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hey1基因过表达对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响

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牙体牙髓牙周病学杂志 2013年第5期23卷 291-293页

作者：许波殷霄张安生柴雪王蕾孙汉堂张亚庆第四军医大学口腔医学院陕西西安710032 解放军第37医院四川雅安625000

目的:观察hey1基因过表达对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法:用Lipofectamine 2000将hey1表达质粒转染RAW264.7细胞系;10μg/mL Blasticidin筛选稳定转染的细胞克隆,RT-PCR检测hey1基因表达水平;用RANKL诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色后进行破骨细胞计数。结果:Blasticidin筛选出的细胞株hey1 mRNA表达水平显著高于正常RAW264.7细胞;在50 ng/mL RANKL诱导条件下,hey1过表达的RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞数显著低于正常RAW264.7细胞(Phey1具有抑制小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的作用。

关键词： hey1 RAW264 7 破骨细胞 TRAP染色

hey1和Notch1在人肺癌组织中的表达及意义

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Hey1和Notch1在人肺癌组织中的表达及意义

作者：吕豆山西医科大学

学位级别：硕士

目的:检测Notch1、NICD1和hey1在各类肺癌及癌旁正常肺组织中的表达,比较不同类型肺癌中各指标的差异表达,并分析:(1)Notch1、NICD1和hey1与各型肺癌患者临床病理特征、预后的相关性;(2)各类肺癌中Notch1表达与Notch1激活、Notch1激活和... 详细信息

目的:检测Notch1、NICD1和hey1在各类肺癌及癌旁正常肺组织中的表达,比较不同类型肺癌中各指标的差异表达,并分析:(1)Notch1、NICD1和hey1与各型肺癌患者临床病理特征、预后的相关性;(2)各类肺癌中Notch1表达与Notch1激活、Notch1激活和hey1表达之间的关系;(3)非小细胞肺癌中hey1 mRNA相对表达量与蛋白表达的相关性。为肺癌的早期诊断、鉴别诊断、预后及治疗提供一定的理论依据。方法:1.制作组织芯片,采用免疫组织化学En Vision法检测118例肺鳞癌,128例肺腺癌,69例小细胞肺癌及117例癌旁正常肺组织石蜡标本中Notch1、NICD1和hey1的表达,用免疫反应积分法和H-score评分法对结果进行判读,比较Notch1、NICD1和hey1在各型肺癌及癌旁正常肺组织中的表达,并分析各指标与各型肺癌患者各临床病理特征及预后之间的关系。2.