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Assessment of the immune responses to Treponema pallidum gpd DNA vaccine adjuvanted with IL-2 and chitosan nanoparticles before and after Treponema pallidum challenge in rabbits

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Science China(Life Sciences) 2013年第2期56卷 174-180页

作者： ZHAO FeiJun ZHANG XiaoHong LIU ShuangQuan ZENG TieBing YU Jian GU WeiMing ZHANG YueJun CHEN Xi WU YiMou Pathogenic Biology Institute School of MedicineUniversity of South China Department of Histology and Embryology School of MedicineUniversity of South China The First Affiliated Hospital University of South China Department of Experimental Zoology School of MedicineUniversity of South China Skin Diseases and STD Hospital Centers for Disease Control of Hunan Province

Syphilis is a multistage,sexually transmitted disease caused by the spirochete,Treponema pallidum(Tp).A significantly high incidence of syphilis has been reported in several countries,including China,and there is an urgent need for the development of efficacious vaccines against *** vaccines are a major breakthrough in the field of vaccination with several advantages over traditional *** model studies of Tp DNA vaccines have not been reported elsewhere but our previous reports describe the development of a single-gene Tp DNA vaccine and preclinical immunization *** this study,chitosan(CS) nanoparticles were used as a vector and an interleukin-2 expression plasmid(pIL-2) as an adjuvant to enhance a Tpgpd DNA vaccine candidate(pTpgpd) in a rabbit Tp skin challenge *** week 8 after the first immunization,three rabbits from each group were used to determine cytokine measurements and spleen lymphocyte proliferation *** in combination with pIL-2 wrapped with CS led to the greatest enhancement of anti-Tpgpd antibodies and T-cell *** infection,levels of anti-Tpgpd antibodies and T-cell proliferation were *** the serum special IgG and IL-2,interferon-γ were significantly increased by the co-injection of the IL-2 plasmid compared with the injection of Tpgpd DNA alone(Pgpd were significantly lower than those of the pIL-2,CS or pIL-2 mixed with CS control groups(Pgpd immunized animals exhibited the lowest rates of positive skin tests(8.33%) and ulcer lesions(4.17%) and the fastest recovery(42 d).These experiments indicate that co-injection of a pIL-2 plasmid with pTpgpd DNA vaccine wrapped with CS can significantly strengthen the long-term stability of immun

关键词： Treponema pailidum (Tp) membrane protein gpd CS IL-2 nucleic acid vaccine

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gpd建模及其在矿产预测中的应用

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重庆大学学报（自然科学版） 2020年第4期43卷 64-72页

作者：秦飞龙刘剑颜文勇成都工业学院大数据与人工智能学院成都611730 成都工业学院汽车与交通学院成都611730 电子科技大学数学科学学院成都611731

探讨矿产资源预测方法。通过研究发现地球化学元素含量分布规律与广义帕累托分布(gpd)理论原理吻合,从而构建矿产资源预测gpd模型,在此基础上对模型的阈值和参数选取进行了探讨。将设计的gpd模型应用到实际矿区进行矿产预测,结果发现设... 详细信息

探讨矿产资源预测方法。通过研究发现地球化学元素含量分布规律与广义帕累托分布(gpd)理论原理吻合,从而构建矿产资源预测gpd模型,在此基础上对模型的阈值和参数选取进行了探讨。将设计的gpd模型应用到实际矿区进行矿产预测,结果发现设计出的模型能够有效圈定出地球化学元素异常分布区域,圈定出的区域范围与矿体分布吻合,有利于圈定找矿靶区。

关键词：矿产预测地球化学异常 gpd 阈值参数

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gpd在地球化学元素异常识别中的应用

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成都理工大学学报（自然科学版） 2020年第3期47卷 374-384页

作者：秦飞龙刘剑颜文勇周仲礼龚灏郭科成都工业学院大数据与人工智能学院成都611730 成都工业学院汽车与交通学院成都611730 成都理工大学数学地质四川省重点实验室成都610059

根据地球化学元素异常含量分布规律和极值理论(EVT)的广义帕累托分布(gpd)规律具有一致性,采用gpd分布建立了地球化学元素含量异常提取模型,并对模型中的尺度参数、形状参数以及阈值估计方法进行了选取和探讨,研究地球化学元素含量异常... 详细信息

根据地球化学元素异常含量分布规律和极值理论(EVT)的广义帕累托分布(gpd)规律具有一致性,采用gpd分布建立了地球化学元素含量异常提取模型,并对模型中的尺度参数、形状参数以及阈值估计方法进行了选取和探讨,研究地球化学元素含量异常分布规律及其找矿标志。在此基础上设计了一种修正阈值函数法。将构建的异常提取方法应用于湖北鸡冠咀铜金矿区地球化学元素含量异常提取,结果显示构建的模型能够有效提取地球化学元素含量异常值,所提取的元素含量异常区域与实际矿体分布趋势一致,得出地球化学找矿标志,圈定出新的找矿靶区。

