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hepg2.2.15细胞中siRNA与拉米夫定抗乙型肝炎病毒复制作用的比较

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中国临床药理学与治疗学 2010年第7期15卷 727-731页

作者：李桂秋陈淑兰崔兰英赵金英罗文涛路娟哈尔滨医科大学附属第一医院微生物科

目的:对hepg2.2.15细胞中siRNA与拉米夫定的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用进行比较。方法:构建HBV siRNA的表达载体并转染入hepg2.2.15细胞。分别于48、72、96h收获细胞,与拉米夫定治疗组比较抗HBV作用。用ELISA方法检测HBsAg浓度;HBV DNA水... 详细信息

目的:对hepg2.2.15细胞中siRNA与拉米夫定的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用进行比较。方法:构建HBV siRNA的表达载体并转染入hepg2.2.15细胞。分别于48、72、96h收获细胞,与拉米夫定治疗组比较抗HBV作用。用ELISA方法检测HBsAg浓度;HBV DNA水平用实时定量PCR测定;用逆转录PCR检测HBV mRNA水平。结果:拉米夫定能明显降低HBV DNA水平,对HBsAg和mRNA抑制率较低;siRNA能全面降低HBsAg、HBV DNA和mRNA水平(Phepg2.2.15细胞中,siRNA与拉米夫定的抗病毒作用完全不同,siRNA抗HBV作用明显优于拉米夫定。

关键词：乙型肝炎病毒 siRNA 拉米夫定 hepg2.2.15细胞

锤头状核酶在hepg2.2.15细胞内的抗HBV特性

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生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 204-208页

作者：冯英孔玉英汪垣祁国荣中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

乙型肝炎病毒 (HBV)C基因区的 3′端序列在HBV各亚型中是高度保守的 ,它编码的多肽链都富含精氨酸 ,同时与前基因组RNA的包装和病毒DNA的复制有关。因此 ,HBV中C基因的 3′端保守区是核酶介导的抗病毒研究的理想靶位点。针对上述位点设... 详细信息

乙型肝炎病毒 (HBV)C基因区的 3′端序列在HBV各亚型中是高度保守的 ,它编码的多肽链都富含精氨酸 ,同时与前基因组RNA的包装和病毒DNA的复制有关。因此 ,HBV中C基因的 3′端保守区是核酶介导的抗病毒研究的理想靶位点。针对上述位点设计了锤头状核酶RzC ,同时作为对照 ,设计了相应的突变型核酶dRzC。hepg2 .2 .15细胞系是由头尾相接的HBVayw亚型基因组转染肝癌细胞系hepg2而建立的一株能稳定分泌HBV各种抗原和完整病毒颗粒的细胞系。因而用hepg2 .2 .15细胞进行核酶的抗病毒研究更接近于疾病的治疗过程。为此 ,把体外转录的核酶RzC和dRzC以及核酶表达载体pCRzC和 pCdRzC直接转染hepg2 .2 .15细胞。初步结果表明 ,体外转录的核酶RzC对HBV复制的抑制很弱 ,这可能是由于核酶在细胞内快速被RNA酶降解造成的 ;而通过内源性传递产生的核酶RzC能够明显地抑制HBV的复制。结果说明 ,锤头状核酶RzC在hepg2 .2 .15细胞内显示抗病毒感染的能力 ,有可能作为HBV基因治疗的一种手段

关键词：锤头状核酶 HBV hepg2.2.15细胞

天花粉提取物对hepg2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响

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中南大学学报（医学版） 2012年第1期37卷 38-41页

作者：陈佳许昭发欧阳红涛彭敏源吴婷刘静刘艳平言惠文中南大学生物科学与技术学院长沙410013 湖南省第二人民医院长沙410007 中南大学湘雅医院血液科长沙410008

目的:探讨天花粉水提取物、醇提取物对hepg2.2.15细胞的增殖及培养细胞上清中HBsAg与HBeAg表达的影响。方法:用MTT方法检测hepg2.2.15细胞的存活率,以酶联免疫法(ELISA)检测hepg2.2.15细胞上清液HBsAg和HBeAg的表达量。结果:天花粉水提... 详细信息

目的:探讨天花粉水提取物、醇提取物对hepg2.2.15细胞的增殖及培养细胞上清中HBsAg与HBeAg表达的影响。方法:用MTT方法检测hepg2.2.15细胞的存活率,以酶联免疫法(ELISA)检测hepg2.2.15细胞上清液HBsAg和HBeAg的表达量。结果:天花粉水提取物和醇提取物处理hepg2.2.15细胞后HBsAg和HBeAg的表达均呈时间依赖性和浓度依赖性抑制,但天花粉水提物的治疗指数明显优于醇提物。结论:天花粉水提物较醇提物有更好的抗HBV活性。

关键词：天花粉 hepg2.2.15细胞 HBsAg HBeAg

设计特异性识别HBV核心启动子的锌指蛋白以抑制hepg2.2.15细胞中HBV的转录

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第2期28卷 160-162页

作者：陈聪李鑫郭宁张华吴忠均重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆400016

目的:设计特异性结合乙肝病毒核心启动子(HBVCp)的锌指蛋白(ZFP),观察ZFP在体外对HBV转录的抑制情况。方法:利用Zinc finger tools设计特异性结合HBV Cp的ZFP。将ZFP核苷酸序列人工合成后克隆至pEGFP-N1和pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒p... 详细信息

