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中国兽医学报 2023年第5期43卷 960-963,970页

作者：蒋文明刘朔李金平彭程尹馨于晓慧李阳王静静刘华雷中国动物卫生与流行病学中心农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方)山东青岛266032

为建立特异、灵敏的h5亚型高致病性禽流感病毒(high pathogenicity avian influenza virus,hPAIV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,根据GISAID和GenBank公布的h5亚型hPAIVs hA基因的核苷酸序列,设计并合成引物和探针,对反应体系和条件进行优化,建立针对h5亚型hPAIVs的ddPCR检测方法,并对该方法的特异性、重复性以及敏感性进行评估。结果显示,引物探针浓度为900 nmol/L和250 nmol/L、退火温度为55℃、升降温速率为2.0℃/s时ddPCR反应效率最高。该方法可特异性检测h5亚型hPAIVs,对h9N2、h7N9等常见禽病病原均不能检出。该方法对标准品最低检测限为1.97拷贝/μL,敏感性比qPCR方法高10倍。组内和组间重复性试验的变异系数均小于5%。对80份临床样品检测结果显示,与金标准方法的符合率为100%。本研究建立的ddPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,为h5亚型hPAIVs的诊断和检测以及精准防控提供了重要技术支撑。

关键词：禽流感病毒 h5亚型高致病性禽流感病毒微滴式数字PCR

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h5亚型高致病性禽流感病毒hA基因重组新城疫病毒活载体疫苗接种后气管黏膜损伤的研究

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黑龙江畜牧兽医 2010年第1期 7-10页

作者：董俊斌马学恩步志高内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了研究h5亚型高致病性禽流感病毒hA基因重组新城疫病毒活载体疫苗[rLa Sota-hA(GD)]的免疫机理,用rLa Sota-hA(GD)免疫2日龄SPF雏鸡,分别在接种后的1,3,5,10,15,18天取气管进行电镜、光镜观察,利用免疫组化染色(IhC)方法检测病毒在气... 详细信息

为了研究h5亚型高致病性禽流感病毒hA基因重组新城疫病毒活载体疫苗[rLa Sota-hA(GD)]的免疫机理,用rLa Sota-hA(GD)免疫2日龄SPF雏鸡,分别在接种后的1,3,5,10,15,18天取气管进行电镜、光镜观察,利用免疫组化染色(IhC)方法检测病毒在气管内的分布。结果表明:接种rLa Sota-hA(GD)后第1天纤毛细胞有脱纤毛现象,杯状细胞破碎,黏液成分增多,黏膜下层的纤维裸露在表面上,并可看到纤毛细胞的纤毛上有球形粒子,杯状细胞、基细胞大量增生;接种后第18天纤毛细胞脱纤毛区域进一步增大。接种后第3天黏膜下层水肿,淋巴细胞、粒细胞、浆细胞浸润,黏膜上皮形成空泡状,表层由数层不成熟的细胞组成;接种后第10天腺体腔闭塞。免疫组化染色可见气管固有层细胞呈阳性反应,棕色颗粒出现在胞浆中。结果说明气管黏膜的损伤是机体重要的防御机制和免疫机制的表现。

关键词： h5亚型高致病性禽流感病毒 hA基因重组新城疫病毒气管黏膜损伤

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h5亚型高致病性禽流感病毒流行特点及其防控

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中国兽医杂志 2020年第2期56卷 5-8页

作者：翟新验刘林青李婷张淼洁杜建张倩付雯王羽新中国动物疫病预防控制中心北京朝阳100125

h5亚型高致病性禽流感的发生给养禽业造成了严重损失,目前h5N6、h5N1成为主要的流行亚型,优势流行的hA分支在一定时期内呈现动态变化,且一直处于不断变异和进化之中,给我国防控工作带来了很大的挑战。本文通过分析近年h5亚型高致病性禽... 详细信息

h5亚型高致病性禽流感的发生给养禽业造成了严重损失,目前h5N6、h5N1成为主要的流行亚型,优势流行的hA分支在一定时期内呈现动态变化,且一直处于不断变异和进化之中,给我国防控工作带来了很大的挑战。本文通过分析近年h5亚型高致病性禽流感发生情况,以及h5亚型病毒的流行特点、进化过程,进而提出加强风险环节监测、开展病原特性研究、持续做好免疫工作和落实生物安全控制措施等防控建议。

关键词： h5亚型高致病性禽流感病毒流行特点防控

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hA和NA匹配度对h5亚型高致病性禽流感假病毒影响的研究

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中国预防兽医学报 2023年第7期45卷 665-671页

作者：李涵冰李树东常小艳杨学莲侯喜林王桂芹余丽芸黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 中科南京生命健康高等研究院江苏南京211135

为研究不同h5亚型高致病性禽流感病毒(h5 hPAIV)的hA和NA匹配度对流感假病毒组装和功能的影响,本研究将5株h5 hPAIV的hA和NA基因节段分别克隆于pCMV/R载体,构建3个hA和5个NA重组质粒,两两随机组合后将hA、NA质粒与pCMV/RΔ8.9质粒、p hR... 详细信息

为研究不同h5亚型高致病性禽流感病毒(h5 hPAIV)的hA和NA匹配度对流感假病毒组装和功能的影响,本研究将5株h5 hPAIV的hA和NA基因节段分别克隆于pCMV/R载体,构建3个hA和5个NA重组质粒,两两随机组合后将hA、NA质粒与pCMV/RΔ8.9质粒、p hR-CMV-Luc质粒构成4质粒系统,利用磷酸钙法将4个质粒转染hEK293T细胞,检测各细胞培养上清液血凝效价,结果显示:有3个上清液无血凝效价,其余12个上清液的血凝效价在100 hAU/m L~400 hAU/m L,表明获得12株具有血凝效价的流感假病毒。超速离心后获得浓缩假病毒,通过western blot检测假病毒hA蛋白的表达,结果显示各假病毒均在75 ku、50 ku和25 ku有特异性条带。利用各假病毒分别感染MDCK.1细胞60 h后裂解细胞,采用荧光素酶试验检测假病毒的相对荧光素酶活性(RLA),结果显示各假病毒RLA在5.0×10~1~4.5×10~5不等。上述结果首次表明不同h5 hPAIV的hA和NA相互匹配会对假病毒的血凝效价和相对荧光酶活性(RLA)造成影响。本研究为后续流感病毒灭活疫苗制备及抗病毒药物的研发奠定基础。

关键词： h5亚型高致病性禽流感病毒假病毒 hA NA

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