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Decreased expression of the long non-coding RNA hoxd-AS2 promotes gastric cancer progression by targeting hoxd8 and activating PI3K/Akt signaling pathway

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World Journal of Gastrointestinal Oncology 2020年第11期12卷 1237-1254页

作者： Lin Yao Peng-Cheng Ye Wang Tan Ya-Jun Luo Wan-Ping Xiang Zi-Lin Liu Zhi-Ming Fu Fei Lu Ling-Han Tang Jiang-Wei Xiao Department of Gastrointestinal Surgery Clinical Medical College and The First Affiliated Hospital of Chengdu Medical CollegeChengdu 610000Sichuan ProvinceChina The Hepatobiliary Research Institute North Sichuan Medical CollegeNanchong 637000Sichuan ProvinceChina Department of Gastrointestinal Surgery The Affiliated Hospital of North Sichuan Medical CollegeThe Hepatobiliary Research InstituteNorth Sichuan Medical CollegeNanchong 637000Sichuan ProvinceChina Department of Gastrointestinal Surgery Yaan People’s HospitalYaan 625000Sichuan ProvinceChina Department of Gastrointestinal Surgery The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical UniversityChongqing 400010China Department of Thoracic Surgery Nanchong Central HospitalNanchong 637000Sichuan ProvinceChina

BACKGROUND Long non-coding RNAs(lncRNAs) have been shown to be associated with many tumors. However, the specific mechanism of lncRNAs in the occurrence and development of gastric cancer(GC) has not been fully *** To explore the expression level and molecular mechanism of hoxd-AS2 in GC tissues and cells, and analyze its significance in the prognosis of *** Real-time quantitative PCR was used to detect the expression of hoxd-AS2 in 79 pairs of GC tissues and five cell lines. The pc hoxd-AS2 plasmid vector was constructed and transfected into SGC-7901 and SNU-1 GC cells. Matrigel Transwell and wound healing assays were used to confirm the effect of hoxdAS2 on invasion and migration of GC cells. Cell counting kit-8 assay and flow cytometry were used to verify the effect of hoxd-AS2 on the proliferation, cell cycle, and apoptosis of GC cells. The relevant regulatory mechanism between hoxd-AS2 and hoxd8 and PI3K/Akt signaling pathway was verified by Western blot *** The low expression of lncRNA hoxd-AS2 was associated with lymph node metastasis and tumor-node-metastasis stage in GC. In vitro functional experiments demonstrated that overexpression of hoxd-AS2 inhibited GC cell progression. Mechanistic studies revealed that hoxd-AS2 regulated the expression of its nearby gene hoxd8 and inhibited the activity of the PI3K/Akt signaling *** These results indicate that downregulation of hoxd-AS2 significantly promotes the progression of GC cells by regulating hoxd8 expression and activating the PI3K/Akt signaling pathway. hoxd-AS2 may be a novel diagnostic biomarker and effective therapeutic target for GC.

关键词： Long non-coding RNA Gastric cancer hoxd-AS2 hoxd8 PI3K/Akt Progression

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hoxd8基因在人卵巢癌细胞株SKOV3和SKOV3-DDP中的表达及卵巢癌顺铂耐药的机制研究

HOXD8基因在人卵巢癌细胞株SKOV3和SKOV3-DDP中的表达及卵巢癌顺...

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作者：刘达宾福建医科大学

学位级别：硕士

目的：检测同源异型盒基因D8(hoxd8)在人卵巢癌细胞株SKOV3和SKOV3-DDP中的表达，探讨卵巢癌顺铂耐药的机制。方法：体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3及其配对顺铂耐药细胞株SKOV3-DDP，应用XTT比色实验检测SKOV3、SKOV3-DDP细胞株顺铂处理... 详细信息

