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厚朴酚联合5-FU对人结肠癌hct-8细胞增殖和SFRP-4表达的影响

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肿瘤 2014年第12期34卷 1097-1101页

作者：何胜利沈婕徐选福胡南华蔡芸芸复旦大学附属肿瘤医院闵行分院肝胆胰肿瘤中西医结合科上海200240 同济大学附属上海市第十人民医院消化科上海200072

目的 :探讨厚朴酚联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对人结肠癌hct-8细胞增殖和分泌型卷曲蛋白4(secreted frizzled-related protein-4,SFRP-4)表达的影响。方法 :分别采用厚朴酚、5-FU和厚朴酚联合5-F U处理结肠癌hct-8细胞后,MTT法检测细胞的增殖情况,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡的形态变化,FCM法检测细胞的周期分布,蛋白质印迹法检测细胞中SFRP-4和β-catenin蛋白的表达水平。结果 :厚朴酚、5-F U和厚朴酚联合5-FU均可抑制hct-8细胞的增殖(Phct-8细胞出现明显的细胞凋亡的形态变化,联合用药组细胞凋亡的形态变化更明显。5-F U或厚朴酚联合5-F U作用于hct-8细胞后,G0/G1期细胞所占比例增加,S期和G2/M期细胞所占比例下降(P均hct-8细胞中SFRP-4的表达水平明显高于未用药处理的空白对照组(Phct-8细胞中β-catenin的表达水平显著低于5-FU组和厚朴酚组(Phct-8细胞的增殖,增加G0/G1期细胞所占比例,其机制可能与调节hct-8细胞中SFRP-4和β-catenin蛋白的表达水平有关。

关键词：结肠肿瘤厚朴酚氟尿嘧啶分泌型卷曲蛋白4 hct-8细胞

迷迭香酸对人结肠癌hct-8细胞增殖和凋亡的影响及分子机制研究

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中草药 2018年第13期49卷 3051-3055页

作者：娄诤陆仲夏俞雅蓉王大维浙江中医药大学第二临床医学院浙江杭州310053 浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053 浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053

目的研究迷迭香酸对人结肠癌hct-8细胞增殖和凋亡的影响,并探究相关机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度迷迭香酸作用不同时间后hct-8细胞的增殖情况;根据CCK-8法结果确定迷迭香酸15、45、75μmol/L作用72 h,考察hct-8细胞的凋亡和相关... 详细信息

目的研究迷迭香酸对人结肠癌hct-8细胞增殖和凋亡的影响,并探究相关机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度迷迭香酸作用不同时间后hct-8细胞的增殖情况;根据CCK-8法结果确定迷迭香酸15、45、75μmol/L作用72 h,考察hct-8细胞的凋亡和相关基因及蛋白的表达;通过流式细胞术检测hct-8细胞的凋亡率;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测p53、Bax和Puma基因的m RNA表达;通过Western blotting法检测p53、Bax、Puma和active Caspase-9的蛋白表达水平。结果迷迭香酸能够抑制hct-8细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。15、45μmol/L的迷迭香酸主要诱导hct-8细胞早期凋亡(Phct-8细胞晚期凋亡(Phct-8细胞具有明显的增殖抑制作用,并且是通过诱导凋亡实现的,促凋亡蛋白p53、Puma、Bax和active Caspase-9诱导了凋亡的发生。

关键词：迷迭香酸 hct-8细胞凋亡 p53 Puma Bax active Caspase-9

黑水虻抗菌肽HI-3对人结肠癌hct-8细胞谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路的影响

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昆虫学报 2021年第9期64卷 1041-1049页

作者：高嘉敏许晓燕胡紫媛陈映丹孙虹霞杨愈丰夏嫱遵义医科大学珠海校区广东珠海519041

【目的】研究黑水虻Hermetia illucens抗菌肽HI-3对人结肠癌hct-8细胞氨基酸代谢的影响,以丰富对其抑癌机理的认识。【方法】采用CCK-8法测定不同浓度(80,160和320μg/mL)抗菌肽HI-3对hct-8细胞的抑制率;利用GC-MS进行hct-8细胞代谢物测... 详细信息

