检索结果-南通市图书馆

National Science Review 2022年第1期9卷 47-55页

作者： Xiaopeng Wan Jiqing Li Yupeng Wang Xiaofei Yu Xijun He Jianzhong Shi Guohua Deng Xianying Zeng Guobin Tian Yanbing Li Yongping Jiang Yuntao Guan Chengjun Li Feng Shao Hualan Chen State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Veterinary Research Institute Chinese Academy of Agricultural Sciences National Institute of Biological Sciences

The H7 N9 influenza virus emerged in China in 2013,causing more than 1560 human infections,39% of which were fatal.A ’cytokine storm’ in the lungs of H7 N9 patients has been linked to a poor prognosis and death;however,the underlying mechanism that triggers the cytokine storm is unknown.Here,we found that efficient replication of the H7 N9 virus in mouse lungs activates Gasdermin E(GSDMe)-mediated pyroptosis in alveolar epithelial cells,and that the released cytosolic contents then trigger a cytokine storm.Knockout of Gsdme switched the manner of death of A549 and human primary alveolar epithelial cells from pyroptosis to apoptosis upon H7 N9 virus infection,and Gsdme knockout mice survived H7 N9 virus lethal infection.Our findings reveal that GSDMe activation is a key and unique mechanism for the pulmonary cytokine storm and lethal outcome of H7 N9 virus infection and thus opens a new door for the development of antivirals against the H7 N9 virus.

关键词： H7N9 virus cytokine storm Gasdermin E pyroptosis

Gasdermin E在结直肠癌发生、发展中的作用及研究进展

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

临床与实验病理学杂志 2021年第11期37卷 1352-1354页

作者：罗雍猷姬菩忠杨艳丽刘斌中国人民解放军联勤保障部队第940医院病理科兰州730000 甘肃中医药大学病理学教研室兰州730000

Gasdermin E是gasdermin家族中的一员,已有研究表明Gasdermin E与多种肿瘤的发生、发展密切相关。目前,其相关分子机制尚不清楚,有待进一步分析。该文现就Gasdermin E在结直肠癌中的研究进展作一综述。

关键词：结直肠肿瘤 Gasdermin E 细胞焦亡机制文献综述

A high-throughput Gaussia luciferase reporter assay for screening potential Gasdermin E activators against pancreatic cancer

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Acta Pharmaceutica Sinica B 2023年第10期13卷 4253-4272页

作者： Yang Liu Xiaowei Zhang Ping Zhang Tingting He Weitao Zhang Dingyuan Ma Ping Li Jun Chen State Key Laboratory of Natural Medicines China Pharmaceutical UniversityNanjing 210009China Department of Pharmacognosy School of Traditional Chinese PharmacyChina Pharmaceutical UniversityNanjing 211198China Department of Prenatal Diagnosis Nanjing Maternity and Child Health Care HospitalWomen’s Hospital of Nanjing Medical UniversityNanjing 210004China

It is discovered that activated caspase-3 tends to induce apoptosis in Gasdermin E(GSDMe)-deficient cells,but pyroptosis in GSDMe-sufficient cells.The high GSDMe expression and apoptosis resistance of pancreatic ductal adenocarcinoma(PDAC)cells shed light on another attractive strategy for PDAC treatment by promoting pyroptosis.Here we report a hGLuc-hGSDMe-PCA system for high-throughput screening of potential GSDMe activators against PDAC.This screening system neatly quantifies the oligomerization of GSDMe-N to characterize whether pyroptosis occurs under the stimulation of chemotherapy drugs.Based on this system,ponatinib and perifosine are screened out from the FDA-approved anti-cancer drug library containing 106 compounds.Concretely,they exhibit the most potent luminescent activity and cause drastic pyroptosis in PDAC cells.Further,we demonstrate that perifosine suppresses pancreatic cancer by promoting pyroptosis via caspase-3/GSDMe pathway both in vitro and in vivo.Collectively,this study reveals the great significance of hGLuc-hGSDMe-PCA in identifying compounds triggering GSDMe-dependent pyroptosis and developing promising therapeutic agents for PDAC.

