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HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌中的分布及对IRF9的影响

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临床与实验病理学杂志 2023年第1期39卷 6-11页

作者：郭柄轩李杨杨王慧娟宋树言者湘漪李洪涛李冬妹潘泽民石河子大学医学院生物化学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室石河子832002 石河子大学医学院人体解剖学与组织胚胎学教研室石河子832002

目的分析HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌、CIN1中的分布及其在维吾尔族与汉族之间分布的特点,探讨其对IRF9表达的影响。方法运用TCGA数据库及GEPIA数据库分析子宫颈癌组织中IRF9的表达及其与子宫颈癌肿瘤分级... 详细信息

目的分析HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌、CIN1中的分布及其在维吾尔族与汉族之间分布的特点,探讨其对IRF9表达的影响。方法运用TCGA数据库及GEPIA数据库分析子宫颈癌组织中IRF9的表达及其与子宫颈癌肿瘤分级的关系;收集67例维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本、21例维吾尔族CIN1标本,68例汉族子宫颈鳞状细胞癌标本和28例汉族CIN1标本,从收集的标本中提取DNA,PCR扩增E6和E7基因,PCR产物纯化后测序。将HPV16感染阳性标本进行免疫组化检测。结果维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为31例(46.27%)和7例(10.45%),CIN1标本中变异均为7例(33.33%)。汉族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为12例(17.65%)和37例(54.41%),CIN1变异分别为8例(28.57%)和13例(46.43%)。维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中E6-295T/G的变异率高于汉族,汉族子宫颈鳞状细胞癌中E7-647A/G的变异率高于维吾尔族,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,IRF9在子宫颈鳞状细胞癌中的表达高于CIN1(P0.05)。结论维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中HPV16 E6-295T/G变异高于汉族,汉族E7-647A/G变异高于维吾尔族。HPV16 E6-295T/G变异的子宫颈鳞状细胞癌组织中IRF9蛋白表达水平增高,可能在子宫颈癌的发生中起作用。

关键词：子宫颈肿瘤鳞状细胞癌 HPV16 基因多态性 IRF9

携带HPV16 E7 shRNA和IL-12基因的重组短双歧杆菌抗小鼠宫颈癌移植瘤的疗效和安全性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2022年第4期29卷 301-307页

作者：得丽扎尔·热合曼卡得了亚·哈依沙尔王中香刘丹李轶杰新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学生命科学与技术学院生物技术系新疆乌鲁木齐830046

目的:评价口服携带HPV16 E7 shRNA和IL-12基因的重组短双歧杆菌在小鼠体内抗宫颈癌移植瘤的效果。方法:将p MG36e-E7 shRNA、pMG36e-mIL-12D质粒分别转化短双歧杆菌,经筛选鉴定并扩增获得携带HPV16 E7 shRNA和IL-12基因的重组短双歧杆... 详细信息

目的:评价口服携带HPV16 E7 shRNA和IL-12基因的重组短双歧杆菌在小鼠体内抗宫颈癌移植瘤的效果。方法:将p MG36e-E7 shRNA、pMG36e-mIL-12D质粒分别转化短双歧杆菌,经筛选鉴定并扩增获得携带HPV16 E7 shRNA和IL-12基因的重组短双歧杆菌。通过小鼠皮下宫颈癌细胞移植建立荷瘤小鼠模型。口服重组短双歧杆菌1、7 d后,检测小鼠主要器官(心、肝、脾、肺、肾)和肿瘤组织匀浆液或血清在PYG培养基中形成的菌落数量,评价短双歧杆菌的肿瘤靶向性,以小鼠体内肿瘤生长曲线评估重组短双歧杆菌的抗肿瘤效果,通过主要器官切片H-E染色和检测荷瘤小鼠血清相关细胞因子水平评价口服重组短双歧杆菌的安全性。结果:成功制备重组短双歧杆菌和宫颈癌TC-1细胞移植瘤小鼠。7 d后,移植瘤组织匀浆液和血清的菌落数量证实短双歧杆菌具有靶向体内瘤组织的定殖能力,口服重组短双歧杆菌明显抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长(PHPV16 E7 shRNA和IL-12基因的重组双歧杆菌的肿瘤抑制率与单独使用的并无显著差异,治疗后未见对荷瘤小鼠主要器官的损伤和血清中IL-12及IFN-γ的水平明显变化。结论:短双歧杆菌可用作靶向肿瘤的治疗性基因分子递送载体,其对宫颈癌移植瘤的疗效明显且安全可控。