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学En Vision法检测34例非小细胞肺癌(28例肺腺癌、6例肺鳞癌)及21例癌旁正常肺组织新鲜组织中hey1 mRNA相对表达量和蛋白表达,并分析两者之间的相关性。结果:1.本实验免疫组化(IHC)结果的判读采用免疫反应积分法和H-score评分法。肺鳞癌组织中,两种方法均显示,Notch1、NICD1、hey1与癌旁正常肺组织相比明显高表达(P1阳性表达率与癌旁正常肺组织相近,两者间差异不具有统计学意义(P>0.05);H-score评分法显示,与癌旁正常肺组织相比,Notch1显著低表达(P1、hey1阳性表达与癌旁正常肺组织相比,差异不具有统计学意义(P>0.05)。小细胞肺癌中,两种方法均显示,Notch1阳性表达与癌旁正常肺组织相比,差异不具有统计学意义(P>0.05);NICD1、hey1与癌旁正常肺组织相比明显高表达(P1阳性表达与TNM分期和淋巴结转移情况呈正相关,NICD1阳性表达与各临床病理特征无关,hey1阳性表达与TNM分期呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关。肺腺癌患者Notch1,NICD1和hey1阳性表达与各临床病理特征之间均无关。非参数Mann-Whitney U检验显示,肺鳞癌患者Notch1阳性表达与TNM分期和淋巴结转移情况呈正相关;NICD1阳性表达与各临床病理特征之间均无关;hey1阳性表达与TNM分期和淋巴结转移情况呈正相关;肺腺癌患者Notch1、NICD1和hey1阳性表达与各临床病理特征之间均无关。两种检验均显示,小细胞肺癌患者Notch1、NICD1和hey1阳性表达与各临床病理特征之间均无关。***相关分析,肺鳞癌组织中,两种判读方法均显示,Notch1、NICD1和hey1两两正相关。肺腺癌组织中,免疫反应积分法显示,hey1与Notch1、NICD1正相关,Notch1与NICD1不相关,Notch1与NICD1相比高表达;H-score评分法显示,Notch1、NICD1和hey1两两正相关。小细胞肺癌组织中,免疫反应积分法显示,NICD1与Notch1、hey1正相关,Notch1与hey1不相关;H-score评分法显示,Notch1与hey1正相关,NICD1和Notch1、hey1不相关,NICD1与Notch1相比高表达。4.两种判读方法,生存分析均显示,肺鳞癌、肺腺癌和小细胞肺癌中Notch1、NICD1和hey1的表达与总生存期均无关。5.肺腺癌患者hey1 mRNA相对表达量显著低于癌旁正常肺组织,与各临床病理特征无关(P>0.05);肺鳞癌患者hey1 mRNA相对表达量与癌旁正常肺组织相比,两者间差异无统计学意义(P>0.05),因肺鳞癌例数太少,其hey1 mRNA相对表达量与患者各临床病理特征之间的关系无统计学价值。6.肺鳞癌和肺腺癌患者hey1 mRNA相对表达量与蛋白表达不一致。结论:1.采用免疫积分法与H-score评分法分别对免疫组化结果进行判读,可能会得到不同的结果,但在总体趋势上是一致的。H-score评分法主观误差小,更科学严谨。***1、NICD1和hey1在不同类型肺癌中表达情况存在差异,hey1是肺鳞癌和小细胞肺癌发生的重要参与因子,可能促进肺鳞癌和小细胞肺癌的发生。***1和hey1可以作为判断肺鳞癌病理分级和恶性程度的辅助指标,指导临床治疗方案的

