检索结果-南通市图书馆

作者：刘奇河北医科大学

学位级别：硕士

目的:谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统最主要的兴奋性神经递质,突触间隙谷氨酸的大量积聚、及其受体的过度激活,是包括神经病理性痛在内的多种神经系统病理过程发生的重要机制。谷氨酸由突触前神经元胞质中的谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的作用... 详细信息

目的:谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统最主要的兴奋性神经递质,突触间隙谷氨酸的大量积聚、及其受体的过度激活,是包括神经病理性痛在内的多种神经系统病理过程发生的重要机制。谷氨酸由突触前神经元胞质中的谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的作用下生成,通过囊泡谷氨酸转运体系统(vesicular glutamate transporters,VGLUTs),摄取并贮存于突触囊泡中,再以胞吐的形式释放到突触间隙。研究表明,VGLUTs的数量和功能对于突触间隙谷氨酸的含量具有重要的调控作用。突触间隙谷氨酸的清除,主要依赖分布于神经元及胶质细胞膜上的Na依赖的高亲和力谷氨酸转运体系统(excitatory amino acid transporters,EAATs)的摄取。被EAATs摄取入胶质细胞后,谷氨酸代谢为谷氨酰胺,被运输回神经元,并再次被转化为谷氨酸,被VGLUTs装配入突触囊泡中。因此,对于突触间隙谷氨酸水平的调控,VGLUTs和EAATs是两个重要靶点。目前已经发现了5种EAATs即GLAST(EAAT1)、GLT-1(EAAT2)、EAAC1(EAAT3)、EAAT4、EAAT5和3种VGLUTs即I型囊泡谷氨酸转运体(VGLUT1)、II型囊泡谷氨酸转运体(VGLUT2)、III型囊泡谷氨酸转运体(VGLUT3)。研究表明,肩负着约90%突触间隙内谷氨酸摄取和清除任务的胶质细胞谷氨酸转运体-1(glial glutamate transporter-1,GLT-1)和II型囊泡谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,VGLUT2)在痛及痛觉过敏的形成中发挥重要作用。如,多种疼痛模型均伴有GLT-1表达或功能的下调;我们应用GLT-1特异性激动剂头孢曲松钠(ceftriaxone,Cef)后,在上调GLT-1表达和功能的同时,发挥了抗神经病理性痛过敏的作用。VGLUT2在痛及痛觉过敏的形成中作用尚不一致,可能与疼痛的类型和/或性质有关。如,有研究发现,VGLUT2半量敲除小鼠的基础痛阈及炎性痛痛行为不受影响;在选择性坐骨神经分支损伤(spared nerve injury,SNI)后,出现机械痛觉过敏的减轻;而在坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)后,机械痛觉过敏并未出现显著变化。我们的研究发现,坐骨神经慢性缩窄性损伤即CCI术后,伴随痛觉过敏的产生,大鼠脊髓后角VGLUT2表达显著下调。因此在神经病理性痛形成过程中VGLUT2的确切作用尚有待深入探讨,并且VGLUT2与GLT-1之间的关系也尚不明了。我们在前期的研究中,给CCI大鼠应用GLT-1特异性激动剂Cef后,发现GLT-1表达上调的同时,VGLUT2表达也上调;并且GLT-1反义寡核苷酸可抑制Cef对VGLUT2的上调。这些结果初步提示,CCI术后GLT-1表达的下调,进而引起的VGLUT2表达下调,参与CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏的形成。但是,在这一过程中,下调VGLUT2对Cef上调GLT-1及其抗CCI诱导的伤害性感受的影响尚不明了。因此,本课题拟通过应用VGLUT2 shRNA慢病毒载体下调VGLUT2的表达后,观察Cef对CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏和脊髓后角GLT-1表达影响的变化,来进一步明确CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏过程中VGLUT2与GLT-1的调制关系,以期为阐明VGLUT2在神经病理性痛中的作用提供实验依据。方法:1.大鼠脊髓后角VGLUT2基因下调方案设计与效果评价委托吉玛基因股份有限公司以大鼠VGLUT2基因(Slc17a6)m RNA为模板,设计构建了三条VGLUT2 shRNA慢病毒载体序列及一条阴性对照序列:shRNA-668、shRNA-1267、shRNA-1732和shRNA-NC,并分别在细胞、整体两个水平进行效果评价。1.1细胞水平shRNA效果评价与筛选(1)确定大鼠皮层神经元最佳培养时长及病毒转染的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)将原代培养的大鼠皮层神经元分为3 d转染组和7 d转染组。3 d转染组于大鼠皮层神经元培养第3 d时,转染shRNA-NC慢病毒载体,MOI设置为10、20;7 d转染组于大鼠皮层神经元培养第7 d时,转染shRNA-NC慢病毒载体,MOI设置为5、10、20。所有细胞于转染3 d后应用倒置荧光显微镜观察转染效率及神经元状态,选择神经元存活状态好的培养时长、转染效率高的MOI用于后续实验。(2)VGLUT2 shRNA效果评价与筛选将原代培养大鼠皮层神经元分为5组:Control组、shRNA-NC组、shRNA-668组、shRNA-1267组和shRNA-1732组。Control组为培养的正常大鼠皮层神经元,不做任何处理;其余各组于大鼠皮层神经元培养至第3

