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hsp90抑制剂在肿瘤细胞中的靶向位点作用机制

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中国免疫学杂志 2011年第8期27卷 763-766页

作者：王琪琳刘相国山东大学生命科学学院济南250100

近年来研究发现,hsp90具有特殊的分子伴侣功能,参与了众多与肿瘤增殖和凋亡调控信号相关的分子构象与稳定性的调节。hsp90的许多底物蛋白如Her2、EGFR、Akt、Raf1、p53,v-Src和Bcl-Abl等在肿瘤中是突变的或者是过表达的,

关键词： hsp90抑制剂肿瘤细胞靶向分子伴侣分子构象凋亡调控肿瘤增殖 Her2

hsp90抑制剂在急性髓细胞白血病治疗中的最新研究进展

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基础医学与临床 2014年第2期34卷 270-273页

作者：邹彬镔石庆之南昌大学第二附属医院血液科江西南昌330006 南昌大学研究生院医学部江西南昌330006

热休克蛋白90(hsp90)是许多癌基因下游蛋白的分子伴侣,参与多重致癌途径,涉及急性髓细胞白血病(AML)的发生和不良预后。hsp90抑制剂是当前AML分子靶向治疗研究药物之一,通过抑制hsp90同时实现对多重致癌信号通路的调控发挥抗白血病作用。

关键词：急性髓细胞白血病 hsp90抑制剂抗白血病分子靶向治疗

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hsp90抑制剂的研究进展

生物技术通报 2010年第7期26卷 64-67页

作者：何彩梅李海燕魏大巧葛若梅昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650224

热激蛋白90(heat shock protein90,hsp90)作为分子伴侣在调节细胞生长、分化、凋亡等方面发挥着重要的作用。hsp90抑制剂能与hsp90结合,使其功能丧失,造成细胞的多种生理活动缺陷,在hsp90功能研究和癌症治疗方面具有潜在的价值。综述了... 详细信息

热激蛋白90(heat shock protein90,hsp90)作为分子伴侣在调节细胞生长、分化、凋亡等方面发挥着重要的作用。hsp90抑制剂能与hsp90结合,使其功能丧失,造成细胞的多种生理活动缺陷,在hsp90功能研究和癌症治疗方面具有潜在的价值。综述了不同来源的hsp90抑制剂及其作用机制,同时对新型hsp90抑制剂的来源进行了探讨。

关键词： hsp90 hsp90抑制剂格尔德霉素根赤壳菌素

hsp90抑制剂AT13387的合成工艺研究

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Hsp90抑制剂AT13387的合成工艺研究

作者：冯文艳北京工业大学

学位级别：硕士

热休克蛋白(heat shock proteins,hsps)是机体在应激状态下合成的一组蛋白质分子,主要功能是参与维持其客户蛋白的正确折叠,使蛋白能够形成生理功能所需构象,从而在调节蛋白合成与降解平衡及蛋白定位中发挥重要作用。hsp90对于其客户蛋... 详细信息