【目的】研究黑水虻Hermetia illucens抗菌肽HI-3对人结肠癌hct-8细胞氨基酸代谢的影响,以丰富对其抑癌机理的认识。【方法】采用CCK-8法测定不同浓度(80,160和320μg/mL)抗菌肽HI-3对hct-8细胞的抑制率;利用GC-MS进行hct-8细胞代谢物测定,通过基于R软件的通路分析找出氨基酸含量差异最显著的氨基酸代谢通路并筛选出该通路靶标酶。320μg/mL HI-3处理hct-8细胞后,利用酶活性检测试剂盒测定靶标酶谷氨酰胺酶(GLS)活性;利用RT-qPCR和Western blot技术分别对hct-8细胞的GLS基因进行mRNA及蛋白表达水平的测定;利用生化试剂盒和ELISA试剂盒检测hct-8细胞内谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路涉及的重要代谢物谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸(Glu)、谷胱甘肽(GSH)、α-酮戊二酸(α-KG)和ATP含量的变化。【结果】浓度为80,160和320μg/mLHI-3对hct-8细胞的抑制率分别为33.85%±3.50%,46.26%±0.90%和55.53%±1.70%,且抑制率随HI-3浓度升高而增大。320μg/mL HI-3处理对谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路的影响最大,其中氨基酸代谢物含量与阴性对照组(0μg/mL HI-3)相比差异最为显著;这一通路中的靶标酶GLS活性及其GLS的mRNA和蛋白表达水平均极显著低于阴性对照组;另外与此通路相关的重要代谢物Gln,Glu,GSH,α-KG和ATP含量与阴性对照组相比亦显著减少。【结论】浓度为320μg/mL黑水虻抗菌肽HI-3对hct-8细胞谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路影响最为显著,并能通过阻碍该通路来显著抑制hct-8细胞的增殖。

关键词：黑水虻抗菌肽人结肠癌 hct-8细胞细胞代谢组学谷氨酰胺谷氨酸代谢通路

微小隐孢子虫感染hct-8细胞模型的建立及不同阶段虫体形态的观察

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中国兽医科学 2012年第2期42卷 111-118页

作者：张国恩米荣升周鹏黄燕秦培兰呼高伟曹薇陈兆国中国农业科学院、上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室、中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241

利用人回盲肠癌(hct-8)细胞作为感染细胞,采用不同的接种细胞浓度和培养血清浓度进行培养,观察细胞的生长状况;在培养细胞中加入1×105个经活力检测的微小隐孢子虫卵囊,培养72h后用荧光标记的隐孢子虫卵囊、子孢子染色试剂盒Crypt-a-Glo... 详细信息

利用人回盲肠癌(hct-8)细胞作为感染细胞,采用不同的接种细胞浓度和培养血清浓度进行培养,观察细胞的生长状况;在培养细胞中加入1×105个经活力检测的微小隐孢子虫卵囊,培养72h后用荧光标记的隐孢子虫卵囊、子孢子染色试剂盒Crypt-a-Glo和Sporo-Glo进行染色,观察不同发育阶段的隐孢子虫形态。结果显示,在六孔培养板中接种10×105个细胞后,24h后长成80%～100%单细胞层,可以用来接种微小隐孢子虫。培养72h后观察到了隐孢子虫各个阶段虫体的形态。结果表明,成功建立了微小隐孢子虫感染hct-8细胞模型。

关键词：微小隐孢子虫体外感染 hct-8细胞培养形态

微小隐孢子虫Ⅱd亚型早期感染对hct-8细胞TLRs的影响

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中国人兽共患病学报 2019年第12期35卷 1069-1074页

作者：王臣荣张振杰张璐张贵玲牛子文张龙现张素梅河南农业大学牧医工程学院

目的研究微小隐孢子虫Ⅱd亚型(中国流行株)感染对hct-8细胞TLRs的影响。方法微小隐孢子虫Ⅱd亚型感染hct-8细胞4 h及12 h后,提取细胞RNA,利用qRT-PCR方法检测TLRs的表达水平,并通过生物信息学分析表达差异显著的miRNAs与TLRs的关系。结... 详细信息

