSFs增殖活性增强（P〈0．01），0．1μmol／L葛根素即使暴露组HFSFs内COL1A1蛋白（P〈0．05）和mRNA表达上调（P〈0．05），且浓度越高变化越明显。结论葛根素可逆向改变***引起的HFSFs增殖活性下降、细胞内COL1A1mRNA和蛋白表达下调，可能对巩膜基质重塑具有预防作用。

关键词：葛根素极低频电磁场人胚胎眼巩膜成纤维细胞 i型胶原蛋白巩膜基质重塑

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苏尼特羊骨胳肌i型胶原蛋白的提取及鉴定

肉类研究 2009年第8期23卷 17-19页

作者：李晓波内蒙古农业大学食品科学与工程学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古乌兰察布职业学院生物技术系内蒙古乌兰察布市012000

用破碎、酶解、盐析三步法提纯苏尼特羊骨胳肌i型胶原蛋白,并用SDS-PAGE电泳鉴定了i型胶原蛋白,建立了一种有效、简便的肌肉i型胶原蛋白的提取、纯化及鉴定的方法。结果发现该法提取的i型胶原蛋白,其纯度达到了SDS-PAGE纯的水平。因此,... 详细信息

用破碎、酶解、盐析三步法提纯苏尼特羊骨胳肌i型胶原蛋白,并用SDS-PAGE电泳鉴定了i型胶原蛋白,建立了一种有效、简便的肌肉i型胶原蛋白的提取、纯化及鉴定的方法。结果发现该法提取的i型胶原蛋白,其纯度达到了SDS-PAGE纯的水平。因此,为肌肉胶原蛋白以及肌肉嫩度的研究提供了有价值的方法。

关键词： i型胶原蛋白胶原提取 SDS-PAGE电泳

转化生长因子β_1对种植体表面成骨细胞i型胶原蛋白基因表达研究

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交通医学 2013年第5期27卷 449-453页

作者：郭宏亮郑纪伟韩建国王鹏来张磊徐州医学院附属徐州口腔医院江苏221002 徐州医学院口腔医学院徐州医学院附属医院口腔科

目的:通过观察特定浓度的转化生长因子β1(TGF-β1),在不同时间刺激体外培养种植体表面成骨细胞中i型胶原蛋白表达情况,探讨TGF-β1对种植体表面成骨细胞增殖分化的影响。方法:体外培养成骨细胞模拟种植体植入后的体内环境接种于钛片表... 详细信息

目的:通过观察特定浓度的转化生长因子β1(TGF-β1),在不同时间刺激体外培养种植体表面成骨细胞中i型胶原蛋白表达情况,探讨TGF-β1对种植体表面成骨细胞增殖分化的影响。方法:体外培养成骨细胞模拟种植体植入后的体内环境接种于钛片表面,将其分为2个浓度刺激组和对照组。刺激组分别加入0.5ng/mL、10ng/mL的TGF-β1刺激细胞增殖和分化,分别收集刺激后第2d、5d、7d培养的细胞。通过RT-PCR检测不同培养时间成骨细胞中的i型胶原蛋白mRNA表达,对照组不加TGF-β1,比较各组间差异程度。结果:浓度为0.5ng/mL的外源性TGF-β1加入到接种于模拟体内种植体的钛片表面的成骨细胞中后,可显著增加成骨细胞中i型胶原蛋白表达(Pi型胶原蛋白的表达(Pi型胶原蛋白在不同时间培养的成骨细胞中,表达在凝胶成像系统光密度分析后可见与对照组中表达量相比,低浓度刺激组表达量略有升高,高浓度刺激组表达量略有降低。结论:浓度为0.5ng/mL的TGF-β1对i型胶原蛋白的表达有促进作用;浓度为10ng/mL外源性TGF-β1对i型胶原蛋白表达有抑制作用。

关键词：转化生长因子1 种植体成骨细胞 i型胶原蛋白钛片逆转录聚合酶链反应

血管紧张素Ⅱ对人肺成纤维细胞i型胶原蛋白表达的影响

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国际呼吸杂志 2015年第22期35卷 1715-1718页

作者：刘珊珊王浩彦唐俊明周秀梅北京丰台医院呼吸科 100071 首都医科大学附属北京友谊医院呼吸科 100050 湖北医药学院附属人民医院临床医学研究所十堰442000

目的探讨血管紧张素Ⅱ（angio（ensin Ⅱ，Angii）对人肺成纤维细胞（huminlungfibroblast，HLF）细胞株HLF-1 i型胶原蛋白表达的影响。方法体外培养HLF-1细胞。采用Masson染色法检测HLF-1细胞总胶原蛋白的表达，采用Westernblot法检测H... 详细信息

目的探讨血管紧张素Ⅱ（angio（ensin Ⅱ，Angii）对人肺成纤维细胞（huminlungfibroblast，HLF）细胞株HLF-1 i型胶原蛋白表达的影响。方法体外培养HLF-1细胞。采用Masson染色法检测HLF-1细胞总胶原蛋白的表达，采用Westernblot法检测HLF-1细胞i型胶原蛋白的表达。结果AngⅡ呈时间依赖性地促进HLF-1细胞总胶原蛋白及工型胶原蛋白的表达，并且在AngⅡ作用24h时达到峰值。结论Angl参与了HLF-1胶原合成的调控，并可能在肺纤维化的发生、发展中起重要作用。

关键词：肺纤维化血管紧张素Ⅱ 人肺成纤维细胞 i型胶原蛋白

富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白对瘢痕疙瘩成纤维细胞β1转化生长因子和i型胶原蛋白基因表达的影响

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中华医学美学美容杂志 2011年第5期17卷 377-380页

作者：王春李小静刘超华翁晓娟郝冬月安徽医科大学第一附属医院整形美容外科合肥230032

目的探讨实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白（secreted protein，acidic and rich in cysteine，SPARC）对瘢痕疙瘩成纤维细胞β1转化生长因子（TGF-β1）、i型胶原蛋白基因表达的影响。... 详细信息

目的探讨实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白（secreted protein，acidic and rich in cysteine，SPARC）对瘢痕疙瘩成纤维细胞β1转化生长因子（TGF-β1）、i型胶原蛋白基因表达的影响。方法用不同浓度重组人SPARC作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞，并以空白组为对照，实时荧光定量RT-PCR法检测TGF-βi、i型胶原蛋白mRNA的表达。结果与空白对照组相比，实验组TGF-βi、i型胶原蛋白mRNA表达明显增高（P〈0．05）。结论SPARC能显著促进瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1、i型胶原蛋白基因的表达。

关键词：瘢痕疙瘩富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 β1转化生长因子 i型胶原蛋白