热休克蛋白(heat shock proteins,hsps)是机体在应激状态下合成的一组蛋白质分子,主要功能是参与维持其客户蛋白的正确折叠,使蛋白能够形成生理功能所需构象,从而在调节蛋白合成与降解平衡及蛋白定位中发挥重要作用。hsp90对于其客户蛋白的装配、运转、折叠以及降解发挥着十分重要的作用,许多客户蛋白是致癌基因的表达产物,其中多个已是临床上明确的抗肿瘤药物作用靶点。非安莎霉素(AT13387)是一种新型的hsp90抑制剂,是体外实验中药效最持久的一种抑制剂,已越来越广泛的应用于晚期肿瘤特别是顽固性肿瘤的临床研究。目前已知的AT13387的合成主要是由两个关键中间体2,4-二苄氧基-5-异丙烯基苯甲酸(A)和5-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)异二氢吲哚(B)的缩合和还原得到。通过对AT13387两个关键中间体A和B合成工艺的研究,可以为AT13387提供原料易得、操作简单和适合大规模工业化生产的合成工艺,为AT13387的国产化等方面的研究提供一定的理论依据和实验基础。2,4-二苄氧基-5-异丙烯基苯甲酸(A)的合成工艺研究。综合文献报道,确定化合物A的合成路线是以2,4-二羟基苯甲酸甲酯为原料,经过“一锅法”的Friedel-Crafts酰基化和Fries重排反应、亲核取代反应、Wittig反应和酯水解4步操作,终产率为65.8%,纯度为99.6%。在2,4-二苄氧基-5-异丙烯基苯甲酸的合成过程中,探讨了反应体系、投料比、反应温度、溶剂和析晶终止温度等对化合物A得率的影响,确定各步反应最佳合成条件。“一锅法”的引入不仅简化了操作步骤,还提高了反应得率。5-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)异二氢吲哚(B)的合成工艺研究。综合文献报道,化合物B的合成是N-Bn-哌嗪基-异二氢吲哚的还原脱苄基过程。作为重要中间体N-Bn-哌嗪基-异二氢吲哚合成是以偏苯三酸酐为原料,经过胺解、缩合和还原,或者经胺解、还原、磺酰化和亲核取代而得到。通过对N-Bn-哌嗪基-异二氢吲哚合成过程中所涉及的反应体系、温度、溶剂和投料比等的优化研究,确定适合化合物B的合成路线,该合成路线具有起始原料简单易得、成本较低和路线相对较短等优点。最后,化合物A和B经缩合和还原得到目标化合物AT13387。所有化合物的结构均经HNMR、CNMR和MS确证。

关键词： hsp90抑制剂 AT13387 2,4-二苄氧基-5-异丙烯基苯甲酸 5-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)异二氢吲哚合成工艺

hsp90抑制剂格尔德霉素对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭能力及B-RAF表达的影响研究

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HSP90抑制剂格尔德霉素对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭能力及B-RAF...

作者：蔡志华福建医科大学

学位级别：硕士

【目的】研究hsp90抑制剂格尔德霉素对胃癌SGC—7901细胞增殖、侵袭能力及B-RAF表达的影响,探讨hsp90在胃癌增殖、凋亡及侵袭转移中的作用及分子机制。【方法】1.以不同浓度的格尔德霉素(geldanamycim,GA)(0.20μmol/L、0.40μmol/L、0... 详细信息

【目的】研究hsp90抑制剂格尔德霉素对胃癌SGC—7901细胞增殖、侵袭能力及B-RAF表达的影响,探讨hsp90在胃癌增殖、凋亡及侵袭转移中的作用及分子机制。【方法】1.以不同浓度的格尔德霉素(geldanamycim,GA)(0.20μmol/L、0.40μmol/L、0.80μmol/L、1.60μmol/L、3.20μmol/L)作用于体外培养的人胃癌SGC—7901细胞,在倒置显微镜下观察细胞形态的变化,应用直接细胞计数法和四氮唑蓝比色法(MTT法)描绘细胞生长曲线,检测GA对人胃癌SGC—7901细胞的抑制增殖作用及其量效和时效关系。应用原位细胞凋亡检测(TUNEL法)观察诱导人胃癌SGC—7901细胞的凋亡表现。2.应用Transwell小室检测GA对人胃癌SGC—7901细胞侵袭及迁移能力的影响。3.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GA作用下人胃癌SGC—7901细胞中B-RAF mRNA及B-RAF蛋白的表达状况。【结果】1、正常对照组的人胃癌SGC—7901细胞呈良好的贴壁生长状态,而经GA处理后的人胃癌SGC—7901细胞形态则发生了显著变化:泡化、扭曲、固缩、脱离贴壁生长;GA能明显抑制体外培养的人胃癌SGC—7901细胞增殖,其细胞增殖抑制率随GA浓度增高和时间延长而增大。并呈现明显量效和时效关系。GA(1.2μmol/L)能有效诱导人胃癌SGC—7901细胞的凋亡。2.用GA(0.6μmol/L)处理48h后人胃癌SGC—7901细胞的侵袭和迁移能力有明显下降,同正常对照组相比有显著差异(P901细胞B-RAF mRNA表达有明显的下降。同正常对照组相比有显著差异(P抑制体外培养的人胃癌SGC—7901细胞增殖,呈现明显的量效和时效关系,并能有效诱导人胃癌SGC—7901细胞凋亡。2. GA能明显抑制体外培养的人胃癌SGC—7901细胞的侵袭和迁移能力。3. GA能明显抑制体外培养的人胃癌SGC—7901细胞B-RAF mRNA的表达。