关键词： Pyroptosis Caspase-3 Gasdermin E Pancreatic ductal adenocarcinoma hGLuc-hGSDMe-PCA High-throughput screening Ponatinib Perifosine

Gasdermin E多肽抑制剂对卵巢癌化疗诱导肠道损伤的改善作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国临床医学 2022年第1期29卷 35-41页

作者：李婷婷刘申平杜明复旦大学附属妇产科医院妇产科上海200011

目的观察Gasdermin E(GSDMe)多肽抑制剂对顺铂诱导的卵巢癌小鼠肠道损伤的影响。方法采用针对半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)在GSDMe剪切位点的多肽抑制剂Z-DMLD-FMK,将其作用于接受顺铂化疗的卵巢癌小鼠。选择40只6~7周龄雌... 详细信息

目的观察Gasdermin E(GSDMe)多肽抑制剂对顺铂诱导的卵巢癌小鼠肠道损伤的影响。方法采用针对半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)在GSDMe剪切位点的多肽抑制剂Z-DMLD-FMK,将其作用于接受顺铂化疗的卵巢癌小鼠。选择40只6~7周龄雌性C57BL/6小鼠构建模型,随机分为健康组和卵巢癌组(n=20),两组小鼠再随机分为对照组、顺铂组、GSDMe抑制剂组和顺铂+GSDMe抑制剂组,各亚组5只。健康组小鼠分组后即予以对应药物干预,卵巢癌组小鼠腹腔注射ID8细胞后15 d予以对应药物干预。记录小鼠的体质量变化,利用荧光活体成像技术评估肿瘤成瘤情况,通过苏木精-伊红(H-e)染色观察肠道组织炎症、损伤程度,Western印迹检测肠道组织中GSDMe的表达水平。结果GSDMe抑制剂对顺铂的抗卵巢癌作用无明显影响。在所有小鼠中,与对照组相比,顺铂组体质量明显下降,肠道组织明显损伤,肠道组织中GSDMe表达增加(Pe抑制剂组体质量增加,肠道组织损伤明显减轻,肠道组织中GSDMe表达降低(Pe多肽抑制剂能抑制顺铂诱导的GSDMe活化,从而减轻顺铂诱导的小鼠肠道损伤,且对顺铂的抗卵巢癌作用无影响。

关键词： Gasdermin E 细胞焦亡肠道损伤卵巢癌

Protective effects of IRG1/itaconate on acute colitis through the inhibition of gasdermins-mediated pyroptosis and inflammation response

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Genes & Diseases 2023年第4期10卷 1552-1563页

作者： Wenchang Yang Yaxin Wang Tao Wang Chengguo Li Liang Shi Peng Zhang Yuping Yin Kaixiong Tao Ruidong Li Department of Gastrointestinal Surgery Union HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and TechnologyWuhanHubei 430022China Department of Critical Care Medicine Union HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and TechnologyWuhanHubei 430022China

Inflammatory bowel disease(IBD)is a chronic relapsing gastrointestinal disorder,while the treatment effect is not satisfactory.Immune responsive gene 1(IRG1)is a highly ex-pressed gene in macrophage in response to inflammatory response and catalyzes the production of itaconate.Studies have reported that IRG1/itaconate has a significant antioxidant effect.This study aimed to investigate the effect and mechanism of IRG1/itaconate on dextran sulfate so-dium(DSS)-induced colitis in vivo and in vitro.In vivo experiments,we found IRG1/itaconate ex-erted protective effects against acute colitis by increasing mice weight,the length of colon,reducing disease activity index and colonic inflammation.Meanwhile,IRG1 deletion aggravated the macrophages/CD4+/CD8+T-cell accumulation,and increased the release of interleukin(IL)-1b,tumor necrosis factor-a(TNF-a),IL-6,the activation of nuclear factor-kB(NF-kB)/mitogen-activated protein kinase(MAPK)signaling pathway,and gasdermin D(GSDMD)mediated pyrop-tosis.Four-octyl itaconate(4-OI),a derivative of itaconate,attenuated these changes,therefore relieved DSS-induced colitis.In vitro experiment,we found 4-OI inhibited the reactive oxygen species production,thereby inhibiting the activation of MAPK/NF-kB signaling pathway in RAW264.7 and murine bone-marrow-derived macrophages.Simultaneously,we found 4-OI inhib-ited caspase1/GSDMD-mediated pyroptosis to reduce the release of cytokines.Finally,we found anti-TNF-a agent reduced the severity of DSS-induced colitis and inhibited Gasdermin E(GSDMe)-mediated pyroptosis in vivo.Meanwhile,our study revealed that 4-OI inhibited caspase3/GSDMe-mediated pyroptosis induced by TNF-a in vitro.Taken together,IRG1/itaconate exerted a pro-tective role in DSS-induced colitis by inhibiting inflammatory response and GSDMD/GSDMe-medi-ated pyroptosis,which could be a promising candidate for IBD therapy.