关键词：地球化学异常矿产资源 gpd

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香灰菌gpd启动子的克隆及功能验证

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食品工业科技 2019年第17期40卷 97-103页

作者：陈悦刘冬梅许丹云王媛媛马爱民华中农业大学食品科学技术学院

为了构建香灰菌的转化体系,研究香灰菌的基因功能,需要获得高活性的启动子元件。本实验通过PCR技术分别克隆得到gpd基因以及其基因上游约1000 bp序列,使用Neural Network Promoter Prediction、Signal Scan Search Request、PLANTCAREA ... 详细信息

为了构建香灰菌的转化体系,研究香灰菌的基因功能,需要获得高活性的启动子元件。本实验通过PCR技术分别克隆得到gpd基因以及其基因上游约1000 bp序列,使用Neural Network Promoter Prediction、Signal Scan Search Request、PLANTCAREA database软件分析发现,gpd基因上游区域内不仅包含启动子所需的特征核心元件TATA-box、CAAT-box、G-box、GC-box、CT-rich等,还含有一个高分值的转录起始位点。为进一步验证该序列的启动子功能,将gpd启动子元件与增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)和潮霉素基因(hph)连接构建成融合表达载体,通过根癌农杆菌介导将其转化香灰菌丝。潮霉素抗性筛选、绿色荧光蛋白检测结果显示,香灰菌gpd启动子成功驱动了潮霉素抗性基因和增强型绿色荧光蛋白基因的表达,根癌农杆菌介导转化成功,为香灰菌外源基因表达及基因功能的研究奠定了基础。

关键词：香灰菌 gpd 启动子载体构建根癌农杆菌介导转化

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黑曲霉(Aspergillus niger)三磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)的序列测定与同源性分析

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四川大学学报（自然科学版） 1999年第4期36卷 752-758页

作者：赵莲苟兴华张义正四川大学生命科学学院分子生物学实验室

ｐＡＮＧＰＤ是用构巢曲霉ＧＰＤ基因片段为探针，从黑曲霉基因组文库中筛选到的一个三磷酸甘油醛脱氢酶基因（ＧＰＤ）阳性克隆．作者对该阳性克隆进行了亚克隆和序列测定，结果表明，基因片段总长２４４１个核苷酸（ｎ．ｔ），其中５... 详细信息

ｐＡＮＧＰＤ是用构巢曲霉ＧＰＤ基因片段为探针，从黑曲霉基因组文库中筛选到的一个三磷酸甘油醛脱氢酶基因（ＧＰＤ）阳性克隆．作者对该阳性克隆进行了亚克隆和序列测定，结果表明，基因片段总长２４４１个核苷酸（ｎ．ｔ），其中５’－端非编码区长９８１ｎ．ｔ，编码区（从起始密码子ＡＴＧ到终止密码子ＴＡＧ）长１４４６ｎ．ｔ，３’－端非编码区长２４ｎ．ｔ，基因启动子区含有ｇｐｄ－盒和ＣＴ－盒序列，但无明显的ＣＡＡＴ盒和ＴＡＴＡ盒序列．ＧＰＤ基因由７个外显子和７个内含子构成，外显子全长１００８ｎ．ｔ，编码的蛋白质长３３６个氨基酸残基．通过序列比较分析，发现该基因与构巢曲霉的ＧＰＤ基因有许多相似之处；它们的基因启动子序列都含有ｇｐｄ－盒和ＣＴ－盒，其同源性分别为９６％和６５％；推测的两个ＧＰＤ蛋白的氨基酸同源性高达９０％；两个基因所含内含子数目及位置相同．

关键词：黑曲霉亚克隆序列测定同源性分析 gpd

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白介素2与梅毒螺旋体膜蛋白gpd双价核酸疫苗的免疫活性及保护作用研究

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中华皮肤科杂志 2011年第10期44卷 688-692页

作者：余坚赵飞骏张晓红顾伟鸣刘双全曾铁兵张跃军裴瑞青吴移谋南华大学病原生物研究所湖南衡阳421001 南华大学医学院组胚教研室上海市皮肤病医院检验科南华大学附属第一医院检验科

目的探讨白介素2（IL-2）基因与梅毒螺旋体（Treponema pallidum，Tp）gpd抗原编码基因融合构建双价核酸疫苗免疫新西兰兔后的免疫应答效果及感染Tp后的保护作用。方法定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3．1（＋）／gpd—IL-2，与先期构... 详细信息