目的研究微小隐孢子虫Ⅱd亚型(中国流行株)感染对hct-8细胞TLRs的影响。方法微小隐孢子虫Ⅱd亚型感染hct-8细胞4 h及12 h后,提取细胞RNA,利用qRT-PCR方法检测TLRs的表达水平,并通过生物信息学分析表达差异显著的miRNAs与TLRs的关系。结果 hct-8细胞表达TLR1-TLR10 10种TLRs,并且微小隐孢子虫Ⅱd亚型早期感染(4 h和12 h)导致TLR2和TLR4表达量较对照组上调有统计学意义,其它8种TLRs较对照组表达变化无统计学意义。生物信息学分析表明TLR2和TLR4并不是表达差异显著的miRNAs靶基因,但这些表达差异显著的miRNAs可以靶向27个TLRs信号通路基因。结论 TLR2和TLR4在微小隐孢子虫Ⅱd亚型感染hct-8细胞中可能发挥着一定的作用,差异表达miRNAs的预测靶向中有TLR信号通路相关基因。

关键词：微小隐孢子虫Ⅱd亚型 hct-8细胞 TLRs miRNAs

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微小隐孢子虫在hct-8细胞内的培养

中国人兽共患病学报 2016年第8期32卷 706-710页

作者：朱惠丽刘利敏王臣荣张素梅张龙现王荣军河南农业大学牧医工程学院郑州450002 河南科技学院动物科学学院新乡453003

目的将人回盲肠癌(hct-8)细胞作为微小隐孢子虫IId亚型体外感染对象,观察虫体在细胞中的生长发育过程。方法将纯化的隐孢子虫IId亚型感染hct-8细胞,通过Giemsa染色法观察微小隐孢子虫IId亚型在hct-8细胞中发育过程,运用PCR方法对不同感... 详细信息

目的将人回盲肠癌(hct-8)细胞作为微小隐孢子虫IId亚型体外感染对象,观察虫体在细胞中的生长发育过程。方法将纯化的隐孢子虫IId亚型感染hct-8细胞,通过Giemsa染色法观察微小隐孢子虫IId亚型在hct-8细胞中发育过程,运用PCR方法对不同感染时间点的细胞样品DNA进行检测。结果在感染后72h内,隐孢子虫出现连续发育阶段,包括脱囊、子孢子、滋养体、裂殖体、配子体、合子和卵囊;PCR的检测结果显示,在感染细胞96h仍能检测到虫体DNA。结论通过hct-8细胞,观察到微小隐孢子虫IId亚型的完整的生长发育过程,为抗隐孢子虫药物的筛选提供理论基础,亦可成为微小隐孢子虫IId亚型卵囊体外扩增的方法。

关键词：微小隐孢子虫感染模型 hct-8细胞培养

苯乙酸对结直肠癌hct-8细胞增殖抑制及同源盒基因表达的影响

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中华实验外科杂志 2005年第11期22卷 1350-1352页

作者：任辉张研房学东赵吉生田宇吉林大学中日联谊医院基本外科长春130033 吉林大学中日联谊医院神经外科长春130033

目的探讨苯乙酸(PA)对结直肠癌hct-8细胞株细胞增殖及同源盒(HOX)基因表达的影响.方法应用噻唑蓝(MTT)比色法,以1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mmol/L的PA作用于hct-8细胞,分别于24、48、72 h对细胞增殖进行检测.根据引物的不同,将已知的22种... 详细信息