关键词：短双歧杆菌宫颈癌 HPV16 shRNA IL-12 抗肿瘤

TLRs表达和HPV16感染与宫颈鳞癌的相关性研究

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四川大学学报（医学版） 2018年第4期49卷 649-651,672页

作者：王涛郄明蓉四川大学华西第二医院分子与转化医学实验室出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041 四川大学华西第二医院妇产科成都610041

目的分析Toll样受体(TLRs)mRNA在宫颈鳞癌和宫颈炎组织中的表达差异及与HPV16感染之间的关系,为研究TLRs在宫颈鳞癌发生发展中的作用提供依据。方法以RT-PCR方法检测80例临床组织样本中HPV16 E6和E7的表达及TLRs mRNA的表达,分析各组表... 详细信息

目的分析Toll样受体(TLRs)mRNA在宫颈鳞癌和宫颈炎组织中的表达差异及与HPV16感染之间的关系,为研究TLRs在宫颈鳞癌发生发展中的作用提供依据。方法以RT-PCR方法检测80例临床组织样本中HPV16 E6和E7的表达及TLRs mRNA的表达,分析各组表达率的差异。结果未发现鳞癌组和宫颈炎组HPV16感染与TLRs mRNA表达具有相关性;鳞癌中TLR3 mRNA表达率低于宫颈炎组(PHPV16在宫颈鳞癌中的表达未见相关性。

关键词： TLRs HPV16 宫颈鳞癌 RT-PCR

HPV16 E6-295T/G和E6-350T/G变异位点影响IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的研究

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石河子大学学报（自然科学版） 2024年第2期42卷 223-231页

作者：李杨杨辛慧珍郭柄轩王慧娟宋树言李洪涛李冬妹潘泽民石河子大学医学院生物化学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832002 新疆医科大学基础医学院生物学教研室新疆乌鲁木齐830017 石河子大学医学院人体解剖学与组织胚胎学教研室新疆石河子832002

目的探讨HPV16(Human Papillomavirus Type 16)E6-295T/G和E6-350T/G变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。方法在宫颈癌细胞C33A(hpv阴性)中分别转染真核表达载体295G/350G-GV230、295T/350G-GV230和295T/350T-GV230作为实验组,以NC-GV230作为对照组。通过免疫组织化学法、Western blot方法检测HPV16 E6295T/G、350T/G不同变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。通过IBM SPSS Statistics 26软件对实验结果进行统计学分析,PHPV16 E6-295G/350G变异组较HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组降低(PHPV16 E6-295G/350G变异组的免疫分子主要组织相容性复合体I类(Major Histocompatibility Complex Class I,MHC-I)的表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(PHPV16 E6-295G/350G变异组的信号转导子和转录激活子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,STAT1)表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(PHPV16 E6-295G/350G与HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G变异组相比,干扰素调节因子9(Interferon Regulatory Factor 9,IRF9)表达显著降低(PHPV16病毒E6蛋白质可以降低IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9的蛋白质表达水平,E6基因T295G/T350G变异降低这些分子的表达作用最强。

关键词：宫颈癌 HPV16 E6基因基因变异蛋白质表达

阴道微环境改变与HPV16感染在宫颈上皮内瘤变中的作用及其交互效应

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中华流行病学杂志 2018年第11期39卷 1486-1490页

作者：李俐丁玲吕元婧王铭刘春亮韩阳王金桃山西医科大学公共卫生学院流行病学教研室太原030001

目的探讨阴道微环境改变和HPV16感染在宫颈上皮内瘤变中的作用及其交互效应。方法研究对象来源于课题组前期在山西省建立的宫颈病变研究队列，包括623例正常宫颈（NC）妇女、303例低度宫颈上皮内瘤变（CINⅠ）患者和93例高度宫颈上皮... 详细信息