关键词： hsp90抑制剂格尔德霉素胃癌增殖凋亡侵袭 B-RAF

hsp90抑制剂对白念珠菌刺激巨噬细胞分泌IL-23的研究

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HSP90抑制剂对白念珠菌刺激巨噬细胞分泌IL-23的研究

作者：毛艳红河北医科大学

学位级别：硕士

目的:白念珠菌是引起人类真菌感染的主要致病菌,在医院获得性感染中居第四位,死亡率接近50%,它常寄生在人类的口腔、下呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道中,可引起口腔泌尿生殖道等的表浅感染,也可通过血行播散和器官入侵引起免疫力低下病人... 详细信息

目的:白念珠菌是引起人类真菌感染的主要致病菌,在医院获得性感染中居第四位,死亡率接近50%,它常寄生在人类的口腔、下呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道中,可引起口腔泌尿生殖道等的表浅感染,也可通过血行播散和器官入侵引起免疫力低下病人致命的系统性感染,患者出现念珠菌血症、心内膜炎,中枢神经系统感染、眼内炎和骨髓炎,造成多器官功能的损害甚至死亡。在系统性白念珠菌感染过程中,强烈的炎症反应不仅对机体没有有利作用,反而对机体器官组织造成损伤。IL-23参与机体防御白念珠菌感染的天然免疫过程,IL-23产生后可刺激巨噬细胞产生更多的促炎因子,并可作用于Th17细胞,激活获得性免疫反应,进一步增强机体清除白念珠菌的能力,IL-23对Th17细胞的生存、增殖、再激活及产生IL-17是不可缺少的。因此,IL-23是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁。hsp90是一个进化保守、含量十分丰富的分子伴侣,不仅参与应激反应,还参与了炎症反应和天然免疫反应过程,它影响着大量客户蛋白的活性和信号通路的传导。本实验通过巨噬细胞与白念珠菌体外相互作用,探讨巨噬细胞与白念珠菌体外相互作用后IL-23的表达分泌水平及hsp90抑制剂对IL-23表达分泌水平的影响。方法:1实验用小鼠昆明种健康小鼠30只,雌性,清洁级,4-5周龄,15～20g,由河北医科大学实验动物中心提供,合格证编号:1404078。2实验用菌株白念珠菌标准株ATCC 90028购于中国医学科学院微生物研究所。3菌株的活化和菌悬液的配制白念珠菌标准株复温后在沙氏培养基上活化三次,加入含0.1%吐温80的1640培养液,吸管吹打混匀,用血球计数板计数,调整终浓度至1-2×106/m L。4巨噬细胞分离培养及鉴定小鼠腹腔巨噬细胞分离法提取巨噬细胞,显微镜下计数,并用含10%胎牛血清的1640培养液进行培养,巨噬细胞培养3天后取出。巨噬细胞的鉴定采用形态学及免疫组化SP法:取出的巨噬细胞PBS洗涤3遍,丙酮固定,常规HE染色、瑞士-吉姆萨染色及免疫组织化学SP法检测巨噬细胞CD68抗原的表达,中性树胶封固。5实验分组与处理实验分为实验组和对照组。巨噬细胞培养3天后取出,离心洗涤后计数板计数。用含10%胎牛血清1640培养液调整终浓度至5-6×105/m L,转种至6孔板中,每孔2 ml,培养24小时后每孔加入浓度为1×106/m L菌悬液0.5 ml。实验组每孔分别加入0.01mmol/L.5mmol/L浓度的17-DMAG100mL,对照组加入同体积含10%胎牛血清1640培养液。0.1mmol/L浓度实验组及对照组分别于实验的第2、4、6、12小时收集细胞及上清液。不同浓度17-DMAG实验组于第4小时收集上清液。上清液-80℃冻存待测。各孔分别设3个平行孔。6流式细胞术检测IL-23的表达水平实验各组巨噬细胞从六孔板吹打下来后离心,PBS洗涤2遍,加入0.1%Triton X-100打孔,避光孵育20分钟,IL-23抗体染色,避光孵育15分钟,流式细胞仪检测巨噬细胞内IL-23的表达水平,用FACSDiva Software软件分析数据。7 ELISA法检测IL-23的分泌水平实验各组收集的上清液复温,按试剂盒说明操作,检测细胞培养液中IL-23在蛋白水平的表达。结果:1巨噬细胞培养形态观察培养第一天倒置显微镜下可见巨噬细胞为圆形和椭圆形,贴壁生长。培养第三天,显微镜下可见巨噬细胞体积略增大,为圆形,椭圆形,多角形,多数有伪足和凸起,贴壁生长。2巨噬细胞HE染色和瑞士-吉姆萨染色结果HE染色显微镜下可见巨噬细胞胞浆丰富,呈粉红色,核大深蓝色,瑞士染色显微镜下可见胞质淡蓝色,细胞核紫红色。两种染色均可见细胞核呈肾形,马蹄形,偏居于一侧。3巨噬细胞免疫组织化学结果CD68阳性反应定位于培养巨噬细胞的胞膜及胞浆。4流式细胞术检测巨噬细胞内IL-23表达水平结果在实验的2h、4h、6h及12h,实验组IL-23表达水平分别为6.24±1.16,8.09±1.15,10.54±0.67及3.69±0.21。对照组IL-23表达水平分别为8.19±1.01,10.06±0.32,12.10±1.97及4.76±0.86。实验组和对照组IL-23的表达水平均随着作用时间的延长先上升后下降,并在第6小时表达水平达高峰期。实验组表达水平明显低于对照组,F=55.643 P=0.000P<0.05,差异有统计学意义。5上清液中IL-23分泌水平检测结果。在实验的2h、4h、6h及12h,实验组IL-23表达水平（pg/m L）分别为225.17±7.95,243.60±5.81,257.61±12.48及259.19±7.92。对照组268.99±14.34,278.62±14.54,295.96±5.65及309.79±4.