目的：检测同源异型盒基因D8(hoxd8)在人卵巢癌细胞株SKOV3和SKOV3-DDP中的表达，探讨卵巢癌顺铂耐药的机制。方法：体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3及其配对顺铂耐药细胞株SKOV3-DDP，应用XTT比色实验检测SKOV3、SKOV3-DDP细胞株顺铂处理后的半数抑制浓度(IC50)，并计算耐药指数;半定量RT-PCR及实时荧光定量PCR、Elisa方法检测hoxd8在SKOV3、SKOV3-DDP细胞株中的表达，探讨同源异型盒基因D8与卵巢癌顺铂耐药的关系。结果：1.细胞经不同浓度顺铂处理72小时后，随着顺铂浓度的增加，细胞抑制率增高，显示出明显的剂量依赖关系;耐药细胞株经顺铂作用后，细胞抑制率明显低于敏感株细胞株(p81ug/ml，SKOV3-DDP细胞株顺铂IC50值为9.174±0.24ug/ml，SKOV3-DDP细胞株的耐药指数为3.73，可进行耐药实验。2.半定量RT-PCR实验结果显示，SKOV3细胞株中hoxd8mRNA的表达水平为0.238±0.037，SKOV3-DDP细胞株中hoxd8mRNA的表达水平为0.707±0.026。与SKOV3细胞株比较，SKOV3-DDP细胞株中hoxd8mRNA的相对表达量明显升高，差异有统计学意义(phoxd8mRNA的表达水平为0.1711±0.026，SKOV3-DDP细胞株中hoxd8mRNA的表达水平为0.5761±0.037。与SKOV3细胞株比较，SKOV3-DDP细胞株中hoxd8mRNA的相对表达量明显升高，差异有统计学意义(phoxd8蛋白的表达水平为1584.4±2.08pg/ml， SKOV3-DDP细胞株中hoxd8蛋白的表达水平为4423.3±1.52pg/ml。与SKOV3细胞株比较，SKOV3-DDP细胞株中hoxd8蛋白的表达量明显升高，差异有统计学意义(phoxd8mRNA与hoxd8蛋白在体外培养的卵巢癌细胞株SKOV3及其顺铂耐药株SKOV3-DDP及中均有表达。SKOV3-DDP细胞株中hoxd8的表达明显高于其在SKOV3细胞株中的表达，其表达的升高与卵巢癌细胞顺铂耐药存在明确的相关性。

关键词： hoxd8 卵巢癌顺铂耐药 SKOV3 SKOV3-DDP

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hoxd8基因在结直肠癌中的表达及意义

HOXD8基因在结直肠癌中的表达及意义

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作者：刘风浩大连医科大学

学位级别：硕士

目的研究hoxd8基因在结直肠癌患者中的阳性表达并探讨其阳性表达的临床意义。方法分别收集40例结直肠癌和癌旁正常组织,要求各癌旁正常组织距离癌组织均大于3.0cm,用免疫组织化学SP法分别对各标本hoxd8的表达情况进行检测,针对hoxd8的... 详细信息

目的研究hoxd8基因在结直肠癌患者中的阳性表达并探讨其阳性表达的临床意义。方法分别收集40例结直肠癌和癌旁正常组织,要求各癌旁正常组织距离癌组织均大于3.0cm,用免疫组织化学SP法分别对各标本hoxd8的表达情况进行检测,针对hoxd8的阳性表达结果,分析其与结直肠癌临床病理因素特征的关系。结果本实验hoxd8在癌旁正常组织中表达阳性的仅为10例（16.7%）,而在结直肠癌组织中阳性表达的占32例（53.3%）,差异有统计学意义（p＜0.05）。在结直肠癌组织中hoxd8的表达与病人年龄、性别、淋巴结转移和肿瘤分级情况均无明显关系（p＞0.05）。结论在本实验40例结直肠癌患者中,hoxd8基因在结直肠癌患者中阳性表达明显升高,由此推断hoxd8可能在结直肠癌的发生和发展中起到重要作用。并且,hoxd8的表达与患者性别、年龄、肿瘤分级、肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移无明显关系,提示hoxd8的表达可能与结直肠癌的一般生物学行为无关。hoxd8能否成为结直肠癌治疗的新靶点,为今后结直肠癌的治疗提供新的理论依据,仍待进一步研究。

关键词： hoxd8 结直肠癌免疫组织染色

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长链非编码RNA hoxd-AS2靶向调控hoxd8经由PI3K/Akt信号通路抑制胃癌侵袭转移的实验研究

长链非编码RNA HOXD-AS2靶向调控HOXD8经由PI3K/Akt信号通路抑制...

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作者：姚林川北医学院

学位级别：硕士

目的:探讨长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)hoxd-AS2在胃癌中的表达情况,以及其在胃癌发生发展过程中所扮演的角色,对胃癌细胞生物学行为的影响和具体的调控机制。方法:(1)根据前期芯片结果,筛选出芯片中表达差异较大的hoxd-... 详细信息