目的探讨阴道微环境改变和HPV16感染在宫颈上皮内瘤变中的作用及其交互效应。方法研究对象来源于课题组前期在山西省建立的宫颈病变研究队列，包括623例正常宫颈（NC）妇女、303例低度宫颈上皮内瘤变（CINⅠ）患者和93例高度宫颈上皮内瘤变（CINⅡ/Ⅲ）患者。在收集其人口学特征和宫颈上皮内瘤变相关因素资料的同时，采用导流杂交技术检测HPV16感染状况，应用需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病联合检测试剂盒检测阴道分泌物中的H2O2、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、唾液酸酐酶和白细胞酯酶，以及阴道pH值和清洁度。应用SPSS 22.0软件进行数据的录入和资料分析。结果随着宫颈病变的进展，HPV16感染率（趋势性χ2=55.45，P〈0.001）、H2O2 （趋势性χ2=26.19，P〈0.001）、pH值（趋势性χ2=5.06，P=0.024）、阴道清洁度（趋势性χ2=19.55，P〈0.001）、β-葡萄糖醛酸苷酶（趋势性χ2=17.52，P〈0.001）、唾液酸酐酶（趋势性χ2=14.90，P〈0.001）的异常率均逐渐升高，而凝固酶和白细胞酯酶异常率未见相应趋势。广义多因子降维模型交互作用分析显示，在CINⅠ组，HPV16感染与H2O2、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、唾液酸酐酶异常呈交互作用，在CINⅡ/Ⅲ组，HPV16感染与阴道清洁度、H2O2、β-葡萄糖醛酸苷酶、唾液酸酐酶异常呈交互作用。结论阴道微环境改变和HPV16感染均可增加宫颈病变的发病风险，且在宫颈上皮内瘤变中具有交互作用。

关键词：宫颈上皮内瘤变 HPV16 阴道微环境交互作用

基于二代测序的肿瘤相关HPV16和EBV序列特征及其临床关联研究

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基于二代测序的肿瘤相关HPV16和EBV序列特征及其临床关联研究

作者：艾文超中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

针对已知病因或危险因素采取有效且适合的干预措施,达到阻断或降低恶性肿瘤发生的目的,是恶性肿瘤一级预防的重要体现。据国际癌症研究中心估计,全球约20%的人类肿瘤是由病毒所致。人乳头状瘤病毒（Human papillomavirus,hpv）和EB病毒... 详细信息