目的探讨白介素2（IL-2）基因与梅毒螺旋体（Treponema pallidum，Tp）gpd抗原编码基因融合构建双价核酸疫苗免疫新西兰兔后的免疫应答效果及感染Tp后的保护作用。方法定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3．1（＋）／gpd—IL-2，与先期构建的pcDNA3．1（＋）／gpd真核表达重组体分别设为两个疫苗实验组，同时设pcDNA3．1（＋）空质粒对照组及PBS对照组，共4组，每组18只雄性新西兰兔，肌肉多点注射初次免疫，于初次免疫后第10周各实验组兔皮下接种Tp标准株进行感染实验，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同时间点免疫兔特异性抗体产生水平和脾细胞IL-2及干扰素γ（IFN-γ）诱导水平，噻唑蓝法检测兔脾淋巴细胞增殖水平。结果用pcDNA3．1（＋）／gpd—IL-2融合双价疫苗和pcDNA3．1（＋），gpd单基因疫苗在免疫期间和感染期间均能检测到高滴度的IgG特异性抗体，最高滴度分别可达1：4096和1：1024（P值均〈0．01）；两疫苗组之间在免疫及感染期间不同时间点比较差异也有统计学意义（P值均〈0．01）；免疫后第8周双价融合核酸疫苗组及单基因核酸疫苗组兔脾细胞培养上清中IFN-γ分别为（447±22．4）μg／L、（225±17．6）μg／L，IL-2分别为（167±15．7）μg／L、（110±12．6）μg／L，均高于空质粒对照组和空白对照组（P值均〈0．01）；感染期间不同时间点兔脾细胞受相应蛋白刺激均有明显增殖反应，检测指标均显著高于空质粒对照组和空白对照组（P值均〈0．01）。早期感染皮损观察显示双价融合核酸疫苗组较之单基因疫苗组有着更低的皮损Tp检测阳性率（17．5％）、溃疡病灶发生率（15％）以及更短的皮损愈合时间。结论用pcDNA3．1（＋）／gpd—IL-2双基因融合疫苗在兔体内能更有效地诱导保护性体液免疫和细胞免疫应答。

关键词：密螺旋体,苍白疫苗,DNA 白细胞介素2 gpd

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梅毒螺旋体gpd重组蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

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作者：严加林南华大学

学位级别：硕士

目的：构建含梅毒螺旋体(Treponema pallidum，Tp)外膜蛋白gpd(Glycerophosphodiester Phosphodiesterase)1～353位氨基酸编码基因的重组表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达，纯化表达产物并进行免疫原性和免疫反应性分析，为探索gpd... 详细信息

目的：构建含梅毒螺旋体(Treponema pallidum，Tp)外膜蛋白gpd(Glycerophosphodiester Phosphodiesterase)1～353位氨基酸编码基因的重组表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达，纯化表达产物并进行免疫原性和免疫反应性分析，为探索gpd重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用价值和其生物学功能提供一定的实验依据。方法：通过生物信息学分析，筛选并挑选gpd基因优势抗原表位片段，以Tp Nichols株基因组DNA为模板，高保真聚合酶链反应扩增目的片断，将其亚克隆进原核表达载体pET28b(+)中、构建重组质粒pET28b(+)／gpd，然后转化至表达宿主菌RIL中进行诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定表达产物;Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，并进行稀释透析复性，BCA法测定纯化蛋白浓度。用纯化的gpd重组蛋白包被微孔板，建立间接ELISA方法，检测梅毒参比血清和临床梅毒患者血清，同时与TPPA法进行比较，根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况，评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值。同时用纯化的gpd重组蛋白免疫新西兰兔，间接ELISA方法检测免疫兔血清中gpd多克隆抗体的效价，对gpd重组蛋白的免疫原性进行分析。结果：软件分析gpd基因的抗原表位，选择了gpd基因的1～1059bp位碱基序列为目的基因片段(片段长度为1059bp，编码353个氨基酸);PCR扩增得到以大小约为1059bp的目的片断;构建的重组质粒经酶切鉴定和测序鉴定证明其中插入片断为gpd目的基因，测序结果与Genbank上登录序列完全一致

关键词：梅毒螺旋体重组蛋白蛋白纯化 gpd 免疫活性

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广义帕雷托分布（gpd）在波浪极值推算中的应用

广义帕雷托分布（GPD）在波浪极值推算中的应用

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作者：刘昆中国海洋大学

学位级别：硕士

波浪是海水重要的运动形式之一，波浪的研究对海岸保护、防止水土流失、海运、海上石油和天然气设施保护等都至关重要。在海洋工程的设计过程中，经常需要对各种海洋水文气象的极值参数进行统计分析，其中波浪极值参数作为一种重要的水... 详细信息

