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Establishment of the model of white blood cell membrane chromatography and screening of antagonizing TLR_4 receptor component from Atractylodes macrocephala Koidz

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Science China(Life Sciences) 2006年第2期49卷 182-189页

作者： Li Cuiqin HE Langchong School of Medicine Xi'an Jiaotong University Xi'an 710061 China School of Medicine Xi'an Jiaotong University Xi'an 710061 China

A model of white blood cell membrane chromatography (WB-CMC) was established to screen active component from Atractylodes macrocephala Koidz. The component can antagonize Toll-like receptor 4 (TLR4); inhibit inflammatory reaction. in the model of WB-CMC, cell membrane stationary phase (CMSP) was prepared by immobilizing the rabbit white blood cell membrane (WBCM) onto the surface of silica carrier; taxinol was used as a model molecule. The active component which can act on WBCM; its receptor (such as TLR4) as an effective target in A. macrocephala was determined by using a replacement experiment. The anti-inflammatory effects of the active component were tested by using pharmacological methods in vivo. The results indicated that the retention characteristics of atractylenolide i as active component was similar to that of taxinol in the model of WB-CMC. And so, atractylenolide i acted on the WBCM; TLR4; its anti-inflammatory activity was related with antagonizing TLR4. Therefore, the interaction between the active component; WBCM; its receptor can be simulated by the model of WB-CMC in vitro. This model can be used to screen active components; to study effective characteristics for acting on definite targets.

关键词： white blood cell membrane chromatography, TLR4 receptor, atractylenolide i, anti-inflammatory effect.

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杜氏盐藻rbcS启动子的克隆和功能分析

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中国生物工程杂志 2008年第4期28卷 47-52页

作者：柴玉荣田芳刘红涛李杰薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室

为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因rbcS的5′上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用Drai、EcoR V、Pvuii和Stui4种平端限... 详细信息

为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因rbcS的5′上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用Drai、EcoR V、Pvuii和Stui4种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建基因组步行文库GWL1、GWL2、GWL3和GWL4;设计特异引物从这4种文库中扩增rbcS基因的5′上游调控序列。在GWL1、GWL4中分别扩增出约1.2kb的片段。对该序列的分析表明,它的3′端与已知盐藻rbcScDNA的5′端序列完全一致,说明是该基因的5′端上游区,并且包含多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box,CAAT-box),富含GT的重复序列。此序列EcoR i下游的片段与除草剂抗性基因bar相融合,构建表达载体,电击法转化盐藻。通过对转化藻株的抗性筛选以及PCR和Southern blot检测,表明该区域能驱动外源基因bar在转基因盐藻中的表达,推断是盐藻rbcS基因的启动子调控区。

关键词：盐藻 i, 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶 rbcS 启动子

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