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Hoechst33342标记大鼠骨髓间充质干细胞及其在大鼠体内的迁移

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中国骨质疏松杂志 2012年第7期18卷 618-622页

作者：侯费祎谢兴文席芳琴李盛华宋敏甘肃中医学院 730000 甘肃省中医药研究院 730050 宁夏自治区人民医院 750021

目的检测外源性的BMSCs是否可向骨缺损处迁移,Hoechest3342标记BMSCs,从而跟踪外源性BMSCs在体内的迁移,研究其归巢机制可行性。方法贴壁筛选提取大鼠BMSCs,培养至第三代,用Hoechst33342标记后,尾静脉回植于颅骨缺损的大鼠体内,14d后处... 详细信息

目的检测外源性的BMSCs是否可向骨缺损处迁移,Hoechest3342标记BMSCs,从而跟踪外源性BMSCs在体内的迁移,研究其归巢机制可行性。方法贴壁筛选提取大鼠BMSCs,培养至第三代,用Hoechst33342标记后,尾静脉回植于颅骨缺损的大鼠体内,14d后处死大鼠,取颅骨,切片,荧光显微镜下观察细胞迁移情况。主要观察指标:光学显微镜下观察不同时期细胞形态和表面抗原检测;荧光显微镜下观察Hoechst33342标记后细胞形态,以及细胞增殖率;组织切片上Hoechst33342标记的阳性细胞。结果筛选纯化的BMSCs呈均一的成纤维细胞样,贴壁生长,以长梭形为主。CD45阴性,CD44、CD90均呈阳性表达;组织切片上可见Hoechst33342标记大鼠的BMSCs。结论外源性的BMSCs可向骨缺损处迁移;Hoechst33342可以标记BMSCs,从而跟踪外源性BMSCs在体内的迁移,进而研究其归巢机制。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞迁移 Hoechst33342

Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色技术检测神经细胞凋亡的对比研究

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癌变．畸变．突变 2014年第3期26卷 180-184页

作者：杨细飞贺春娥汤瑞华田生礼刘建军田生礼深圳市疾病预防控制中心深圳市现代毒理学重点实验室广东深圳518055 深圳大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室广东深圳518060 深圳大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室广东深圳518060

目的：利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法（TUNEL染色检测纳米二氧化硅（nm-SiO2）对神经细胞凋亡的影响，比较两种检测方法的优缺点。方法：以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象，15和30 nm粒径的nm-SiO2（剂量为2.5... 详细信息

目的：利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法（TUNEL染色检测纳米二氧化硅（nm-SiO2）对神经细胞凋亡的影响，比较两种检测方法的优缺点。方法：以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象，15和30 nm粒径的nm-SiO2（剂量为2.5、5、10μg/mL）分别处理细胞24 h，另设1-5 m SiO2组和溶剂对照组，采用Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色检测各处理组对SK-N-SH细胞凋亡的影响。结果：与对照组相比，两种检测方法分析均显示了nm-SiO2处理组SK-N-SH细胞凋亡率显著增加（P〈0.05），且具有尺寸、剂量依赖性，而微米级SiO2对凋亡的影响不显著（P〉0.05）。结论：nm-SiO2能诱导SK-N-SH细胞凋亡。Hoechst33342/PI双染法特异性高，简单易行；TUNEL法灵敏度高，能检测少量的细胞凋亡，但成本较高，两种方法可结合使用以便更加准确的检测神经细胞的凋亡。

关键词：纳米二氧化硅神经细胞凋亡 Hoechst33342 PI双染 TUNEL

利用405nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的流式细胞技术

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现代生物医学进展 2015年第33期15卷 6406-6409页

作者：户乃丽徐晓雪邹林樾杨巍巍首都医科大学医学实验与测试中心北京100069 首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室北京100069

目的:探讨流式细胞仪上405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的效果及影响检测结果的因素。方法:SW480和A549两种细胞经Hoechst33342染色后,流式细胞仪405 nm激光激发检测DNA含量,利用软件计算出处于G0/G1期、S期和G2/M期细胞的百分比... 详细信息