波浪是海水重要的运动形式之一，波浪的研究对海岸保护、防止水土流失、海运、海上石油和天然气设施保护等都至关重要。在海洋工程的设计过程中，经常需要对各种海洋水文气象的极值参数进行统计分析，其中波浪极值参数作为一种重要的水文参数，对某些海洋工程来说是很必要的。海洋中的波浪观测资料是有限的，往往不能满足海洋工程的需求。随着海浪数值模式的发展和逐渐成熟，利用海浪数值模拟的方法来进行海浪研究成为获取目标海域波浪极值参数的重要手段。本文基于第三代海浪数值模式SWAN，利用CCMP风场资料（1988年1月010年12月）一共23年的风场资料作为输入场对中国海的海浪场进行模拟，并与22001号和21004号浮标资料对比验证，对比显示模拟结果基本可信，然后以此计算结果为样本进行波浪极值推算工作。常用的波浪极值参数推算方法是广义极值分布。本文引入广义帕雷托分布（gpd），采用部分历时序列法获取样本序列。相比于广义极值分布（GEV），基于部分历时序列法的gpd能够更加充分的利用原始资料，gpd模型也具有更高的拟合精度和稳定性，包括在高值区域，其实用性和说服力更强。分析了22001号浮标附近区域尺度参数和重现期极值分布情况，讨论了区域内的海洋环境状况。随着科技的进步和设计理念的进一步发展，为了优化海洋工程设计方案，经常把方向性波浪极值参数考虑在内。采用GEV模型进行波浪方向性极值推导，出现了强浪向重现期极值大于无方向性重现期极值的情况。分析其原因，很有可能是GEV模型样本取值方法的问题。采用gpd模型进行波浪方向性极值推导，没有再出现这一问题。在限制了阈值之后，出现在某一年的某一波向上没有超过阈值的样本出现的情况，这时就凸显了年最大值统计法样本量的稳定性。从结果上来说，gpd模型推算的重现期极值略大于GEV模型推算的重现期极值。

关键词： gpd SWAN 有效波高重现期

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基于截L-矩和gpd的中国股市VaR经验测度:1991-2011

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长沙理工大学学报（社会科学版） 2012年第3期27卷 89-93页

作者：胡跃红易莎长沙理工大学经济与管理学院湖南长沙410076

L-矩方法现已成为金融领域厚尾分布分析和建模的重要工具,当极端值较多时,L-矩方法会变得较敏感,截L-矩不但具有L-矩方法的优良特征,而且增加了对首尾极端值的控制参数,对极端值存在的情况更加适用。论文采用AR(1)-GARCH(1,1)模型对收... 详细信息

L-矩方法现已成为金融领域厚尾分布分析和建模的重要工具,当极端值较多时,L-矩方法会变得较敏感,截L-矩不但具有L-矩方法的优良特征,而且增加了对首尾极端值的控制参数,对极端值存在的情况更加适用。论文采用AR(1)-GARCH(1,1)模型对收益率序列进行建模分析,得到近似独立同分布的残差序列。在此基础上,基于截L-矩考察广义帕累托分布对上证指数的损失尾部拟合情况,VaR的返回检验表明:基于截L-矩的gpd分布可以较好地拟合损失收益率的尾部,极值VaR可以有效地度量上海股市的风险。

关键词：截L-矩 gpd VaR

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国产gpd型高频电刀的性能与临床报告

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生物医学工程学进展 1992年第3期25卷 45-47页

作者：李桂生吴云林徐富星郜红桂上海第二军医大学附属长征医院上海第二军医大学附属瑞金医院华东医院上海医用激光仪器厂

随着内窥镜检查术在国内外的普遍开展,近年来,内镜下电外科治疗不断深入。目前,国内在内镜下电凝止血、息肉电切摘除、狭窄切开等治疗方法也不断发展。但国内所用设备皆为进口,尚无国产电外科设备应用于临床内镜治疗。 1989年,上海市将... 详细信息

随着内窥镜检查术在国内外的普遍开展,近年来,内镜下电外科治疗不断深入。目前,国内在内镜下电凝止血、息肉电切摘除、狭窄切开等治疗方法也不断发展。但国内所用设备皆为进口,尚无国产电外科设备应用于临床内镜治疗。 1989年,上海市将gpd型高频电刀列为重点新产品开发项目,由上海医疗器械八厂和中科院东海研究站联合研制。经过科研、生产与临床医生的共同努力。

关键词：高频电刀 gpd 电外科新产品开发项目设备应用研究站医疗器械吻合口内窥镜检查乳腺癌切除术

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