目的:设计特异性结合乙肝病毒核心启动子(HBVCp)的锌指蛋白(ZFP),观察ZFP在体外对HBV转录的抑制情况。方法:利用Zinc finger tools设计特异性结合HBV Cp的ZFP。将ZFP核苷酸序列人工合成后克隆至pEGFP-N1和pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒pEGFP-N1/ZFP-Flag和pcDNA3.1(+)/ZFP。通过倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western blot鉴定pEGFP-N1/ZFP-Flag在COS-7中的表达情况;将pcDNA3.1(+)/ZFP转入hepg2.2.15细胞后24 h,采用ELISA和FQ-PCR检测上清液中HBeAg和HBV DNA含量,RT-PCR检测细胞内HBV mRNA水平。结果:ZFP在COS-7细胞中能正常表达。与空质粒组相比,ZFP组细胞培养上清液中HBV DNA拷贝量和HBeAg含量明显降低(P细胞内HBV mRNA也显著减少。结论:人工设计的ZFP可以在真核细胞内正常表达,并能有效抑制HBV的转录。

关键词：乙肝病毒核心启动子锌指蛋白 hepg2.2.15细胞

灵猫方抑制饥饿诱导hepg2.2.15细胞自噬研究

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中国中西医结合杂志 2012年第4期32卷 499-503页

作者：朱晓骏孙学华刘顺庆李曼商斌仪杨婉凤高月求上海中医药大学附属曙光医院肝病科国家中管局细胞免疫实验室上海市中医临床重点实验室上海201203

目的研究灵猫方对饥饿诱导hepg2.2.15细胞自噬的作用。方法选取15只SD大鼠制备灵猫方药物血清,设立厄尔平衡盐缓冲液(Earle's balanced salt solution,EBSS)组、EBSS+空白血清组、EBSS+5倍药物血清组、EBSS+10倍药物血清组及DMEM组,每组... 详细信息

目的研究灵猫方对饥饿诱导hepg2.2.15细胞自噬的作用。方法选取15只SD大鼠制备灵猫方药物血清,设立厄尔平衡盐缓冲液(Earle's balanced salt solution,EBSS)组、EBSS+空白血清组、EBSS+5倍药物血清组、EBSS+10倍药物血清组及DMEM组,每组3个样本。培养hepg2.2.15细胞1、2、4及6h,构建pEGFP-N1-LC3B表达载体,转染hepg2.2.15细胞,在荧光显微镜下观察细胞浆中GFP-LC3B分布表达变化,计算点状样GFP-LC3B的细胞数与GFP-LC3B转染hepg2.2.15细胞数比值。透射电镜观察各组hepg2.2.15细胞浆内自噬体。Western Blot检测各组hepg2.2.15细胞LC3BⅡ/Ⅰ比值(microtubule-associ-ated protein 1 light chain 3 betaⅡ/Ⅰ)。结果培养2h时,与EBSS+空白血清组比较,EBSS+5倍药物血清、EBSS+10倍药物血清明显抑制GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变(Phepg2.2.15的自噬。

关键词：灵猫方 hepg2.2.15细胞自噬

hepg2.2.15细胞对同时包载丁香苦苷和羟基酪醇纳米粒的摄取机制研究

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中国中医药信息杂志 2018年第3期25卷 81-85页

作者：管庆霞李云行吕邵娃孙佳琳张亮封文静王利萍李永吉黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040

目的考察hepg2.2.15细胞对同时包载丁香苦苷和羟基酪醇纳米粒(nanoparticles co-loaded with syringopicroside and hydroxytyrosol,SH-NPs)的摄取机制。方法采用沉淀法制备SH-NPs,以异硫氰酸荧光素为荧光标记物,采用流式细胞仪研究hepg2.2.15细胞对SH-NPs的摄取机制。结果秋水仙素为抑制剂,孵育时间在0.5~24 h范围内,阳性细胞百分数由1.9%增加到56.4%;药物浓度为125、250、500μg/m L时,阳性细胞百分数分别为4.9%、3.4%、3.9%。氯喹为抑制剂,孵育时间在0.5~24 h范围内,阳性细胞百分数由7.4%增加到55.4%;药物浓度为125、250、500μg/m L时,阳性细胞百分数分别为19.5%、22.5%、27.6%。结论秋水仙素与氯喹对hepg2.2.15细胞摄取有抑制作用,且hepg2.2.15细胞对SH-NPs的摄取与药物浓度、孵育时间呈正相关,推断hepg2.2.15细胞对SH-NPs细胞的摄取机制为非特异性吸附内吞。

关键词：丁香苦苷羟基酪醇聚乙二醇-聚乳酸乙醇酸共聚物纳米粒 hepg2.2.15细胞摄取机制

人miR-155真核过表达载体的构建及其对hepg2.2.15细胞中HBeAg的抑制效应

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世界华人消化杂志 2014年第28期22卷 4217-4222页