目的探讨苯乙酸(PA)对结直肠癌hct-8细胞株细胞增殖及同源盒(HOX)基因表达的影响.方法应用噻唑蓝(MTT)比色法,以1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mmol/L的PA作用于hct-8细胞,分别于24、48、72 h对细胞增殖进行检测.根据引物的不同,将已知的22种HOX基因分为3组(P1、P2、P3),应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测应用PA前后3组HOX基因mRNA的表达水平.HOX基因(组)表达水平用基因(组)与β肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示.结果 1.0～5.0 mmol/L PA作用hct-8细胞24～72 h,随着PA浓度的增加或作用时间的延长,细胞生长抑制率明显增加,PA作用24 h为5.1%～24.3%,48 h为16.7%～72.3%,72 h为30.2%～93.4%.RT-PCR法检测,结直肠癌hct-8细胞中P1组HOX基因表达(0.770 1±0.088 3)明显强于P2组(0.122 1±0.078 2)、P3组(0.180 6±0.081 1,P8 1±0.083 6)显著减弱,P2、P3组HOX基因表达(0.394 1±0.081 9)、(0.560 1±0.073 6)显著增强,与用药前比较,差异有统计学意义(Phct-8细胞的增殖;PA对HOX基因具有明显的调控作用,HOX基因有望成为结直肠癌基因治疗靶点.

关键词：苯乙酸结直肠癌基因表达 hct-8细胞细胞增殖抑制同源盒半定量逆转录-聚合酶链反应 PCR法检测 HOX基因细胞生长抑制率

旋毛虫对BALB/c小鼠体内人结肠癌hct-8细胞的作用

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中国生物制品学杂志 2008年第4期21卷 285-287页

作者：李霞张国才张西臣李建华杨举宫鹏涛徐鹏吉林大学畜牧兽医学院长春130062

目的观察旋毛虫感染对BALB/c小鼠体内人结肠癌hct-8细胞生长的作用。方法用不同剂量的旋毛虫感染BALB/c小鼠,并在不同时间接种hct-8细胞,荷瘤20 d后解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量,计算抑瘤率,并检测T淋巴细胞亚群。结果各实验... 详细信息

目的观察旋毛虫感染对BALB/c小鼠体内人结肠癌hct-8细胞生长的作用。方法用不同剂量的旋毛虫感染BALB/c小鼠,并在不同时间接种hct-8细胞,荷瘤20 d后解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量,计算抑瘤率,并检测T淋巴细胞亚群。结果各实验组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组,CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值、未长瘤小鼠比例、小鼠死亡率和抑瘤率均显著高于对照组;先接虫后荷瘤组抑瘤效果优于先荷瘤后接虫组。结论旋毛虫对BALB/c小鼠体内的人结肠癌hct-8细胞的生长有一定的抑制作用。

关键词：旋毛虫结肠癌 hct-8细胞抑制效果

RNA干扰YWHAZ基因对结肠癌hct-8细胞增殖的影响

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吉林大学学报（医学版） 2015年第2期41卷 307-310,I0005页

作者：张成才宋艳艳周梦娇崔志倩张西臣邢沈阳吉林大学动物科学学院动物科学系吉林长春130062 吉林大学第二医院肾病内科吉林长春130041 吉林大学动物医学学院预防兽医学系吉林长春130062

目的:探讨中RNA干扰YWHAZ基因对结肠癌hct-8细胞增殖的影响,阐明其作用机制。方法:构建靶向基因YWHAZ的siRNA载体重组质粒pGPU6/GFP/Neo-YWHAZ-792、pGPU6/GFP/NeoYWHAZ-733、pGPU6/GFP/Neo-YWHAZ-612和pGPU6/GFP/Neo-YWHAZ-505作为RNA干扰质粒组,同时设立阴性对照质粒组(pGPU6/GFP/Neo-shNC质粒);采用荧光定量PCR检测YWHAZ mRNA的表达水平和表达抑制率;采用MTT法检测hct-8细胞的增殖率。结果:倒置荧光显微镜下观察,细胞转染率为60%。荧光定量PCR检测,RNA干扰组YWHAZ mRNA表达水平低于阴性对照组(P86%。MTT检测,与阴性对照组比较,RNA干扰质粒组细胞增殖率明显降低(P细胞增殖率为68.75%。结论:干扰YWHAZ可抑制该基因的转录,并抑制hct-8细胞的增殖。

关键词： YWHAZ基因结肠肿瘤 hct-8细胞 RNA干扰