目的:探讨流式细胞仪上405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的效果及影响检测结果的因素。方法:SW480和A549两种细胞经Hoechst33342染色后,流式细胞仪405 nm激光激发检测DNA含量,利用软件计算出处于G0/G1期、S期和G2/M期细胞的百分比,以PI染色法结果作为对照。结果:SW480和A549细胞经Hoechst33342染色后各期的细胞百分比与PI染色法基本一致,无明显差异(P>0.05)。结论:405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA结果可靠,可作为紫外检测的替代方法。

关键词： 405 nm激光 Hoechst33342 流式细胞术细胞周期

色钉菇乙酸乙酯相对SH-SY5Y细胞的保护作用

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解剖学报 2016年第3期47卷 330-336页

作者：李革姚辉刘川高志国王立安管振龙王艳芹河北师范大学生命科学学院石家庄050024

目的探讨色钉菇乙酸乙酯提取物对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导损伤的多巴胺能神经元的保护作用。方法以SH-SY5Y细胞系为对象,首先测定MPP+孵育48 h时的半致死量(IC50)。然后用25mg/L、50mg/L、100mg/L等剂量的乙酸乙酯提取物预先孵... 详细信息

目的探讨色钉菇乙酸乙酯提取物对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导损伤的多巴胺能神经元的保护作用。方法以SH-SY5Y细胞系为对象,首先测定MPP+孵育48 h时的半致死量(IC50)。然后用25mg/L、50mg/L、100mg/L等剂量的乙酸乙酯提取物预先孵育4 h,随后加入1.0mmol/L(IC50值)MPP+孵育48 h。通过MTT法检测细胞活性;hoechst染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测法观察细胞凋亡情况。利用DCFHDA检测色钉菇乙酸乙酯提取物对细胞内活性氧(ROS)水平的影响。结果 1.0mmol/L MPP+孵育48 h时达到半致死剂量,MPP+的损伤浓度确定为1.0mmol/L。预先经色钉菇乙酸乙酯相(50mg/L)孵育,可显著提高SH-SY5Y细胞的活力,降低细胞凋亡率。MPP+损伤后ROS水平急剧升高,而25mg/L、50mg/L、100mg/L乙酸乙酯提取物干预后ROS水平下降。结论 50mg/L色钉菇乙酸乙酯相可显著减轻MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性损伤,具有显著的保护作用。

关键词：色钉菇乙酸乙酯相多巴胺能神经元四甲基偶氮唑盐 Hoechst33342 流式细胞术

卵巢上皮性癌细胞系OVCAR-3侧群细胞的生物学特性分析

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中华妇产科杂志 2012年第4期47卷 281-285页

作者：骆黎静赵喆曾建芳梁兵杨佳欣曹冬焱沈铿 100730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科 00730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科

目的检测和分选人卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系OVCAR-3中的侧群（sP）细胞，鉴定其是否具有肿瘤干细胞的生物学特性。方法OVCAR-3细胞经DNA染料Hoechst33342染色后，采用流式细胞仪检测和分选低染（即sP细胞）和高染[即非侧群（NSP）细... 详细信息

目的检测和分选人卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系OVCAR-3中的侧群（sP）细胞，鉴定其是否具有肿瘤干细胞的生物学特性。方法OVCAR-3细胞经DNA染料Hoechst33342染色后，采用流式细胞仪检测和分选低染（即sP细胞）和高染[即非侧群（NSP）细胞]的两群细胞。通过裸鼠体内的有限稀释成瘤试验对比sP和NSP细胞的成瘤能力[以成瘤比率（成瘤的裸鼠数／接种的裸鼠数）和成瘤时间表示]、自我更新和分化能力。实时PCR技术检测sP和NSP细胞中干性基因（Oct-4、Klf4、Nanog基因）和三磷酸腺苷结合盒（ABC）转运蛋白家族重要分子——ABCG2、ABCB1、ABCC2基因的表达。药敏试验检测sP和NSP细胞对4种化疗药物（顺铂、紫杉醇、多柔比星、米托葸醌）的敏感性。结果OVCAR．3细胞系中可检测到少量的sP细胞，其比例为（1．13±0．39）％。10。个sP细胞即可在裸鼠体内成瘤，成瘤比率为2／5，成瘤时间为52～61d；而至少10。个NSP细胞才能成瘤，成瘤比率为2／5，成瘤时间为64～98d。SP细胞的成瘤性至少为NSP细胞的100倍。10个sP细胞接种裸鼠后所形成的瘤组织中sP细胞的比例为（2．094-0．73）％，与分选前的比例相似。sP细胞中干性基因Oct-4和Klf4及ABCG2和ABCC2基因的表达量分别是NSP细胞的（1．95±0．41）、（4．26±0．63）、（3．22±0．36）和（1．76±0．26）倍，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在0．25μg／ml顺铂、0．01μmol／L紫杉醇、0．25μmol／L多柔比星和0．05μg／ml米托蒽醌分别作用下，sP和NSP细胞的相对活性分别为0．757±0．105、0．474±0．035，0．521±0．092、0．384±0．073，0．742±0．051、0．526±0．088，0．690±0．096、0．466±0．112；相同药物浓度下，sP细胞的相对活性显著高于NSP细胞（P均〈0．05）。结论卵巢癌细胞系OVCAR-3来源的sP细胞与NSP细胞相比，具有显著增强的体内成瘤能力、自我更新和分化能力、高表达干性基因和ABC转运蛋白家族基因以及多药耐药等肿瘤干细胞样细胞的生物学特性。sP表型可考虑作为分选卵巢癌干细胞样细胞的有效方法。