关键词： Colitis gasdermin D Gasdermin E Inflammation IRG1

哺乳期全氟辛烷磺酸暴露诱导子代青春期大鼠慢性肺损伤及其机制

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病理生理杂志 2022年第4期38卷 658-664页

作者：覃珊莫佳丽张慧珊叶乐平北京大学第一医院儿科北京100034 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心上海200127

目的:探讨Gasdermin E(GSDMe)介导的细胞焦亡及其引起的细胞因子风暴在哺乳期全氟辛烷磺酸(PFOS)诱导的子代青春期大鼠慢性肺损伤中的作用。方法:24只产后SD大鼠随机分成4组(每组6只):对照组(0 mg·kg^(−1)·d^(−1) PFOS)、低剂量(5 mg... 详细信息

目的:探讨Gasdermin E(GSDMe)介导的细胞焦亡及其引起的细胞因子风暴在哺乳期全氟辛烷磺酸(PFOS)诱导的子代青春期大鼠慢性肺损伤中的作用。方法:24只产后SD大鼠随机分成4组(每组6只):对照组(0 mg·kg^(−1)·d^(−1) PFOS)、低剂量(5 mg·kg^(−1)·d^(−1))PFOS(PFOS-L)组、中剂量(10 mg·kg^(−1)·d^(−1))PFOS(PFOS-M)组和高剂量(15 mg·kg^(−1)·d^(−1))PFOS(PFOS-H)组。从产后1 d(P1)至产后21 d(P21)给予染毒组大鼠相应剂量的PFOS灌胃,仔鼠经哺乳染毒。于出生后35 d(P35)处死仔鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织;采用质谱法检测肺组织中PFOS含量;肺组织石蜡切片进行He染色;免疫组化法检测肺组织中GSDMe蛋白表达情况;Western blot法检测肺组织中caspase-3、cleaved caspase-3和GSDMe蛋白水平;eLISA法检测肺组织白细胞介素18(IL-18)、髓过氧化物酶(MPO)和可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)含量;使用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测BALF中LDH活性。结果:PFOS染毒组仔鼠的体重显著低于对照组(Pe染色结果显示,各染毒组肺组织结构紊乱,支气管内膜和血管壁增厚,肺泡出血,巨噬细胞和淋巴细胞浸润,PFOS-M组和PFOS-H组的肺泡结构被破坏,PFOS-H组的肺泡壁可见胶原沉积。免疫组化结果显示,PFOS-M组和PFOS-H组仔鼠肺组织中GSDMe蛋白表达量较对照组显著升高(Pestern blot结果显示,与对照组相比,PFOS-M组和PFOS-H组仔鼠肺组织GSDMe和caspase-3蛋白表达量显著增高(PeLISA结果显示,PFOS-M组和PFOS-H组仔鼠肺组织中MPO、IL-18和sIL-2R含量较对照组显著升高(Pe介导的细胞焦亡及其引起的细胞因子风暴导致肺慢性炎症和慢性肺损伤。

关键词：全氟辛烷磺酸青春期大鼠肺损伤 Gasdermin E 细胞因子风暴

CyPA通过caspase-3/GSDMe通路介导缺血再灌注损伤后心肌细胞焦亡

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

CyPA通过caspase-3/GSDME通路介导缺血再灌注损伤后心肌细胞焦亡

作者：孙侠江苏大学

学位级别：硕士

目的从细胞实验和动物模型两个方面探讨亲环蛋白A(Cyclophilin A,Cy PA)对缺血再灌注损伤后心肌焦亡的调控作用及其潜在机制。方法体外培养H9C2大鼠心肌细胞,使用过氧化氢(Hydrogen peroxide,HO)刺激模拟缺血再灌注损伤后的急性氧化应... 详细信息

