HepG2.2.15细胞内乙型肝炎病毒cccDNA的定量检测

作     者：赵克开 缪晓辉 徐文胜 ZHAO Ke-kai;MIAO Xiao-hui;XU Wen-sheng

作者机构：第二军医大学附属长征医院感染科上海200003 

出 版 物：《中华传染病杂志》 (Chinese Journal of Infectious Diseases)

年 卷 期：2005年第23卷第1期

页      面：6-9页

核心收录：

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(300709580) 

主　　题：HepG2.2.15细胞 定量检测 DNA 乙型肝炎病毒 细胞内 轻度 慢性乙型肝炎 方法 目的 阴性 

摘      要：目的 建立一种细胞内乙型肝炎病毒cccDNA的定量检测方法。方法 消化收集处于对数生长期的HepG2.2.15细胞,取1×106 个细胞用小量质粒抽提试剂盒抽提细胞内的cccDNA,抽提产物用绿豆核酸酶酶切纯化,所得酶切产物用特异的引物和探针进行选择性荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测。用对数生长期前的细胞培养上清液、4 份HBV DNA阳性和2 份HBV DNA阴性的慢性乙型肝炎(轻度)患者血清验证荧光定量PCR法的特异性,并用不同浓度的质粒标准品检测该方法的敏感性。结果 证实HepG2.2.15细胞内存在cccDNA,其含量约为每个细胞18 拷贝。对数生长期前培养上清液和慢性乙型肝炎(轻度)患者血清均未检测到荧光信号,本实验条件下用该方法可检测低至103 拷贝/ml的cccDNA分子。结论 该方法操作方便,特异性高,敏感性较好,可用于定量检测细胞内的cccDNA及抗病毒药物的筛选和评价等。