关键词： OVCAR-3细胞卵巢癌细胞系卵巢上皮性癌生物学特性侧群细胞 Hoechst33342 Nanog基因 ABC转运蛋白

淫羊藿苷对缺氧诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

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中国中西医结合杂志 2005年第6期25卷 525-530页

作者：吉瑞瑞李付英张雪静段重高周亚伟北京大学化学与分子工程学院北京100871 北京大学世佳研究中心

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对缺氧所致血管内皮细胞(vascularendothelialcells,VECs)损伤的影响。方法建立体外细胞缺氧模型,用MTT法观察ICA对缺氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及... 详细信息

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对缺氧所致血管内皮细胞(vascularendothelialcells,VECs)损伤的影响。方法建立体外细胞缺氧模型,用MTT法观察ICA对缺氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活力,并对细胞进行Hoechst33342荧光染色、电镜观察细胞超微结构,运用流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂情况,以观察ICA对缺氧诱导的内皮细胞凋亡的影响。结果ICA能抑制缺氧引起的血管内皮细胞的减少,降低LDH活力,并抑制缺氧条件下MDA生成,提高SOD活力;缺氧能诱导血管内皮细胞凋亡,表现为细胞核浓缩,沿核膜排列成块状,DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型“梯形条带”,流式细胞仪分析呈现典型凋亡亚二倍体峰。ICA能显著抑制缺氧诱导的内皮细胞凋亡。结论ICA具有保护缺氧诱导的血管内皮细胞损伤的作用,其作用机制与抗脂质过氧化物产生、提高SOD活力以及抗细胞凋亡有关。

关键词：血管内皮细胞损伤缺氧诱导淫羊藿苷保护作用超氧化物歧化酶(SOD) Hoechst33342 DNA琼脂糖凝胶电泳内皮细胞凋亡丙二醛(MDA) 流式细胞仪分析抗脂质过氧化物 SOD活力内皮细胞活性细胞超微结构凝胶电泳分析 cells

肝癌中少量侧群细胞的分离、纯化及在体内荷瘤能力

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第二军医大学学报 2011年第10期32卷 1126-1130页

作者：王鑫何雅琴杨文王红阳第二军医大学东方肝胆外科研究所国际合作信号转导研究中心上海200438

目的从侧群(side population,SP)表型细胞具有干细胞特性的角度出发,对肝癌细胞系中的SP细胞进行检测、分离和评价。方法利用SP细胞能将荧光染料Hoechst33342泵到细胞外的特性,结合流式细胞技术进行分离纯化。结果在肝癌细胞系PLC、Huh7... 详细信息