关键词： hsp90抑制剂 17-DMAG 白念珠菌巨噬细胞 IL-23

hsp90抑制剂对白念珠菌刺激巨噬细胞增殖和p38MAPK表达的影响

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HSP90抑制剂对白念珠菌刺激巨噬细胞增殖和p38MAPK表达的影响

作者：霍文倩河北医科大学

学位级别：硕士

目的:炎症反应是宿主抵抗病原体的一个重要反应途径,然而,当炎症过度活化或失去调节时,将导致宿主的组织损伤。大量实验证实:过度活化的炎性细胞因子介导的固有免疫和适应性免疫能够导致人类脓毒血症以及免疫功能障碍的发生。在临床中,... 详细信息

目的:炎症反应是宿主抵抗病原体的一个重要反应途径,然而,当炎症过度活化或失去调节时,将导致宿主的组织损伤。大量实验证实:过度活化的炎性细胞因子介导的固有免疫和适应性免疫能够导致人类脓毒血症以及免疫功能障碍的发生。在临床中,念珠菌血症具有一些同细菌性脓毒血症相似的症状。早期大部分表现为中高热、低血压、心率增快以及酸中毒等症状,而晚期一些患者常发展为感染性休克以及多器官功能障碍。促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族在炎症和应激中是信号转导重要的组成部分,能够调控一系列的生理过程。MAPK家族包括p38,JNK,和ERK,并通过磷酸化激活。有研究显示,在细菌性脓毒血症中p-p38,p-ERK,p-JNK的表达显著增加,而MAPK的磷酸化可导致器官的损伤。此外,p38的激活能够调节巨噬细胞和T细胞对创伤性损伤的反应。热休克蛋白是一组分子伴侣蛋白,当细胞遭受高温或者其他外界刺激时,能够维持客户蛋白的稳定性,防止未折叠蛋白降解。hsp90做为重要的分子伴侣之一,负责客户蛋白的三级折叠,如IKK,IRAK-1和MAP激酶,并通过TLR信号途径参与固有免疫反应。在体外实验中,hsp90抑制剂能够减轻脂多糖（LPS）诱导的大鼠脓毒血症中的炎症反应,延长大鼠的生存期。在LPS体外刺激小鼠巨噬细胞的实验中,hsp90抑制剂能够通过降低p38的磷酸化水平以及介导巨噬细胞的凋亡而发挥抗炎作用。而hsp90抑制剂对由白念珠菌引起的炎症反应未见报道。本实验通过白念珠菌体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞,探讨hsp90抑制剂是否通过抑制巨噬细胞的增殖及降低p38磷酸化水平而发挥抗炎作用。方法:1实验用小鼠健康的雌性昆明种小鼠35只,清洁级,4-5周龄,18～23g,由河北医科大学实验动物中心提供,合格证编号:1508052。2实验用菌株白念珠菌标准株atcc90028购于中国医学科学院微生物研究所。