目的从细胞实验和动物模型两个方面探讨亲环蛋白A(Cyclophilin A,Cy PA)对缺血再灌注损伤后心肌焦亡的调控作用及其潜在机制。方法体外培养H9C2大鼠心肌细胞,使用过氧化氢(Hydrogen peroxide,HO)刺激模拟缺血再灌注损伤后的急性氧化应激。通过细胞增殖与毒性试剂盒(Cell counting kit-8,CCK8)确定HO的最佳处理浓度和时间;通过LDH检测试剂盒检测经HO处理的H9C2细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的分泌量;使用光学显微镜、扫描电镜、透射电镜观察心肌细胞有无特征性焦亡形态学表现;通过流式细胞术检测经HO处理的心肌细胞PI阳性占比;Western blot检测NLRP3、caspase-1、gasdermin D(GSDMD)、Gasdermin E(GSDMe)、β-actin的蛋白表达量,eLISA检测分泌到细胞上清液中的白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白介素-18(Interleukin-1β,IL-18)表达量。使用caspase-3特异性抑制剂Z-DeVD-FMK抑制caspase-3活性,应用Green Nuc验证抑制效果并验证caspase-3在细胞焦亡中的作用。活性氧荧光探针(2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)染色、线粒体膜电位检测试剂盒(Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1)染色和线粒体超氧化物红色荧光探针(Mito SOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator)染色分别观察经HO处理的H9C2细胞线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和超氧化物(Mitochondrial Superoxide,Mito SOX)生成量。应用小干扰RNA沉默Cy PA表达后观察急性氧化应激状态下细胞MMP、ROS和Mito SOX生成水平、PI阳性占比和Cy PA、caspase-3、GSDMe、β-actin的蛋白表达量。饲养C57BL/6J小鼠,心肌原位注射腺相关病毒沉默Cy PA,注射后用4.0缝线逐层缝合胸部切口,让动物恢复。4周后进行胸骨左侧开胸术挤压暴露心脏确定左前降支(Left anterior descending,LAD)近端并在动脉和心肌周围放置6.0缝线,通过结扎LAD诱导局部左心室缺血20分钟,恢复灌注2小时构建缺血再灌注损伤模型。应用心脏超声对比不同分组的小鼠射血功能,通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)加伊文思蓝染色验证心肌缺血,Western blot检测心肌Cy PA、caspase-3、GSDMe、β-actin蛋白表达水平,苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,He)评估心肌细胞排列情况。使用全组织细胞色素C氧化酶和琥珀酸脱氢酶(Cytochrome oxidase-succinnate dehydrogenase,COX-SDH)活性染色观察I/R损伤后心肌组织中线粒体功能。应用免疫组织化学进一步明确Cy PA在心肌组织中的表达和定位。通过eLISA检测分泌到血清中的白介素-18(Interleukin-18,IL-18)表达量。结果(1)H9C2心肌细胞在HO处理后细胞活力呈浓度和时间依赖性下降(Pestern blot检测NLRP3、caspase-1、GSDMD表达量未见明显差异(P>0.05),Cy PA、cleaved caspase-3/caspase-3、GSDMe-N/GSDMe-FL表达量显著上升(PeLISA进一步检测分泌到细胞上清液中的IL-1β未见明显差异(P>0.05)和IL-18表达量显著上调(Pe-3特异性抑制剂Z-DeVD-FMK的干预下,经400μm HO处理4小时的各组H9C2细胞分泌Cy PA的蛋白表达量无明显差异(P>0.05),但caspase-3及其下游的GSDMe表达量显著减少,同时细胞上清液中LDH、IL-18分泌量明显下降(P<0.05)。(3)应用小干扰RNA转染沉默Cy PA表达后,经4

关键词：亲环蛋白A 缺血再灌注损伤氧化应激焦亡 Gasdermin E

焦亡在缺血再灌注致急性肾损伤中的作用及自噬对其调节机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

焦亡在缺血再灌注致急性肾损伤中的作用及自噬对其调节机制研究

作者：刘文娜郑州大学

学位级别：硕士

背景急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是临床常见危重症,表现为肾功能短时间迅速减退,缺血再灌注(ischemia reperfusion injury,IRI)是AKI主要病因之一。IRI-AKI主要病理特征是肾小管上皮细胞死亡和炎症反应。焦亡是一种炎性程序性... 详细信息