针对已知病因或危险因素采取有效且适合的干预措施,达到阻断或降低恶性肿瘤发生的目的,是恶性肿瘤一级预防的重要体现。据国际癌症研究中心估计,全球约20%的人类肿瘤是由病毒所致。人乳头状瘤病毒（Human papillomavirus,hpv）和EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）分别与宫颈癌（Cervical cancer,CC）和鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma,NPC）等肿瘤高度相关。病毒基因型、基因组突变、感染持续时间和病毒与宿主细胞基因整合情况等均与肿瘤的发生发展密切相关。目前hpv和EBV致瘤基因序列特征分析多基于一代测序,很难识别病毒微小的变异和描述个体内病毒株准种的复杂序列模式。因此,本研究依靠二代测序（Next generation sequencing,NGS）平台高通量和高灵敏度的技术优势,研究分析hpv和EBV肿瘤相关基因序列特征并建立临床适宜的高危准种预测模型,以期对相关肿瘤的个性化防治提供科学依据。第一部分:HPV16阳性宫颈病变患者E6和E7序列特征分析及其细胞功能研究本部分研究共纳入HPV16阳性宫颈标本166例,并对致瘤密切相关的HPV16 E6（氨基酸1-147）和E7（氨基酸1-99）区进行二代测序得到其氨基酸突变和熵特征。通过比较其在高级别鳞状上皮内病变（High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL）与非高级别鳞状上皮内病变（Non-high-grade squamous intraepithelial lesion,NHSIL）患者间的差异,并使用Lasso回归筛选差异位点构建机器学习模型用于评估E6和E7序列特征对宫颈病变的预测作用。研究结果显示,HSIL与NHSIL患者在突变和熵特征上存在显著差异。基于Lasso回归得到的22个特征（8个突变特征和14个熵特征）,逻辑回归模型在训练集中展现出最好的预测作用（AUC=0.972,95%CI:0.944-1.000）,同时也在独立验证集中具有较高的鉴别能力（AUC=0.935,95%CI:0.867-1.000）。进一步统计分析HSIL和NHSIL患者E6/E7序列各位点氨基酸突变频率,得到6个E6差异位点和3个E7差异位点（Wilcoxon＆Fisher’s exact test P＜0.05）。通过蛋白质免疫印迹检测E6-D32E、E6-H85Y和E7-N29S突变位点分别对抑癌蛋白p53和Rb的降解作用,结果显示E6-D32E和E6-H85Y突变位点对p53蛋白降解显著（P＜0.05）,而E7-N29S突变位点对Rb蛋白降解无统计学差异。本部分研究提示基于NGS的HPV16序列特征可以预测HPV16相关HSIL的发生,为宫颈癌的临床预警提供新视角。第二部分:鼻咽癌患者EBV LMP1区序列特征分析本部分共纳入34例EBV阳性全血样本,并对EBV致瘤密切相关的潜伏膜蛋白1（Latent membrane protein 1,LMP1）区进行二代测序。通过分析比较NPC和非肿瘤携带者之间LMP1区（氨基酸1-219）氨基酸突变特征,显示两组患者在LMP1的6个疏水跨膜结构域呈现较高的突变频率。进一步统计分析两组患者LMP1区各位点氨基酸突变频率,共得到18个差异位点（Wilcoxon＆Fisher’s exact test P＜0.05）;其中仅V54F和H101R位点在NPC患者中具有较高的突变频率。此外,对18个差异位点的抗原性分析显示拥有L31P、L33P、L37P、V54F、H101R和V119A突变位点的LMP1具有较低的抗原性;而拥有M44I和G115A突变位点的LMP1具有较高的抗原性。第三部分:PCDH7在EBV相关胃癌中表达调控的初步研究原钙粘蛋白7（Protocadherin 7,PCDH7）是钙粘蛋白超家族的成员之一,在许多类型的人类肿瘤中都有异常表达。作为跨膜蛋白的一员,PCDH7在细胞粘附和下游信号通路介导中发挥重要作用。然而其在EBV相关胃癌（Epstein-Barr virus associated gastric carcinoma,EBVa GC）中的表达情况和调控作用尚不明确。在本部分研究中,我们结合TCGA和GEO在线数据库发现低表达PCDH7的胃腺癌呈现较好的预后。同时,我们体外实验进一步提示PCDH7的过表达增强了胃癌细胞的迁移和侵袭能力。此外,我们发现PCDH7在EBV阳性胃癌细胞系的表达显著低于EBV阴性胃癌细胞系,其中EBV-miR-BART17-5p在PCDH7表达中发挥负调控作用。

关键词： HPV16 EBV PCDH7 宫颈癌鼻咽癌二代测序

转录因子NF-κB家族、STAT1、ELK1核表达与HPV16阳性宫颈癌发生发展的相关性及其预后意义

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现代妇产科进展 2020年第5期29卷 353-359页

作者：许珂于瑞梅刘天齐莫哲伦容雁刘婵桢广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科南宁530021 山东大学附属生殖医院病理科济南250021

目的:探讨转录因子NF-κB家族、STAT1、ELK1在HPV16阳性宫颈癌中的核表达及其与宫颈癌发生、发展的关系,并分析其临床预后意义。方法:免疫组化法检测NF-κB家族、STAT1、ELK1在HPV16阳性的116例宫颈癌、26例HSIL、12例LSIL、24例正常宫... 详细信息

目的:探讨转录因子NF-κB家族、STAT1、ELK1在HPV16阳性宫颈癌中的核表达及其与宫颈癌发生、发展的关系,并分析其临床预后意义。方法:免疫组化法检测NF-κB家族、STAT1、ELK1在HPV16阳性的116例宫颈癌、26例HSIL、12例LSIL、24例正常宫颈组织及高危型hpv阴性的10例LSIL、27例正常宫颈组织中的核表达水平,比较不同hpv感染状态、各种类型宫颈组织中各转录因子的核表达差异,分析其与宫颈癌发生发展的相关性及其临床预后意义。结果:NF-κB家族成员c-Rel、p65、p50的核阳性表达率与宫颈病变程度呈正相关,STAT1的核阳性表达率与宫颈病变程度呈负相关,差异均有统计学意义(PHPV16早期感染组的c-Rel和p65阳性表达率明显高于正常对照组(PHPV16阳性宫颈癌预后预测因子。