目的:探讨长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)hoxd-AS2在胃癌中的表达情况,以及其在胃癌发生发展过程中所扮演的角色,对胃癌细胞生物学行为的影响和具体的调控机制。方法:(1)根据前期芯片结果,筛选出芯片中表达差异较大的hoxd-AS2,再通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)在79例胃癌组织和其对应的癌旁组织、胃癌细胞系及正常胃粘膜细胞中验证hoxd-AS2的表达水平。(2)分析hoxd-AS2表达水平与胃癌患者临床病理特征之间的关系,评估其在胃癌预后中的价值。(3)RT-qPCR和蛋白免疫印迹(Western-blot,WB)检测hoxd8在胃癌组织和细胞中的表达情况,并使用在线数据库预测与hoxd-AS2相关的共表达基因hoxd8,以及其与胃癌患者预后的关系。(4)hoxd-AS2与hoxd8的表达作用关系,通过circlncRNAnet预测与spearman相关性分析明确两者之间的相互作用关系。(5)划痕和Transwell实验验证,过表达hoxd-AS2后对胃癌细胞侵袭转移能力的影响。(6)体外实验中过表达hoxd-AS2,观察靶基因hoxd8,以及PI3K/Akt信号通路的水平变化来探讨hoxd-AS2在胃癌侵袭、转移中的作用及调控机制。结果:(1)在胃癌组织和胃癌细胞中hoxd-AS2表达降低。(2)低表达的hoxd-AS2与胃癌患者淋巴结转移和TNM分期相关,hoxd-AS2的表达水平可以作为影响胃癌侵袭转移的独立风险因素。(3)Kaplan Meier Plotter数据库生存分析结果显示hoxd-AS2低表达的胃癌患者生存时间更短,预后更差。(4)hoxd8mRNA在胃癌组织表达水平明显低于癌旁组织,胃癌细胞中明显低于正常胃粘膜细胞,hoxd8表达水平与hoxd-AS2表达水平呈正相关性,提示hoxd8极可能是hoxd-AS2靶调控基因。(5)使用质粒为载体的pc-hoxd-AS2过表达hoxd-AS2后,明显抑制了胃癌细胞SGC-7901和SNU-1的侵袭和转移能力。(6)同时SGC-7901和SNU-1胃癌细胞中hoxd8与p53蛋白水平明显上调,PI3K/Akt信号通路中关键蛋白PI3K、Akt和MDM2表达水平受抑制。(7)特异性PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002 处理胃癌细胞 SGC-7901 和 SNU-1 后,hoxd-AS2 与 hoxd8表达水平明显增加。结论:(1)hoxd-AS2在胃癌组织及胃癌细胞系中低表达,与胃癌淋巴转移、TNM分期正相关。生存分析显示hoxd-AS2低表达的患者生存时间更短,预后更差。研究结果提示hoxd-AS2可能参与促进了胃癌的侵袭、转移调控。(2)hoxd8在胃癌组织及胃癌细胞系中呈低表达,hoxd-AS2表达水平与hoxd8mRNA表达水平呈正相关,过表达hoxd-AS2后可以上调hoxd8蛋白水平,提示hoxd8是hoxd-AS2靶调控基因。(3)过表达hoxd-AS2后可以抑制PI3K/Akt信号通路的活性,反过来特异性抑制PI3K/Akt信号通路后也可以上调hoxd-AS2表达水平和hoxd8蛋白表达水平,而且均可抑制胃癌细胞侵袭和转移的能力。研究结果提示hoxd-AS2极有可能通过靶向调控hoxd8基因,抑制PI3K/Akt信号通路活性从而抑制胃癌细胞的侵袭和转移。

关键词：长链非编码RNA 胃癌 hoxd-AS2 hoxd8 PI3K/Akt信号通路

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同源异形盒基因D8表达与卵巢癌顺铂耐药的相关性研究

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福建医药杂志 2015年第4期37卷 1-4页

作者：刘达宾孙蓬明宋一一毛晓丹林琳林芬福建省妇幼保健院妇产科福州350001

目的检测同源异型盒基因D8(hoxd8)在人卵巢癌非顺铂耐药株SKOV3和顺铂耐药细胞株SKOV3-DDP细胞株中的表达,探讨卵巢癌顺铂耐药的机制。方法应用细胞活性测定实验(XTT实验)检测SKOV3、SKOV3-DDP细胞株经顺铂处理后的半数抑制浓度,荧光定... 详细信息

目的检测同源异型盒基因D8(hoxd8)在人卵巢癌非顺铂耐药株SKOV3和顺铂耐药细胞株SKOV3-DDP细胞株中的表达,探讨卵巢癌顺铂耐药的机制。方法应用细胞活性测定实验(XTT实验)检测SKOV3、SKOV3-DDP细胞株经顺铂处理后的半数抑制浓度,荧光定量PCR、ELISA检测hoxd8在这两种细胞株中的表达。结果随着顺铂浓度的增加,细胞抑制率增高,显示出明显的剂量依赖关系;SKOV3-DDP细胞株经顺铂作用后,细胞抑制率明显低于SKOV3细胞株。荧光定量PCR及ELISA试验结果显示,与SKOV3细胞株比较,SKOV3-DDP细胞株中hoxd8mRNA及蛋白的相对表达量均明显升高,差异有统计学意义。结论 hoxd8表达的升高与卵巢癌细胞顺铂耐药存在明确的相关性。