关键词：肺癌 Notch1 NICD1 hey1 NSCLC

hey1基因过表达对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响

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Hey1基因过表达对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响

作者：许波第四军医大学

学位级别：硕士

牙体吸收是由破骨细胞导致的牙体硬组织丧失。根管治疗是目前治疗牙体吸收的有效方法，但有时也难以达到彻底终止的疗效。牙体吸收如未被终止，则进一步发展，造成牙体硬组织全层的穿通，最终导致必须拔除患牙的后果。与骨吸收类似，破... 详细信息

牙体吸收是由破骨细胞导致的牙体硬组织丧失。根管治疗是目前治疗牙体吸收的有效方法，但有时也难以达到彻底终止的疗效。牙体吸收如未被终止，则进一步发展，造成牙体硬组织全层的穿通，最终导致必须拔除患牙的后果。与骨吸收类似，破骨细胞作为唯一能在体内造成硬组织吸收的细胞，在牙体吸收过程中也发挥着主要作用。破骨细胞属于终末细胞，是由来自脾脏或骨髓的单核-巨噬细胞系的单核细胞前体融合而成的多核巨细胞。因此，控制单核细胞分化、融合形成破骨细胞从而有效控制破骨细胞的数量，就有可能减缓甚至终止牙体吸收的发生、发展。Notch是一种经典信号途径，对破骨细胞的发生发挥着重要的调控作用。hey1是Notch信号途径的重要效应分子，但其在单核-巨噬细胞向破骨细胞分化过程中所起的具体作用尚不完全清楚。本实验通过建立hey1基因过表达的RAW264.7细胞系，并观察hey1基因在单核-巨噬细胞向破骨细胞分化过程中所起的作用，为进一步探索经由对hey1的调控达到控制牙体吸收的发生发展的可能性打下基础。实验分为两个部分： 1. hey1基因过表达RAW264.7细胞系的建立目的：建立hey1基因过表达RAW264.7细胞系，并对该细胞系进行鉴定。方法：对质粒进行扩增和提取，用Lipofectamine2000将hey1表达质粒转染RAW264.7细胞系;预实验确定Blasticidin的筛选浓度，10μg／ml Blasticidin筛选稳定转染的细胞克隆，RT-PCR及琼脂糖凝胶电泳实验检测hey1基因表达水平。结果：经过长期筛选和多次传代后，细胞仍能在含有高浓度的blasticidin的培养液中生长良好，繁殖迅速;Blasticidin筛选出的细胞株hey1mRNA表达水平显著高于正常RAW264.7细胞。结论：hey1基因过表达RAW264.7细胞系建立成功。 2. hey1基因过表达对RAW264.7细胞向破骨细胞的分化能力的影响目的：观察hey1基因过表达对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法：用50ng/ml的RANKL诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化，实时定量PCR检测破骨细胞标志物TRAP, Cathepsin K和RANK的表达变化;用50ng/ml的RANKL诱导RAW264.7细胞5天后进行TRAP染色，并对正常RAW264.7细胞和hey1过表达RAW264.7细胞中的破骨细胞分别进行计数，结果用SPSS软件进行统计学分析。结果：在RANKL诱导下，正常RAW264.7细胞的TRAP、Cathepsin K表达量明显高于hey1过表达的RAW264.7细胞，而Rank基因的表达量两者没有明显差异;在50ng/ml RANKL诱导条件下，hey1过表达RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞数显著低于正常RAW264.7细胞（P＜0.05）。结论：hey1具有抑制小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的作用。

关键词： hey1 RAW264.7 破骨细胞 TRAP染色

hey1上调GRB2激活PI3K/AKT信号途径促进黑色素瘤细胞的迀移和侵袭

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Hey1上调GRB2激活PI3K/AKT信号途径促进黑色素瘤细胞的迀移和侵袭

作者：蒲以欢重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:含有YRPW基序1的Hes相关家族b HLH转录因子（hey1）被认为是Notch信号通路的靶基因,有越来越多的研究证据都在表明Notch信号通路在恶性黑色素瘤的多种细胞生物学过程起重要的调节作用。hey1作为Notch信号的靶基因,并是广泛的转录因... 详细信息