3菌株的活化、菌悬液的配制及灭活白念珠菌标准株复温后在沙氏培养基上传代三次,加入含0.1%吐温80的1640培养液,吸管轻轻吹打混匀,血球计数板计数,调整终浓度为1-2×106/ml。随后将装有白念珠菌的试管放入65℃水浴锅中加热30min进行灭活。4巨噬细胞分离培养及鉴定采用小鼠腹腔巨噬细胞分离法提取巨噬细胞,1640培养液（含10%胎牛血清）进行培养,巨噬细胞培养3天后取出。采用形态学及免疫组织化学法进行巨噬细胞的鉴定:将巨噬细胞制成单细胞悬液后,进行细胞爬片,第2天后,取出盖玻片,丙酮固定,进行he染色及免疫组织化学sp法检测巨噬细胞cd68抗原的表达,中性树胶封固。5实验分组与处理实验分为实验组和对照组。巨噬细胞培养3天后取出,离心洗涤后计数板计数。并用含10%胎牛血清1640培养液调整终浓度至5-6×105/ml,转种至6孔板中,每孔2ml,培养8-10小时后每孔加入浓度为2×106/ml菌悬液0.5ml。实验组每孔分别加入终浓度为0.01μmol/lμmol/l的17-dmag100μl,对照组则加入同体积含10%胎牛血清1640培养液。于第12小时分别收集实验组及对照组细胞,-80℃冻存待测。每组均设置4个重复孔。6westernblot法检测各组细胞磷酸化p38蛋白的表达水平实验各组巨噬细胞从六孔板吹打下来后离心,pbs洗涤2遍,用含蛋白磷酸酶抑制剂的细胞裂解液ripa将上述细胞裂解,提取总蛋白,采用sds-page凝胶电泳,随后转至pvdf膜,牛奶蛋白封闭后,分别孵育p-p38（1:300）与β-actin（1:1000）一抗及抗兔igg二抗（1:3000）,最后用双色红外激光扫描仪进行扫膜,imagej软件分析结果。7cck-8法检测各组细胞增殖率的变化将100μl浓度为5-6×105/ml的细胞悬液接种至96孔培养板内,放置细胞培养箱8h后,分别加入90μl浓度为5.5-6.5×105/ml菌悬液及10μl终浓度为0.01μmol/l、0.1μmol/l、0.5μmol/l、1μmol/l的hsp90抑制剂孵育12h。同时设对照组（不加药物组）和空白组（只加培养液和白念珠菌悬液）,孵育12h后,每孔加入20μl的cck-8溶液,继续放置细胞培养箱内,3h后用酶标仪测定各孔在450nm波长的a值。按照公式:增殖抑制率（pi）=[a（对照组）-a（实验组）]/[a（对照组）-a（空白组）]×100%。计算细胞增殖抑制率。每组均设置3个重复孔。8巨噬细胞增殖与p-p38表达的相关分析用spearman相关分析法将上述计算的细胞增殖抑制率与p-p38的表达水平进行相关分析9统计学分析用spss13.0统计软件,数据结果以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用s-n-k检验,p<0.05为有统计学意义。结果1巨噬细胞形态观察培养第1天后,倒置