背景急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是临床常见危重症,表现为肾功能短时间迅速减退,缺血再灌注(ischemia reperfusion injury,IRI)是AKI主要病因之一。IRI-AKI主要病理特征是肾小管上皮细胞死亡和炎症反应。焦亡是一种炎性程序性细胞死亡方式,可能在细胞死亡和炎症发生中起重要连接作用。GSDMe是新发现的焦亡执行蛋白,其介导的焦亡是否参与IRI-AKI发生及其在IRI-AKI中的作用尚不清楚。自噬是对有害环境反应最早的程序性细胞死亡方式,在维持细胞稳态方面起重要作用,但自噬对GSDMe介导的焦亡的潜在调控机制尚未有人报道。目的建立IRI-AKI体内外模型,明确GSDMe介导的焦亡在IRI-AKI模型中的发生和作用,并阐明自噬对其调节机制。方法1.IRI-AKI体内外模型的建立:(1)体内模型:使用C57BL/6J雄性小鼠,采用双侧肾脏动静脉夹闭后灌注的方法建立IRI-AKI体内模型。采用化学法检测Scr和BUN,用以表征小鼠肾功能变化。对肾脏组织切片做He染色,观察肾脏组织病理改变。(2)体外模型:使用氯化钴建立HK-2细胞缺氧复氧模型,即IRI-AKI体外模型。光镜下观察细胞形态。采用CCK-8法计算细胞存活率,采用化学法检测细胞中ATP含量和培养基中LDH浓度,用于表征细胞损伤程度。2.GSDMe介导的焦亡变化:采用免疫荧光法检测GSDMe定位,采用western blotting 检测GSDMe 和 GSDMe-NT 变化。3.GSDMe介导的焦亡对促炎细胞因子的影响:使用siRNA敲低HK-2细胞中GSDMe水平,采用qPCR法检测GSDMe介导的焦亡对促炎细胞因子的影响。4.caspase 3及上游通路蛋白对GSDMe介导的焦亡的影响:采用TUNeL法检测细胞凋亡,间接反映caspase 3活性;采用western blotting检测caspase 3、caspase 8和caspase 9在IRI-AKI模型中的变化。分别使用特异caspase 3、caspase 8和caspase 9化学抑制剂处理细胞,检测内外源性凋亡通路和焦亡相关蛋白的变化。5.自噬对GSDMe介导的焦亡的影响:采用免疫荧光法检测LC3B-II定位,采用western blotting检测LC3B-II变化。使用慢病毒转染HK-2细胞以敲低自噬相关基因atg5和fip200,采用qPCR法检测atg5和fip200 mRNA水平变化,采用western blotting检测Atg5和FIP200蛋白水平变化,用以验证敲低效果。采用western blotting检测自噬对凋亡通路和焦亡相关蛋白的影响。结果1.IRI-AKI体内外模型建立:实验组动物血清中Scr和BUN含量增加;组织切片中观察到肾小管上皮细胞肿胀,部分上皮细胞崩解脱落。IRI-AKI体外模型中,细胞存活率降低,死细胞数量增多。结果表明,IRI-AKI体内外模型建立成功。2.GSDMe介导的焦亡变化:实验组GSDMe染色荧光逐渐定位在细胞膜上。GSDMe-NT水平以剂量依赖性和时间依赖性方式升高。成熟IL-18和IL-1 β水平升高。结果表明,PTeCs在IRI-AKI模型中发生GSDMe介导的焦亡。3.GSDMe介导的焦亡对促炎细胞因子的影响:在IRI-AKI体外模型中,敲低GSDMe引起IL-18、IL-8、IL-6、VeGFA和TNF-α mRNA水平下降。结果表明,GSDMe介导的焦亡促进促炎细胞因子转录。4.caspase 3及上游通路蛋白对GSDMe介导的焦亡的影响:实验组凋亡阳性细胞数量增多,cleaved caspase 3水平升高。抑制caspase 3后GSDMe-NT含量减少,细胞存活率增加。结果表明,caspase 3通过剪切GSDMe诱导焦亡。实验组cleaved caspase 8 和cleaved caspase 9 含量增加。抑制caspase 8 和caspase 9 活性后GSDMe-NT表达减少,细胞存活率增加。结果表明,内外源性凋亡通路参与诱导GSDMe介导的焦亡发生。5.自噬对GSDMe介导的焦亡的影响:实验组LC3B逐渐在胞浆中聚集形成亮绿色小点,提示自噬小体增多。LC3B-II水平以剂量依赖性和时间依赖性方式升高。抑制自噬后GSDMe-NT含量减少,cleaved caspase 3、cleaved caspase 8 和cleaved caspase 9含量降低。结果表明,自噬通过内外源性凋亡通路诱导GSDMe介导的焦亡发生。结论1.PTeCs在IRI-AKI模型中发生GSDMe介导的焦亡,且GSDMe介导的焦亡促进促炎细胞因子转录。2.在IRI-AKI模型中,自噬通过内外源性凋亡通路诱导GSDMe介导的焦亡发生。