目的:含有YRPW基序1的Hes相关家族b HLH转录因子（hey1）被认为是Notch信号通路的靶基因,有越来越多的研究证据都在表明Notch信号通路在恶性黑色素瘤的多种细胞生物学过程起重要的调节作用。hey1作为Notch信号的靶基因,并是广泛的转录因子,在多种肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、骨肉瘤等的发生发展中都起着重要作用,但其在黑色素瘤细胞中的作用及其机制却被忽视。检测hey1对黑素瘤细胞的生物学功能影响及探讨其可能的潜在作用机制是本研究的主要目的所在。方法:我们使用生物信息学工具、免疫组织化学和western blot分析方法来评估黑色素瘤中hey1的表达情况;细胞体外和裸鼠体内实验用于确定hey1对黑色素瘤恶性行为的影响;高通量测序方法用于检测干扰hey1后的黑素瘤细胞差异表达基因,KEGG通路富集被用于分析差异基因参与的信号通路;免疫荧光法用于检测hey1和GRB2在黑素瘤中的共表达情况;Western blot被用于检测干扰或过表达hey1后,上皮-间叶转化过程（EMT）中的相关蛋白、基质金属蛋白酶（MMPs）以及GRB2/PI3K/AKT信号途径中关键信号分子蛋白表达水平发生了怎样的改变。结果:hey1在黑素瘤组织以及黑素瘤细胞系中的表达水平均明显上调。在细胞实验中,干扰hey1显著抑制了黑素瘤细胞的体外迁移和侵袭过程,同时涉及上皮-间叶转化过程的E-cadherin表达量增高,N-cadherin、Vimentin、Snail表达量降低,另外基质金属蛋白酶MMP2、MMP7和MMP9表达量也同时降低,而hey1过表达组结果呈现与hey1干扰组相反的趋势。随后,在体外异种移植动物模型中,与对照组相比,hey1干扰组的原位肿瘤体积明显减小,未查见肺转移瘤;而hey1过表达组原位肿瘤体积明显增大,肺转移瘤数量多体积更大。最后,高通量测序鉴定出干扰hey1的A375细胞中总共232个差异编码基因,KEGG富集结果提示GRB2/PI3K/AKT有显著差异,我们通过Western blot进行了验证,在两组结果中,AKT、PI3K蛋白水平变化不显著,但干扰组中GRB2、p-PI3K、p-AKT（ser308）、P-P21蛋白水平显著降低,而过表达组中GRB2、p-PI3K、p-AKT（ser308）、P-P21蛋白水平显著增高。结论:hey1可以促进黑色素瘤的侵袭和转移过程,但其作用可能并不局限于我们当前的研究结果。此外,hey1被认为是NOTCH信号的效应因子,但本研究表明hey1可以通过上调GRB2激活PI3K/AKT信号途径,使其中的关键信号分子的蛋白表达水平。由此,我们推测hey1有可能在Notch信号途径与其他信号途径的相互串扰过程中起着重要的介导作用。

关键词：黑素瘤 hey1 GRB2 PI3K/AKT信号途径迁移和侵袭

骨髓间充质干细胞hey1基因表达水平荧光定量RT-PCR方法的建立

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重庆医科大学学报 2010年第6期35卷 897-899页

作者：刘强翁亚光唐敏罗敏重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的:建立骨髓间充质干细胞中Notch信号通路靶基因hey1表达水平的荧光定量RT-PCR方法。方法:培养骨髓间充质干细胞(C_2C_(12)),提取总RNA,验证内参基因β-actin和目的基因hey1的扩增效率,优化PCR条件,分析扩增曲线、融解曲线,凝胶电泳... 详细信息

目的:建立骨髓间充质干细胞中Notch信号通路靶基因hey1表达水平的荧光定量RT-PCR方法。方法:培养骨髓间充质干细胞(C_2C_(12)),提取总RNA,验证内参基因β-actin和目的基因hey1的扩增效率,优化PCR条件,分析扩增曲线、融解曲线,凝胶电泳验证定量PCR产物。结果:内参基因β-actin和目的基因hey1扩增效率一致(扩增曲线斜率差1),提示可以使用比较Ct法对hey1进行相对定量分析;扩增曲线、融解曲线及凝胶电泳结果提示PCR产物特异性好。结论:本研究所建立的用于hey1基因表达分析的定量RT-PCR检测方法,准确可靠,可用于Bmp9和Notch信号通路的研究。

关键词：骨髓间充质干细胞 hey1 荧光定量RT-PCR

抑制HES1、hey1对涎腺腺样囊性癌细胞功能的影响

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抑制HES1、HEY1对涎腺腺样囊性癌细胞功能的影响

作者：黄晓宇福建医科大学

学位级别：硕士

涎腺腺样囊性癌(SACC)是好发于腮腺、颌下腺及小涎腺的口腔颌面部恶性肿瘤之一,具有嗜神经侵袭以及远处转移两大生物学特性,其临床生物学特性表现为感觉和(或)运动神经功能障碍,易通过血行转移至肺,术后易复发,预后较差。本课题组通过... 详细信息