关键词： hsp90抑制剂 17-DMAG 白念珠菌巨噬细胞 p-p38

hsp90抑制剂Ganetespib协同雷公藤内酯醇抑制人类白血病细胞作用机制的研究

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Hsp90抑制剂Ganetespib协同雷公藤内酯醇抑制人类白血病细胞作用...

作者：林子艺福建医科大学

学位级别：硕士

目的:研究ganetespib、雷公藤内酯醇对人类白血病细胞的体外抗肿瘤活性,探讨联合用药的协同作用机制。方法:(1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定ganetespib、雷公藤内酯醇单药及联合用药对Bcr-Abl慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562、急性粒细... 详细信息

目的:研究ganetespib、雷公藤内酯醇对人类白血病细胞的体外抗肿瘤活性,探讨联合用药的协同作用机制。方法:(1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定ganetespib、雷公藤内酯醇单药及联合用药对Bcr-Abl慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562、急性粒细胞白血病(AML)细胞株HL-60的体外增殖抑制作用。(2)ComPusyn软件探究ganetespib联合雷公藤内酯醇对人类白血病细胞K562、HL-60的协同作用。(3)Western blot实验检测ganetespib、雷公藤内酯醇单药及联合用药对人类白血病细胞K562、HL-60相关热休克蛋白、增殖信号通路、凋亡调控信号通路等表达的影响。(4)AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪检测ganetespib、雷公藤内酯醇单药及联合用药诱导人类白血病细胞K562、HL-60的凋亡作用。结果:(1)在一定浓度范围内,ganetespib、雷公藤内酯醇呈剂量依赖性抑制人类白血病细胞K562、HL-60增殖,ganetespib对应的IC分别为(0.0486±0.0093)μmol/L和(0.0359±0.0203)μmol/L,雷公藤内酯醇对应的IC分别为(0.0532±0.0199)μmol/L和(0.0319±0.0036)μmol/L。(2)通过ComPusyn软件分析,在一定浓度配对下,ganetespib联合低浓度雷公藤内酯醇具有协同抑制人类白血病细胞K562、HL-60增殖作用。(3)Ganetespib、雷公藤内酯醇单药呈剂量依赖性和时间依赖性抑制Bcr-Abl和Akt表达,抑制Akt的磷酸化,激活caspase-3、caspase-7、caspase-9和PARP,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡;Ganetespib单药增加hsp70表达,抑制p-ERK表达,雷公藤内酯醇单药抑制hsp70表达,诱导p-ERK表达。(4)Ganetespib协同雷公藤内酯醇更有效抑制Bcr-Abl、hsp70和Akt的表达,抑制Akt的磷酸化,激活p-ERK、caspase-3、caspase-7、caspase-9和PARP,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡作用更明显。结论:(1)Ganetespib和雷公藤内酯醇体外对人类白血病细胞K562、HL-60具有良好的增殖抑制作用。(2)Ganetespib协同雷公藤内酯醇阻断PI3K/Akt通路,抑制人类白血病细胞K562、HL-60增殖,诱导caspase通路,促进细胞凋亡。(3)Ganetespib协同雷公藤内酯醇抗人类白血病细胞作用可能是通过雷公藤内酯醇下调hsp90抑制剂ganetespib诱导的hsp70表达、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡来实现的。

关键词： hsp90抑制剂 ganetespib 雷公藤内酯醇协同白血病

hsp90抑制剂Ganetespib增强套细胞淋巴瘤对PARP抑制剂的敏感性及其机制

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HSP90抑制剂Ganetespib增强套细胞淋巴瘤对PARP抑制剂的敏感性及...