目的从侧群(side population,SP)表型细胞具有干细胞特性的角度出发,对肝癌细胞系中的SP细胞进行检测、分离和评价。方法利用SP细胞能将荧光染料Hoechst33342泵到细胞外的特性,结合流式细胞技术进行分离纯化。结果在肝癌细胞系PLC、Huh7、Hep3B、SMMC7721及1例临床肝癌组织中检测到SP细胞的比例依次为0.8%、0.3%、0.6%、0.3%、0.4%;未在HepG2中检测到SP细胞。NOD-SCID荷瘤实验发现SP细胞较非SP细胞具有更高的成瘤性。结论肝癌细胞系及标本组织含有少量的SP细胞,这些SP细胞比非SP细胞具有更强的成瘤性,为进一步分析SP细胞的肿瘤干细胞特性奠定了基础。

关键词：肝肿瘤肝细胞癌肿瘤干细胞侧群细胞肿瘤发生 Hoechst33342

卵巢上皮癌侧群细胞（side population,Sp）研究

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卵巢上皮癌侧群细胞（side population,Sp）研究

作者：孟泳圳广西医科大学

学位级别：硕士

第一章卵巢上皮癌侧群细胞(side population, SP)研究进展肿瘤干细胞(Cancer stem cells, CSC)被认为是肿瘤产生,耐药和复发的根本原因。SP细胞是肿瘤干细胞研究的主要方法之一,在肿瘤的发生和发展中可能起了重要作用。本章节就干细胞... 详细信息

第一章卵巢上皮癌侧群细胞(side population, SP)研究进展肿瘤干细胞(Cancer stem cells, CSC)被认为是肿瘤产生,耐药和复发的根本原因。SP细胞是肿瘤干细胞研究的主要方法之一,在肿瘤的发生和发展中可能起了重要作用。本章节就干细胞、侧群细胞以及肿瘤干细胞的起源和相互关系,卵巢癌干细胞及SP细胞的生物学特征,卵巢癌干细胞及SP细胞表面标志研究近况,SP细胞在卵巢上皮癌多药耐药发生发展中的作用及分子机理以及针对卵巢癌干细胞新的靶向治疗策略进行综述。第二章卵巢癌侧群细胞流式分选方法的建立及探讨目的：探讨分选卵巢癌细胞株SKOV3中的侧群(side population, SP)细胞的最佳染料浓度和细胞密度,建立分选SP细胞的技术路线。方法：制备SKOV3单细胞悬液,以荧光染料Hoechst33342和7-AAD染色,维拉帕米拮抗对照,选择不同浓度的(2.5、3.4、5、6mg/L) Hoechst33342孵育1×106个/mlSKOV3细胞90min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例;选取不同细胞密度的(6×105,7×105,8×105,9×105,1×106个/ml) SKOV3细胞悬液,3mg/L的Hoechst33342孵育90min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例。结果：通过Hoechst33342蓝光和红光双参数图,SP细胞位于左下角两种荧光均很弱的区域。Hoechst33342浓度不变时,SP细胞比例随细胞密度的增加而升高;SKOV3细胞密度不变时,SP细胞比例及细胞活性随Hoechst33342浓度升高而降低。卵巢癌SKOV3细胞株在细胞密度为8×105个/m1,加入终浓度为3mg/L的Hoechst33342,37℃水浴90min,为最佳染色条件,此时SP细胞比例为(1.12±0.104)%,且细胞保持良好的活性。结论：建立了分选人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞的最佳实验条件,为分选其他肿瘤组织或细胞株中的SP细胞建立了参照标准。第三章卵巢癌SKOV3细胞中SP细胞中卵巢癌干细胞相关表面标志物表达目的：检测卵巢癌SKOV3细胞系中SP和NSP细胞中卵巢癌干细胞相关标志物和基因表达差异。方法：荧光染料Hoechst33342和荧光标记抗体共染染SKOV3细胞,流式细胞仪检测SP和NSP细胞中ALDH2, CD90, CD133, CD117, ABCG2, CD44表达;荧光定量PCR检测SP和NSP细胞中NANOG, ALDH2,, CD133, ABCG2, SOX2, CD117基因在表达差异。结果：流式细胞仪检测SP和NSP细胞中CD90、CD133、CD117、CD44阳性表达差异无统计学意义。SP和NSP细胞中ALDH2和ABCG2的阳性表达分别为87.3±5.76%、29.48±4.43%、5.32±0.47%、3.01±1.69%,差异有统计学意义P<0.05。荧光定量检测结果表明SP和NSP细胞中ABCG2表达均较高且表达有差异,SP细胞中CD117表达高于NSP细胞,SP细胞中CD133表达低于NSP细胞,SP和NSP细胞中ALDH2表达没有差异。SP细胞与NSP细胞比较,SOX2高表达,OCT4低表达,NANOG在两者之间表达没有差异。结论：ABCG2是SP细胞的表面标志物,SOX2和ALDH2可能是卵巢癌干细胞潜在的表面标记。第四章卵巢癌SKOV3细胞中SP细胞的生物学特性测定目的：通过流式细胞仪分选卵巢癌细胞系SKOV3中的SP细胞和NSP细胞,并研究其生物学特性。方法：通过MTT生长曲线和平板集落形成实验比较SP及NSP细胞的增值能力和克隆形成能力,SP细胞连续分选培养检测自我更新能力,transwell法比较SP及NSP细胞侵袭及迁移能力,流式细胞仪对SP及NSP细胞进行周期分析。结果：SP与NSP细胞的生长速度在前5天没有差别,第6天和第7天,SP细胞生长速度快于NSP细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。接种SP和NSP细胞数目为800,400,200个时,集落形成率分别为8.9±1.1%、10±2.3%、12±1.5%和1.7±0.2%、1.75±0.5%、3.0±0.8%,相同接种细胞密度下SP细胞的集落形成能力大于NSP细胞(P<0.05)。SP细胞较NSP细胞有更强的侵袭和迁移能力,其中侵袭细胞数目分别为60±5和34±4,迁移细胞数目分别为91±6和74±4,差异有统计学意义(P<0.05)。SP细胞具有自我更新能力,在培养后产生NSP细胞。SP大多处于静止期(G1期比例69.94±5.39%。结论：卵巢癌细胞系SKOV3中的SP细胞具有肿瘤干细胞生物学特性,SKOV3中的SP细胞富含卵巢癌干细胞。第五章卵巢癌SKOV3细胞中SP细胞与其多药耐药的关糸初步实验研究目的：通过