涎腺腺样囊性癌(SACC)是好发于腮腺、颌下腺及小涎腺的口腔颌面部恶性肿瘤之一,具有嗜神经侵袭以及远处转移两大生物学特性,其临床生物学特性表现为感觉和(或)运动神经功能障碍,易通过血行转移至肺,术后易复发,预后较差。本课题组通过前期大量的实验研究,发现Notch信号通路与肿瘤的发生发展密切相关,通路中的受体基因Notch1能够作为促癌基因促进涎腺腺样囊性癌的增殖、侵袭及迁移。国内外众多研究表明,HES1、hey1基因是Notch1信号通路的下游基因,二者可能在多种肿瘤的发展演化中发挥着癌基因的作用。本研究在课题组前期研究的基础上,筛选出Notch1信号通路的下游基因HES1、hey1,研究其与涎腺腺样囊性癌细胞增殖、侵袭、迁移的关系并对可能的机制进行探讨。本研究按照基因的筛选和细胞功能学实验分为两部分,分述如下:一、在SACC细胞中利用Real-time PCR技术筛选出与Notch1变化相关的下游基因,并在组织水平验证其表达。目的:筛选与Notch1表达变化相关的下游靶基因。方法:根据文献选取的常见的Notch1的下游基因设计引物。用Notch1的si RNA转染SACC-83细胞,通过Real-time PCR技术检测Notch1下游基因的表达量;构建Notch1基因重组腺病毒表达载体,感染SACC-83细胞,应用Real-time PCR技术研究其下游基因的表达变化。收集涎腺腺样囊性癌组织和癌旁组织的石蜡标本,利用筛选出的下游基因的相应抗体进行免疫组化,经2名病理科医师阅片评分后统计结果。结果:Real-time PCR检测结果显示Notch1表达下降后,HES1、hey1的表达也相应降低;而Notch1表达升高后,HES1、hey1的表达也随之上升。涎腺腺样囊性癌癌组织标本中HES1、hey1的表达高于癌旁组织。结论:HES1、hey1的表达变化与Notch1的表达变化呈正相关关系。二、利用si RNA干扰技术探讨HES1、hey1对SACC细胞功能的影响。目的:研究HES1、hey1在SACC细胞增殖、侵袭以及迁移中的作用。方法:设计合成HES1、hey1的si RNA,转染SACC-83细胞,HES1、hey1的表达量的变化通过Real-time PCR技术进行验证,筛选出两条干扰有效的si RNA,转染SACC-83细胞使其HES1、hey1的表达显著下调后,采用CCK8法、平板克隆形成实验研究细胞增殖能力的变化;采用细胞划痕愈合法研究细胞迁移能力的变化;采用侵袭小室法研究细胞侵袭能力的变化;采用流式细胞术研究细胞周期和凋亡的变化。结果:Real-time PCR结果显示HES1、hey1表达下降;CCK8和平板克隆形成实验证实HES1、hey1转染后,细胞增殖能力弱于阴性对照组;侵袭小室、划痕愈合实验结果表明,HES1、hey1表达下降后,SACC-83细胞的侵袭、迁移能力也随之下降;流式细胞术的结果发现转染HES1、hey1后细胞的早期和晚期凋亡率升高,而细胞周期和对照组相比没有差异。结论:抑制HES1、hey1基因的表达后SACC细胞的增殖、侵袭和迁移能力均下降,而细胞凋亡率升高。

关键词：涎腺腺样囊性癌 HES1 hey1 si RNA

Notch信号下游靶点hey1在BMP9诱导下C3H10T1/2细胞的成骨分化及增殖中的作用

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Notch信号下游靶点Hey1在BMP9诱导下C3H10T1/2细胞的成骨分化及增...