作者：任德万江苏大学

学位级别：硕士

目的:套细胞淋巴瘤（Mantle cell lymphoma,MCL）是一种恶性程度较高的非霍奇金淋巴瘤（Non-hodgkin lymphoma,NHL）,患者中位总生存期仅3～5年。因其临床表现复杂,疾病进展多样以及经常出现复发,目前尚无治愈方案。常规化疗药物对MCL... 详细信息

目的:套细胞淋巴瘤（Mantle cell lymphoma,MCL）是一种恶性程度较高的非霍奇金淋巴瘤（Non-hodgkin lymphoma,NHL）,患者中位总生存期仅3～5年。因其临床表现复杂,疾病进展多样以及经常出现复发,目前尚无治愈方案。常规化疗药物对MCL患者毒副作用较大,且易发生耐药,因此,亟待寻找新的治疗方法和策略。多聚ADP核糖聚合酶（Poly-ADP-ribose polymerase,PARP）抑制剂是一种新型靶向抗肿瘤药物,通过影响肿瘤细胞的DNA损伤修复发挥抗肿瘤作用,且对同源重组（Homologous recombination,HR）修复功能障碍的患者效果更佳。课题组前期研究发现,热休克蛋白90（Heat shock protein 90,hsp90）抑制剂能影响肿瘤细胞的DNA损伤修复,因此,我们希望探索其是否能与PARP抑制剂联合使用增强PARP抑制剂的细胞毒性作用。本课题旨在研究第二代hsp90抑制剂Ganetespib能否增强PARP抑制剂Olaparib对MCL的毒性作用及其机制。方法:首先用hsp90抑制剂Ganetespib处理MCL细胞系Jeko-1和REC-1,通过转录组测序检测其DNA损伤修复相关基因的变化情况,同时用qRT-PCR进行验证。然后用MTT法检测Ganetespib处理是否增强PARP抑制剂Olaparib对MCL细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术和Western blot检测Ganetespib和Olaparib联合用药对MCL细胞周期凋亡的影响。使用免疫荧光及Western blot检测联合用药对MCL细胞DNA损伤及HR修复的影响。最后,通过MCL小鼠皮下移植瘤模型,研究联合用药对裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用和对HR修复的影响。结果:转录组测序、qRT-PCR和Western Blot实验结果显示,Ganetespib影响了套细胞淋巴瘤细胞Jeko-1和REC-1的HR修复相关的基因及蛋白表达;且Ganetespib处理后,明显增强了Olaparib对MCL细胞系的增殖抑制作用;同时也增强Olapaib诱导MCL细胞凋亡作用及G2/M期阻滞作用;进一步研究发现,Ganetespib处理能增强Olaparib诱导的DNA损伤作用及抑制HR修复功能。因此,可能导致细胞DNA损伤堆积,从而导致细胞凋亡。联合用药组的细胞周期相关蛋白Cyclin D1和CDK4显著下降,细胞周期阻滞作用更为显著。小鼠体内实验结果表明,Ganetespib和Olaparib联合使用可明显抑制小鼠皮下MCL移植瘤的生长,并且抑制了肿瘤组织内RAD51的蛋白水平。结论:体内外研究结果证明,hsp90抑制剂Ganetespib通过抑制MCL细胞的DNA损伤修复蛋白而抑制其修复功能作用,并增强Olaparib对MCL细胞的增殖抑制、凋亡及细胞周期阻滞,同时在MCL细胞中增强Olaparib诱导的DNA损伤作用,由于损伤的DNA得不到及时的修复,导致细胞的死亡。该研究为MCL的治疗提供了新方法,也为MCL的临床用药提供新的思路。

关键词：套细胞淋巴瘤 PARP抑制剂 hsp90抑制剂联合给药