作者：蔡启茵任广立张卫云马恒灏中国人民解放军广州军区广州总医院儿科广东省广州市510010 广州中医药大学研究生院广东省广州市510405 中国人民解放军广州军区广州总医院检验科广东省广州市510010

目的:构建人microRNA-155(miR-155)真核过表达载体,并探讨其对hepg2.2.15细胞中乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)的抑制作用,为研究其基因调控机制对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制及免疫状态影响提供实验基础.方... 详细信息

目的:构建人microRNA-155(miR-155)真核过表达载体,并探讨其对hepg2.2.15细胞中乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)的抑制作用,为研究其基因调控机制对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制及免疫状态影响提供实验基础.方法:以人肝癌细胞系hepg2.2.15细胞基因组为模板,通过PCR扩增人miR-155前体序列,酶切后连接到pmR-mCherry质粒,构建pmiR-155真核过表达载体,然后进行酶切和测序鉴定.利用脂质体将pmiR-155转染hepg2.2.15细胞,同时设空质粒(pmR-mCherry质粒)转染组和空白对照组.转染24 h后荧光显微镜下观察细胞内Cherry表达,RT-PCR检测各组细胞内miR-155表达量以及ELISA法检测HBeAg分泌量的改变.结果:经测序证实,成功构建人pmiR-155真核过表达载体.转染细胞后进行应荧光观察,载体中Cherry有较好的表达活性.RT-PCR表明,与对照组细胞相比,pmiR-155组细胞内所表达的miR-155明显提高.ELISA结果示pmiR-155组细胞所分泌的HBeAg量显著低于空载组和空白组.结论:成功构建了人miR-155真核过表达载体;转染hepg2.2.15细胞后表达稳定;蛋白水平检测表明其可以抑制hepg2.2.15细胞中HBeAg的表达.

关键词：微小RNA miR-155 真核过表达载体 hepg2.2.15细胞

反义锁核酸与拉米夫定在hepg2.2.15细胞中抗HBV作用的比较

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世界华人消化杂志 2011年第28期19卷 2953-2957页

作者：朱晓莹王燕菲右江民族医学院生物化学与分子生物学教研室广西壮族自治区百色市533000 广州医学院生物化学与分子生物学教研室广东省广州市510182

目的:应用反义锁核酸与拉米夫定作用hepg2.2.15细胞,对他们抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)效果进行比较.方法:设计针对HBV翻译起始区S基因mRNA的反义寡核苷酸,并进行锁核酸修饰,以阳离子脂质体介导反义锁核酸转染hepg2.2.15细胞... 详细信息

目的:应用反义锁核酸与拉米夫定作用hepg2.2.15细胞,对他们抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)效果进行比较.方法:设计针对HBV翻译起始区S基因mRNA的反义寡核苷酸,并进行锁核酸修饰,以阳离子脂质体介导反义锁核酸转染hepg2.2.15细胞;拉米夫定组直接作用hepg2.2.15细胞;分别于用药后第2、4、6、8、10天收集细胞培养上清液.用ELISA法和FQ-PCR法检测收集上清液HBsAg、HBeAg和HBVDNA的含量.MTT法分别检测反义锁核酸与拉米夫定对细胞存活率的影响.结果:拉米夫定对HBVDNA具有明显抑制作用,最高可达46.52%,但对HBsAg、HBeAg影响较小;反义锁核酸对HBsAg、HBeAg及HBVDNA均有较强抑制作用,对HBsAg、HBeAg和HBVDNA的最高抑制率分别达67.69%、59.71%和62.96%(P细胞代谢均无明显影响.结论:反义锁核酸抗HBV作用机制与拉米夫定不同,反义锁核酸抗HBV作用明显优于拉米夫定.

关键词：乙型肝炎病毒反义锁核酸拉米夫定 hepg2.2.15细胞抗病毒

hepg2.2.15细胞培养上清液中HBVDNA及其抗原的检测

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中国医学文摘（检验与临床） 2006年第1期20卷 5-6页

作者：管世鹤卢银平刘华平安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室

乙型肝炎病毒（HBV）是一种引起急性和慢性坏死炎症性肝病及肝细胞癌的DNA病毒。HBV具有特异嗜肝性、非细胞损伤与裂解、易发展为慢性等特征。hepg2.2.15细胞是能够表达HBV抗原和分泌完整HBV颗粒的肝胚瘤细胞系，也是目前用来研究HBV... 详细信息

乙型肝炎病毒（HBV）是一种引起急性和慢性坏死炎症性肝病及肝细胞癌的DNA病毒。HBV具有特异嗜肝性、非细胞损伤与裂解、易发展为慢性等特征。hepg2.2.15细胞是能够表达HBV抗原和分泌完整HBV颗粒的肝胚瘤细胞系，也是目前用来研究HBV复制．肝细胞对干扰素（IFN）应答最为合适的细胞模型系统。

关键词： hepg2.2.15细胞细胞培养上清液 HBVDNA HBV抗原乙型肝炎病毒(HBV) 检测肝细胞癌 DNA病毒炎症性肝病 HBV颗粒