作者：王淼重庆医科大学

学位级别：硕士

目的通过体外培养小鼠成纤维细胞C3H10T1/2模拟干细胞,采用慢病毒干预使C3H10T1/2细胞中hey1基因分别过表达和抑制表达,然后使用含骨形态发生蛋白9(BMP9)的条件培养基模拟诱导成骨分化,探讨Notch信号通路重要靶点hey1表达水平改变对BMP-... 详细信息

目的通过体外培养小鼠成纤维细胞C3H10T1/2模拟干细胞,采用慢病毒干预使C3H10T1/2细胞中hey1基因分别过表达和抑制表达,然后使用含骨形态发生蛋白9(BMP9)的条件培养基模拟诱导成骨分化,探讨Notch信号通路重要靶点hey1表达水平改变对BMP-9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化与增殖的影响。方法构建过表达hey1慢病毒LV-hey1、抑制hey1表达慢病毒LV-sh hey1,分别感染C3H10T1/2细胞,以LV-Blank(空质粒)感染C3H10T1/2细胞作为对照组;使用荧光显微镜对慢病毒感染的效果、实时荧光定量PCR和Western blot对hey1表达水平进行验证,筛选出不同hey1表达水平的稳定C3H10T1/2细胞系。对已改变hey1表达水平的C3H10T1/2细胞用含BMP-9的条件培养基诱导,分别为以下三组BMP-9+C3H10T1/2组、BMP-9+C3H10T1/2-hey1组、BMP-9+C3H10T1/2-sh hey1组,然后以正常培养基培养的细胞作为对照(C3H10T1/2组、C3H10T1/2-Blank组)。培养后48 h后,实时荧光定量PCR及Western blot测定成骨分化相关转录因子Runx2、骨桥蛋白、骨钙素m RNA及蛋白表达水平;4、5、6、7 d行MTT检测及4、5、10 d行流式细胞仪测定细胞增殖能力;4、7 d时ELISA测定细胞ALP表达水平并行染色观察。结果不同hey1表达水平的C3H10T1/2稳定细胞系成功建立。成骨方面,各时间点与BMP-9+C3H10T1/2组比较,BMP-9诱导下hey1过表达的BMP-9+C3H10T1/2-hey1组细胞Runx2、骨桥蛋白osteopontin、骨钙素osteocalcin m RNA及蛋白表达水平、成骨分化标志物ALP含量均显著增加(Phey1表达的BMP-9+C3H10T1/2-sh hey1组细胞以上指标均显著降低(P10T1/2组比较,BMP-9+C3H10T1/2-hey1组MTT检测吸光度(A)值及细胞G2+S期百分比均提高(Phey1表达BMP-9+C3H10T1/2-sh hey1组以上指标均降低(Phey1表达是BMP-9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化过程中的重要环节,过表达hey1呈现成骨分化协同效应,同时促进细胞早期增殖,抑制hey1表达对细胞的成骨分化与增殖效应均呈现很强的拮抗效应。

关键词： hey1 BMP-9 C3H10T1/2细胞成骨分化细胞增殖

前列腺癌细胞中hey1基因转录调控分子机制的初步研究

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前列腺癌细胞中HEY1基因转录调控分子机制的初步研究

作者：韩雪芳东北师范大学

学位级别：硕士

hey1是在内皮细胞血管形成中发挥重要作用的转录抑制子,是hey基因家族成员,该家族成员参与心脏瓣膜形成,心肌及大血管发育,还可通过介导Notch信号系统影响心脏发育。hey1是一个Notch信号通路的直接靶基因,而Notch信号通路在肿瘤发生发... 详细信息