关键词：缺血再灌注急性肾损伤焦亡自噬 Gasdermin E

携带GSDMe基因的溶瘤痘苗病毒诱导的细胞焦亡在结肠癌中的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

携带GSDME基因的溶瘤痘苗病毒诱导的细胞焦亡在结肠癌中的作用研究

作者：曹玉婷浙江理工大学

学位级别：硕士

结肠癌（Colon cancer）是常见的发生在结肠部位的消化道恶性肿瘤,也是全球最常见的死亡原因之一。早期结肠癌可以手术切除,但晚期癌通常是致命的,伴随的肝脏转移是最常见的死亡原因。目前结肠癌治疗涉及综合治疗过程,除常规传统手术,... 详细信息

结肠癌（Colon cancer）是常见的发生在结肠部位的消化道恶性肿瘤,也是全球最常见的死亡原因之一。早期结肠癌可以手术切除,但晚期癌通常是致命的,伴随的肝脏转移是最常见的死亡原因。目前结肠癌治疗涉及综合治疗过程,除常规传统手术,化放疗外,干细胞移植治疗、分子靶向免疫治疗以及溶瘤病毒治疗等也成为研究重点。溶瘤病毒联合新型抑癌基因靶向治疗结肠癌,有望为结肠癌的临床治疗提供新思路和新技术。gasdermine（GSDMe）,又称DFNA5,是gasdermin家族的成员。研究表明GSDMe是一种抑癌基因,与多种类型的癌症有关,并且活化的Caspase-3或颗粒酶GranzymeB（GzmB）能激活GSDMe引发细胞焦亡。因此,本研究拟利用溶瘤痘苗病毒介导GSDMe基因在结肠癌细胞中特异性表达,从而发挥溶瘤效应和肿瘤细胞焦亡,增强抗肿瘤免疫,为靶向抗结肠癌治疗提供新型治疗策略。首先利用RT-qPCR和Western blot检测了 GSDMe在不同细胞中的表达,结果表明GSDMe在结肠癌细胞株中呈现低表达;MTT法检测了转染GSDMe基因的结肠癌细胞SW480生长受到显著的抑制,且过表达GSDMe的SW480经化疗药物Doxorubicin处理后,在形态学上有细胞焦亡的特征;Western blot检测到GSDMe-FL 和 GSDMe-NT 的产生,RT-qPCR 检测到 GSDMe、IL-1β、TNF-α和GzmB的mRNA水平增加。由此可见化疗药物可以诱导GSDMe介导的细胞焦亡途径,为接下来探究重组溶瘤痘苗病毒oncoVV-GSDMe诱导细胞焦亡的作用机制提供了依据。进一步,利用同源重组方法构建了携带GSDMe基因的重组溶瘤痘苗病毒oncoVV-GSDMe,MTT法发现oncoVV-GSDMe以剂量依赖或时间依赖的方式降低了 HCT-116和SW480细胞的存活率,同时增加了乳酸脱氢酶LDH的释放量,表明oncoVV-GSDMe能明显抑制结肠癌细胞的生长,并发生了细胞焦亡;形态学观察发现oncoVV-GSDMe处理的HCT-116和SW480细胞显示出细胞肿胀且从质膜中出现大气泡的细胞焦亡特征;Western blot检测到经oncoVV-GSDMe处理后HCT-116和SW480细胞中Caspase-3激活、GzmB增加和GSDMe-NT的形成,这表明结肠癌细胞焦亡的水平与Cleaved caspase-3、GzmB和GSDMe-NT的水平有关;流式细胞术检测到HCT-116经oncoVV-GSDMe处理后,凋亡晚期的细胞明显增多。最后,利用构建的结肠癌HCT-116荷瘤裸鼠进行了体内异种移植的动物实验,结果显示相比对照空载溶瘤病毒oncoVV-KZ,oncoVV-GSDMe对肿瘤生长具有显著的抑制作用,实现了更大程度的肿瘤消退。综上,我们成功构建了携带GSDMe基因的重组溶瘤痘苗病毒oncoVV-GSDMe,体内外实验表明其能特异性靶向杀伤结肠癌细胞,诱导其发生依赖于Caspase-3/GzmB/GSDMe途径的癌细胞焦亡,增强其抗肿瘤的能力;此外,重组溶瘤痘苗病毒oncoVV-GSDMe以非依赖化疗药物而是通过激活Caspase-3以及增加GzmB表达的GSDMe介导的癌细胞焦亡途径,有望为结肠癌治疗提供一种有新型的治疗策略。