关键词：转录因子 HPV16 宫颈癌 NF-κB STAT1 ELK1 预后 miRNA

Expressions of Toll-like receptors 3,4,7,and 9 in cervical lesions and their correlation with HPV16 infection in Uighur women

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Chinese Journal of Cancer 2011年第5期30卷 344-350页

作者： Ayshamgul Hasimu Lin Ge Qiao-Zhi Li Rui-Ping Zhang Xia Guo Department of Pathology Xinjiang Medical University Urumqi Xinjiang 830011 P. R. China Department of Gynecology Wujiaqu Hospital Nongtiushi Xinjiang 831300 P. R. China Key Laboratory of Endemic Diseases Xinjiang Medical University Urumqi Xinjiang 830011 P. R. China

Recent findings show that Toll-like receptors(TLRs) expressed in immune cells play a crucial role in the innate immune response and the subsequent induction of adaptive immune responses against microbial infection on tissue injury.Furthermore,expression of TLRs in cancer cells is associated with tumor proliferation and invasion.To explore the role of TLRs expression in cervical carcinogenesis in Uighur women,we detected the expressions of TLR3,TLR4,TLR7,and TLR9 in 25 normal cervical tissues,64 cervical intraepithelial neoplasia(CIN) tissues,and 63 cervical squamous cell carcinoma(CSCC) tissues using immunohistochemical staining,as well as human papillomavirus type 16(HPV16) infection using PCR.All samples used in this study were from Xinjiang Uighur women.We found the expression levels of TLR4,TLR7,and TLR9 were significantly higher in CIN and CSCC than in normal controls(P 0.05).Up-regulation of TLR9 was correlated with lymph node metastasis(P 0.05).We also analyzed the correlation between the expressions of TLRs and HPV16 infection and found that the expressions of TLR4 and TLR9 significantly correlated with HPV16 infection in CIN(r = 7.434,P = 0.006;r = 7.123,P = 0.008) and CSCC(r = 6.423,P = 0.001;r = 8.478,P = 0.004),whereas the expression of TLR3 was not significantly different in any of the three groups and had no significant correlation with HPV16 infection.Our results suggest that high expression of TLR4,TLR7,and TLR9 may play important roles in the development and progression of CIN and CSCC in Uighur women,and the expressions of TLR4 and TLR9 can be up-regulated by HPV16 infection.

关键词： Toll样受体微生物感染 HPV16 维吾尔族宫颈癌妇女免疫组织化学染色 TLR9

P16及HPV16在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中的关系研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2017年第24期31卷 1904-1909页

作者：王佳说阎艾慧中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科沈阳110001

目的:探讨鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中P16蛋白表达和HPV16感染情况与肿瘤临床特征、预后的关系以及二者的相关性。方法:收集经病理科诊断为鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的组织标本55例,并以鼻内翻性乳头状瘤20例、鼻息肉组织20例作为对照组,应用免疫组... 详细信息

目的:探讨鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中P16蛋白表达和HPV16感染情况与肿瘤临床特征、预后的关系以及二者的相关性。方法:收集经病理科诊断为鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的组织标本55例,并以鼻内翻性乳头状瘤20例、鼻息肉组织20例作为对照组,应用免疫组织化学法检测P16蛋白表达和HPV16感染情况。结果:P16及HPV16在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织及内翻性乳头状瘤组织中的阳性率均显著高于鼻息肉组,差异有统计学意义(P16表达与肿瘤病理分级、临床分期具有相关性(P0.05);HPV16感染与肿瘤病理分级、临床分期、性别、年龄、吸烟及肿瘤原发部位无关(P>0.05)。在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌组织中,P16表达与HPV16感染呈显著正相关(r=0.483,P16、HPV16阳性组的平均生存期和中位生存期均高于同指标阴性组,差异均有统计学意义(P16蛋白表达失控、HPV16感染与鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的发生、进展密切相关,并且二者具有一定相关性,P16/HPV16阳性提示预后趋势更好。

关键词： P16 HPV16 鼻窦肿瘤癌鳞状细胞免疫组织化学