H5亚型高致病性禽流感病毒微滴式数字PCR检测方法的建立与应用

作     者：蒋文明 刘朔 李金平 彭程 尹馨 于晓慧 李阳 王静静 刘华雷 JIANG Wenming;LIU Shuo;LI Jinping;PENG Cheng;YIN Xin;YU Xiaohui;LI Yang;WANG Jingjing;LIU Hualei

作者机构：中国动物卫生与流行病学中心农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方)山东青岛266032 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第43卷第5期

页      面：960-963,970页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：“十四五”国家重点研发计划资助项目(2021YFD1800201) 

主　　题：禽流感病毒 H5亚型高致病性禽流感病毒 微滴式数字PCR 

摘      要：为建立特异、灵敏的H5亚型高致病性禽流感病毒(high pathogenicity avian influenza virus,HPAIV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,根据GISAID和GenBank公布的H5亚型HPAIVs HA基因的核苷酸序列,设计并合成引物和探针,对反应体系和条件进行优化,建立针对H5亚型HPAIVs的ddPCR检测方法,并对该方法的特异性、重复性以及敏感性进行评估。结果显示,引物探针浓度为900 nmol/L和250 nmol/L、退火温度为55℃、升降温速率为2.0℃/s时ddPCR反应效率最高。该方法可特异性检测H5亚型HPAIVs,对H9N2、H7N9等常见禽病病原均不能检出。该方法对标准品最低检测限为1.97拷贝/μL,敏感性比qPCR方法高10倍。组内和组间重复性试验的变异系数均小于5%。对80份临床样品检测结果显示,与金标准方法的符合率为100%。本研究建立的ddPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,为H5亚型HPAIVs的诊断和检测以及精准防控提供了重要技术支撑。