关键词：溶瘤痘苗病毒 Gasdermin E 细胞焦亡结肠癌

ATP诱导NLRP3炎症小体途径受阻的巨噬细胞发生焦亡的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

ATP诱导NLRP3炎症小体途径受阻的巨噬细胞发生焦亡的机制研究

作者：曾琛莹暨南大学

学位级别：硕士

目的:ATP是NLRP3炎症小体的经典激动剂之一,可诱导巨噬细胞通过Caspase-1/gasdermin D（GSDMD）途径发生焦亡。然而,在因病原体的感染而导致NLRP3炎症小体活化受阻的巨噬细胞中,ATP能否诱导细胞发生焦亡,目前尚不明确。本课题利用ASC缺... 详细信息

目的:ATP是NLRP3炎症小体的经典激动剂之一,可诱导巨噬细胞通过Caspase-1/gasdermin D（GSDMD）途径发生焦亡。然而,在因病原体的感染而导致NLRP3炎症小体活化受阻的巨噬细胞中,ATP能否诱导细胞发生焦亡,目前尚不明确。本课题利用ASC缺陷的RAW 264.7细胞系及NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950预处理的骨髓源性的巨噬细胞（BMDM）作为体外细胞模型,再用ATP对细胞进行刺激,探究当巨噬细胞中NLRP3炎症小体活化受阻时细胞的死亡方式。方法:由于细胞发生焦亡（一种裂解性死亡）时会发生明显的形态学变化,细胞会发生肿胀,最终导致胞膜破裂及细胞内容物释放,因此可用碘化丙锭（PI）染色法检测BMDM及RAW 264.7细胞的裂解性死亡;进一步采用免疫印迹法检测上述两种细胞模型上清中Caspase-1、IL-1β的表达水平,以及细胞裂解物中pro-Caspase-1、pro-IL-1β、GSDMD、Gasdermin E（GSDMe）以及凋亡相关的Caspases蛋白的表达水平;利用特异性抑制剂DeVD抑制Caspase-3的活性,或siRNA敲低Caspase-3、GSDMe的表达,进而采用PI及免疫印迹法检测细胞坏死率及焦亡通路相关蛋白的表达水平。结果:ATP可时间依赖性诱导RAW 264.7细胞及NLRP3炎症小体活化受阻（MCC950处理）的BMDM细胞发生裂解性死亡,但不引起NLRP3炎症小体活化介导的焦亡经典途径中Caspase-1及GSDMD的活化,却可引起凋亡相关的启动蛋白Caspase-8和Caspase-9以及凋亡相关的执行蛋白Caspase-7和Caspase-3的活化,最终引起GSDMe蛋白的活化,诱导细胞发生Caspase-3/GSDMe途径依赖的裂解性死亡;Caspase-3特异性的抑制剂DeVD可降低ATP诱导的细胞死亡率,并下调GSDMe蛋白的活化;与此同时,siRNA敲低GSDMe可降低ATP诱导的细胞死亡率及HMGB1蛋白在上清中的分泌水平。siRNA敲低Caspase-3可降低ATP诱导的细胞死亡率。结论:当机体组织损伤或受到感染时,ATP作为常见的损伤相关的分子模式,可在NLRP3炎症小体活化受阻时,通过Caspase-3/GSDMe途径诱导巨噬细胞发生焦亡,提示另一种潜在的宿主对抗病原体逃逸的细胞焦亡机制。

关键词：细胞焦亡 Caspase-3 Gasdermin E ATP 巨噬细胞