关键词：肿瘤干细胞 SP细胞卵巢癌流式细胞仪 Hoechst33342 表面标志物荧光定量PCR 生物学特性化疗抵抗细胞凋亡多药耐药基因

鼻咽癌细胞株侧群细胞染色条件的优化及其表面标记物的测定

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第三军医大学学报 2010年第5期32卷 499-501页

作者：焦锋邱际华张千兵姚开泰刘求真南方医科大学肿瘤研究所广州510515

目的探讨鼻咽癌细胞株侧群细胞所需荧光染料Hoechst33342最佳的孵育时间和浓度;研究细胞密度对侧群细胞比例的影响;测定其表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达。方法荧光染料Hoechst33342孵育细胞,选择不同的时间(30、60、90、120、150、1... 详细信息

目的探讨鼻咽癌细胞株侧群细胞所需荧光染料Hoechst33342最佳的孵育时间和浓度;研究细胞密度对侧群细胞比例的影响;测定其表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达。方法荧光染料Hoechst33342孵育细胞,选择不同的时间(30、60、90、120、150、180min)及不同的浓度(3、4、5、6、7、8mg/L),用流式细胞仪检测,倒置荧光显微镜观察选择合适的孵育时间和浓度。选取不同生长密度(70%、100%)的细胞,流式细胞仪检测侧群细胞比例的变化。荧光抗体CD133和ABCG2共孵育Hoechst33342,流式细胞仪测定细胞表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达。结果Hoechst33342孵育时间为70min,侧群细胞染色效果较佳。不同的鼻咽癌细胞株,合适孵育终浓度不同,如CNE2为6mg/L,而CNE1为2mg/L。另外,侧群细胞的比例呈生长密度依赖性。CD133蛋白总含量恒定在0.1%～0.2%,侧群细胞和主群细胞表达量没有显著差异,CD133并不富集于侧群细胞中。而侧群细胞ABCG2蛋白较主群细胞优势表达,比例达80%以上。结论鼻咽癌细胞株侧群细胞最佳的荧光染料染色时间为70min,不同细胞株孵育终浓度不同。侧群细胞的比例呈密度依赖,与ABCG2密切相关。

关键词：侧群细胞主群细胞肿瘤干细胞流式细胞术 Hoechst33342 鼻咽肿瘤