hey1是在内皮细胞血管形成中发挥重要作用的转录抑制子,是hey基因家族成员,该家族成员参与心脏瓣膜形成,心肌及大血管发育,还可通过介导Notch信号系统影响心脏发育。hey1是一个Notch信号通路的直接靶基因,而Notch信号通路在肿瘤发生发展中具有重要的意义。Notch1信号激活导致前列腺癌细胞的生长抑制。但是,hey1的机制以及其对前列腺癌细胞影响的研究还未见报道。我们的实验发现,hey1与Polycomb group(PcG)蛋白在两种恶性程度不同的前列腺癌细胞系LNCaP和DU145中表达水平明显呈现负相关,并且将PcG蛋白成员EZH2,SUZ12,BMI1干涉后提高了细胞内源hey1基因mRNA和蛋白表达水平,证实PcG家族蛋白尤其是SUZ12能够调控hey1基因的转录;RT-PCR,Real time PCR和Western blot结果显示,抗癌药物DNA甲基化酶抑制剂5-aza-dc能够显著提高hey1基因的mRNA和蛋白表达水平,这也揭示了DNA甲基化可能参与hey1基因的调控;我们在DU145细胞中过表达hey1,结果显示,细胞生长停滞在G1期,说明hey1与细胞周期密切相关。本项研究初步探讨了hey1基因转录调控的机制,为深入研究hey1基因在前列腺癌发生发展中的作用奠定了基础。

关键词： hey1 5-aza-dc Polycomb 甲基化细胞周期前列腺癌

普萘洛尔对HUVECs中Jagged1和hey1表达及作用的初步研究

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普萘洛尔对HUVECs中Jagged1和Hey1表达及作用的初步研究

作者：赵学凯厦门大学

学位级别：硕士

背景:婴幼儿血管瘤是主要发生于皮肤及软组织的良性肿瘤,婴幼儿时期最为常见,发病率约3-10%,且有增加趋势。其发病机制认为与内皮细胞增殖异常及血管生成调节异常有关,但具体涉及到分子机制方面仍不十分明确。研究发现人体内多条信号通... 详细信息

背景:婴幼儿血管瘤是主要发生于皮肤及软组织的良性肿瘤,婴幼儿时期最为常见,发病率约3-10%,且有增加趋势。其发病机制认为与内皮细胞增殖异常及血管生成调节异常有关,但具体涉及到分子机制方面仍不十分明确。研究发现人体内多条信号通路参与了婴幼儿血管瘤的发病和消退过程,包括VEGF、Notch、mTOR信号通路等。大部分患儿瘤体在7岁前可不同程度自行消退,病程中可能出现溃疡、出血等并发症,影响患儿发育,消退后可能残留皮肤损害,给患儿来带身心伤害,目前一致认为婴幼儿血管瘤应尽早干预。国外学者无意中发现普萘洛尔对血管瘤有治疗作用,随后开展的多项研究证实了普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤疗效好且不良反应小,普萘洛尔现已成为治疗婴幼儿血管瘤的首选药物。但是普萘洛尔是如何发挥治疗作用,如何影响血管内皮细胞增殖和调节血管生成,仍缺乏明确的证据。研究发现Notch通路中Notch1、Jagged1、hey1等分子表达于婴幼儿血管瘤内皮细胞,提示Notch通路相关分子在影响血管内皮细胞增殖中发挥重要作用。普萘洛尔是否是通过影响Notch信号通路发挥治疗作用有待进一步研究。目的:通过观察普萘洛尔处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生物学行为变化,检测药物干预前后细胞Notch1、jagged1、hey1、D114分子表达变化情况,初步探讨普萘洛尔在治疗婴幼儿血管瘤方面的作用机制。方法:体外培养的HUVECs,以含一定浓度梯度的普萘洛尔的培养液干预,用CCK-8检测细胞增殖变化,用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,用qRT-PCR及Western Blot检测Notch1、Jagged1、hey1、Dll4基因及蛋白的表达变化。结果:CCK-8实验中,相同普萘洛尔浓度,细胞的增殖力随作用时间延长减弱(P1、Jagged1、hey1表达水平上调(P114表达水平下调(P1、Jagged1、hey1表达水平上调,D114表达水平下调,可以推测普萘洛尔对血管瘤的治疗作用可能与增加Notch信号配体Jagged1表达激活Notch通路诱导下游靶基因hey1表达有关。

关键词：血管瘤普萘洛尔 Notch Jagged1 hey1