关键词： hoxd8 卵巢癌顺铂耐药 SKOV3 SKOV3-DDP

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伴有NUP98重排白血病的临床及分子遗传学研究

伴有NUP98重排白血病的临床及分子遗传学研究

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作者：秦丽莉苏州大学

学位级别：硕士

目的 1.系统分析自1985年至2013年在本实验室进行常规核型分析的102例11p15重排恶性血液病患者,运用荧光原位杂交技术(FISH)从中筛选伴有NUP98重排的病例,并分析11pl5/NUP98重排患者的临床及实验室特征。 2.运用FISH、3’-RACE等技术发... 详细信息

目的 1.系统分析自1985年至2013年在本实验室进行常规核型分析的102例11p15重排恶性血液病患者,运用荧光原位杂交技术(FISH)从中筛选伴有NUP98重排的病例,并分析11pl5/NUP98重排患者的临床及实验室特征。 2.运用FISH、3’-RACE等技术发现并克隆NUP98新融合基因,采用体内外实验研究NUP98新融合基因的生物学功能及致白血病机制。方法 1.102例1lp15重排患者均采用直接法或短期培养法制备染色体,以热变性R显带技术进行核型分析,选取其中有染色体悬液标本保存的患者,应用NUP98双色探针进行FISH验证。按照FAB协作组分型标准对患者进行疾病分类,并分析其临床及实验室特征,对其中17例患者进行随访,进行Kaplan-Meier生存分析。应用聚合酶链反应(PCR)扩增基因组DNA及PCR产物双向测序的方法分析25例NUP98重排患者FLT3-ITD的突变率。 2.通过核型分析及FISH分析发现新的NUP98重排异常,拟通过3’RACE技术克隆其新对手基因。以逆病毒为载体携带新的融合基因在NIH3T3细胞中过表达后,通过CCK-8法绘制生长曲线、集落生成实验等检测NUP98新融合基因对NIH3T3细胞增殖能力的影响。结果 1、伴有11p15/NUP98重排白血病的临床及分子遗传学特征 102例1lp15重排患者中男性46例,女性56例,患者年龄主要集中于40-49岁。白细胞中位值为17×109/L,血红蛋白中位值为71g/L,血小板中位值为37.5×109/L,其中MPN1例(1.0%);MDS10例(9.8%);AML48例(47.1%);CML9例(8.8%);ALL14例(13.7%);AL未分型5例(4.9%);淋巴瘤1例(1.0%);诊断资料丢失14例(13.7%)。102例1lp15重排血液病患者中,t(7;11)(p15;p15)有45例,占44.1%,其中男性18例,女性27例,男女之比：0.67/1,中位年龄21岁(11-76岁),主要集中于20-59岁,t(7;11)(p15;p15)主要见于M1、M2、M4、M5、ALL、MDS、CML-BC中,其中M2发生率最高,达46.7%。对保留染色体悬液的核型检测为或疑似11p15重排的72例患者进行NUP98重排异常的FISH验证,一共有49例(68.06%)FISH阳性病例,其中t(7;11)(p15;p15)核型异常病例有41例,占大多数。17例11p15重排病人中位生存期低于正常核型组,与复杂核型组相仿;其中位生存期低于低危组AML,高于高危组AML,与中危组相仿;较核心结合因子白血病(CBF-AML)组,llpl5重排病人中位生存期较低。但均无统计学差异。采用聚合酶链反应(PCR)扩增基因组DNA及PCR产物双向测序的方法对25例NUP98重排患者进行了FLT3-ITD突变检测,一共有7例患者含有此突变,突变率高达28.0%。 2、新白血病融合基因NUP98-hoxd8的克隆及初步功能研究常规核型分析从一例患者骨髓标本检测到一种新的染色体异常,t(2;11)(q23;p15),荧光原位杂交(FISH)技术证实该核型异常累及了位于11p15的NUP98基因。3’-RACE结果显示,NUP98的对手基因是hoxd8,为NUP98的第12号外显子与hoxd8的第2号外显子发生融合。利用基因克隆技术扩增出NUP98-hoxd8融合基因,构建逆病毒载体质粒MIGR1-GFP-NUP98-hoxd8,采用磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞系,成功建立稳转细胞株。体外实验结果显示,NUP98-hoxd8能够在一定程度上抑制NIH3T3细胞的增殖。结论 1.11pl5/NUP98重排患者主要为女性,且中位年龄偏低,从疾病分布来看,主要发生于髓系疾病,淋系疾病罕见。102例11p15重排血液病患者中,t(7;11)(p15;p15)有45例,占44.1%,其余11p15重排多以单个病例出现。t(7;11)(p15;p15)主要发生于女性,年龄偏低,可见于M1/M2/M4/M5/ALL/MDS/CML-BC中,其中以M2发生率最高,其余疾病类型少见。对于常规核型检测怀疑存在1lpl5重排的患者,可以应用FISH技术加以验证。FLT3-ITD突变在NUP98重排患者中存在高达28.0%的发生率。 2.我们成功构建NUP98-hoxd8融合基因的逆病毒载体,并建立NIH3T3稳转细胞株,为研究NUP98-hoxd8融合基因的功能奠定了基础。体外实验结果表明,NUP98-hoxd8能够在一定程度上抑制NIH3T3细胞的增殖。我们将在建立NUP98-hoxd8融合基因稳转细胞株的基础上,进一步对其致白血病机制进行深入研究。

