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CRISPR/Cas9技术联合脂质体转染子宫内膜癌细胞单质粒基因敲除方法首次编辑免疫相关基因HLA-DRA

中国组织工程研究 2023年第15期27卷 2356-2362页

作者：蔡波李晓晓张凌寒刘彦星毛跟红郑州大学医学科学院河南省郑州市450014 郑州大学第二附属医院河南省郑州市450014

背景:HLA-DR基因异常表达与多种肿瘤的进展及预后相关,采用CRISPR/Cas9技术编辑子宫内膜癌HLA-DRA基因的研究目前国内外尚未见报道。目的:利用CRISPR/Cas9技术对hec-1-a细胞的HLA-DRA基因靶向敲除,检测其敲除效率,并初步探索HLA-DRA基... 详细信息

背景:HLA-DR基因异常表达与多种肿瘤的进展及预后相关,采用CRISPR/Cas9技术编辑子宫内膜癌HLA-DRA基因的研究目前国内外尚未见报道。目的:利用CRISPR/Cas9技术对hec-1-a细胞的HLA-DRA基因靶向敲除,检测其敲除效率,并初步探索HLA-DRA基因的功能。方法:根据HLA-DRA基因序列,针对HLA-DRA外显子设计单链向导RNA(sgRNA),分别将sgRNA、CRISPR/Cas9、增强绿色荧光蛋白和嘌呤霉素抗性克隆至YKO载体中,通过脂质体将sgRNA表达质粒转染到hec-1-a细胞中。根据荧光表达,观察评估sgRNA敲除效果后,使用表达sgRNA的质粒进行转染,用最佳浓度的嘌呤霉素筛选,获得稳定的绿色荧光蛋白阳性表达细胞后,进行PCR、基因测序、转录组测序。结果与结论:经转染和嘌呤霉素筛选后,获得稳定表达绿色荧光蛋白的hec-1-a细胞,对其进行Sanger测序分析,结果显示hec-1-a细胞中HLA-DRA第一号外显子基因被定向敲除,对转录组测序结果进行差异基因筛选,根据筛选所得686个差异表达基因进行GO富集分析和KEGG富集分析,构建蛋白互作网络图,通过对肿瘤增殖分化有关差异基因分析发现COL3A1、BCL2A1、TACSTD2、CXCR2等基因表达上调,GNG11、BMP7、IL1RN、PLEK2、CDH6等基因表达下调。结果可见,HLA-DRA基因参与了多种器官、组织和细胞的功能调控过程。此外,HLA-DRA基因可能通过2种途径(上调/下调)调控子宫内膜腺癌细胞的增殖、分化、迁移及侵袭过程。此研究建立了CRISPR/Cas9技术联合脂质体转染子宫内膜癌细胞的单质粒基因敲除方法,首次敲除子宫内膜癌免疫相关基因HLA-DRA,为子宫内膜癌免疫治疗的研究奠定实验基础。

关键词： CRISPR/Cas9 HLA-DRA 基因敲除 hec-1-a 转录组测序

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三氧化二砷抑制子宫内膜癌生长的体内外实验研究

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肿瘤 2009年第7期29卷 616-619页

作者：胡美丽李利王晓玲顾国琴齐润辉康山河北医科大学第四医院妇产科石家庄050011 河北医科大学第四医院病理科石家庄050011 河北医科大学第四医院检验科石家庄050011

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，ATO）对人子宫内膜癌hec-1-a细胞生长的抑制作用。方法：采用MTT法比较ATO、孕酮、安宫黄体酮（medroxyprogesterone acetate，MPA）和顺铂（cisplatin，CDDP）对hec-1-a细胞的抑制作用，应用... 详细信息

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，ATO）对人子宫内膜癌hec-1-a细胞生长的抑制作用。方法：采用MTT法比较ATO、孕酮、安宫黄体酮（medroxyprogesterone acetate，MPA）和顺铂（cisplatin，CDDP）对hec-1-a细胞的抑制作用，应用FCM和DNA电泳检测ATO对细胞周期和细胞凋亡的影响。建立裸鼠人子宫内膜癌移植瘤动物模型，随机分为ATO低（4mg·kg^-1·d^-1）、中（6mg·kg^-1·d^-1）、高（8mg·kg^-1·d^-1）剂量组、阳性对照CDDP组（3mg·kg^-1·d^-1）及阴性对照组，腹腔连续给药14d，计算肿瘤体积和肿瘤质量抑制率。结果：1-20μmol／L ATO和CDDP可明显抑制细胞生长，且ATO对细胞的抑制作用强于CDDP。5μmol／L ATO作用后可导致细胞凋亡，并使细胞周期阻滞于S和G2／M期。低、中、高剂量ATO组和CDDP组的肿瘤体积抑制率分别为50.97％、75.58％、56.92％和52.23％，肿瘤质量抑制率分别为10.15％、29.33％、16.67％和14.69％，与阴性对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：ATO可抑制hec-1-a细胞及鼠荷入子宫内膜癌移植瘤的生长，有望成为治疗子宫内膜癌的新型药物。

关键词：子宫内膜肿瘤药物疗法小鼠裸三氧化二砷细胞 hec-1-a

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