关键词： 11p15重排 NUP98 hoxd8 融合基因白血病

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MicroRNA-335-5p在胰腺癌细胞AsPC-1中增殖与转移的作用及机制研究

MicroRNA-335-5p在胰腺癌细胞AsPC-1中增殖与转移的作用及机制研究

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作者：林敏杰绍兴文理学院

学位级别：硕士

第一部分:MicroRNA-335-5p在胰腺癌组织中的表达情况及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。目的:分析microRNA-335-5p在胰腺癌组织中的表达情况及其与临床预后的关系。探讨microRNA-335-5p对胰腺癌细胞系As PC-1增殖、迁移及侵袭的影响。... 详细信息

第一部分:MicroRNA-335-5p在胰腺癌组织中的表达情况及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。目的:分析microRNA-335-5p在胰腺癌组织中的表达情况及其与临床预后的关系。探讨microRNA-335-5p对胰腺癌细胞系As PC-1增殖、迁移及侵袭的影响。方法:(1)通过公共数据库GEO和TCGA分析胰腺癌组织和正常组织中microRNA-335-5p的差异表达情况以及表达量与预后的相关性。(2)通过CCK8实验、Ed U细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭等功能实验观察过表达或抑制microRNA-335-5p表达后对胰腺癌细胞As PC-1的影响。结果:(1)通过分析GEO中的数据集GSE71533和公共数据库TCGA显示,胰腺癌组织中microRNA-335-5p的表达量与正常组织相比显著下调(phoxd8调控胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究。目的:寻找microRNA-335-5p的靶基因并进行验证,揭示microRNA-335-5p调控胰腺癌细胞系As PC-1增殖、迁移及侵袭的潜在分子机制。方法:(1)利用生物信息分析网站(Target Scan、miRDB、DIANA)预测microRNA-335-5p靶基因。(2)运用双荧光素酶报告实验验证microRNA-335-5p与靶基因hoxd8的靶向关系。(3)Western blot和q RT-PCR实验检测microRNA-335-5p表达对靶基因hoxd8蛋白质和m RNA水平的影响。(4)相关功能实验观察抑制hoxd8表达对胰腺癌细胞As PC-1增殖、迁移和侵袭能力的影响。(5)根据rescue实验策略对胰腺癌细胞As PC-1在增殖、迁移和侵袭能力相关功能实验进行验证,以揭示microRNA-335-5p潜在的分子机制。结果:(1)根据Target Scan、miRDB、DIANA信息筛选得到40个候选靶基因,其中hoxd8在三个生物信息分析库中综合得分最高,因此选择hoxd8进一步实验。(2)双荧光素酶报告实验显示,microRNA-335-5p直接靶向hoxd8(phoxd8 m RNA及蛋白的表达(phoxd8能够显著抑制胰腺癌细胞As PC-1增殖、迁移和侵袭的能力(phoxd8后可以减弱microRNA-335-5p抑制物对胰腺癌细胞As PC-1的促癌作用(phoxd8是microRNA-335-5p的靶基因之一,并且microRNA-335-5p通过负性靶向调控基因hoxd8的表达。(2)抑制hoxd8表达可以显著降低胰腺癌细胞As PC-1生长增殖、迁移和侵袭的能力。(3)MicroRNA-335-5p通过靶向调控hoxd8基因表达进而抑制胰腺癌细胞As PC-1的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。

关键词：胰腺癌微小RNA-335-5p hoxd8

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