关键词： VGLUT2 GLT-1 头孢曲松钠 shRNA 原代神经元培养大鼠

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Effect of subarachnoid nerve block anesthesia on glutamate transporte GLAST and GLT-1 expressions in rabbits

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Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 2015年第7期8卷 562-565页

作者： Ke-Qing Xiao Mei Xiao Li Meng Xiang-Yang Du Jing Hu Bao-Feng Gao Wen-Qiang Yu Xin-Jie Wang Yan-Lin Ban Department of Anesthesiology Shandong Provincial Hospital Division of Preventive Medicine Third People's Hospital of Pingdu city Shandong Province Chest Hospital Department of Respiratory Diseases of Jinan city Department of Anesthesiology Qianfoshan Hospital affiliated to Shandong University in Shandong Province

Objective: To observe the effect of subarachnoid nerve block anesthesia on glutamate transporter glutamate-aspartate transporter(GLAST) and GLT-1 expressions in rabbits, and to investigate the effect of peripheral nerve anesthesia on the morphology and function of the spinal cord. Methods: Twenty healthy New Zealand white rabbits were randomly divided into two groups: the experimental group and control group; with 10 rabbits in each group. For spinal nerve anesthesia, 5 g/L of bupivacaine was used in the experimental group, and sterile saline was used in the control group. After 30 min of cardiac perfusion, GLAST and GLT-1 protein expression in spinal neurons were detected by immunohistochemistry and immunofluorescence staining. Results: GLAST and GLT-1 protein-positive cells increased in neurons in the experimental group, compared with the control group(PGLT-1 expression is increased; and spinal cord nerve cell function is inhibited.

关键词： Subarachnoid nerve block anesthesia Glutamate transporter GLAST GLT-1

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p38 MAPK反义寡聚脱氧核苷酸抑制脑缺血预处理诱导脑缺血耐受过程中GLT-1表达上调

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中国药理学通报 2017年第9期33卷 1253-1259页

作者：王佳磊蒋孟洋张孟岳王文帅李力张玲燕李文斌张敏河北医科大学病理生理学教研室河北石家庄050017 河北医科大学临床医学“5+3”一体化2015级河北石家庄050017 河北省胸科医院胸外科河北石家庄050041 河北医科大学第二临床医学院科技处河北石家庄050000 河北省脑老化与认知神经重点实验室河北石家庄050031

目的观察p38 MAPK反义寡聚脱氧核苷酸(ASODNs)是否影响大鼠脑缺血预处理(CIP)诱导脑缺血耐受过程中GLT-1蛋白的表达。方法 80只健康Wistar大鼠,♂,永久凝闭椎动脉,随机分为6组:(1)假手术(sham)组(n=10);(2)CIP组(n=10);(3)脑缺血损伤(Ⅱ... 详细信息

目的观察p38 MAPK反义寡聚脱氧核苷酸(ASODNs)是否影响大鼠脑缺血预处理(CIP)诱导脑缺血耐受过程中GLT-1蛋白的表达。方法 80只健康Wistar大鼠,♂,永久凝闭椎动脉,随机分为6组:(1)假手术(sham)组(n=10);(2)CIP组(n=10);(3)脑缺血损伤(Ⅱ)组(n=10);(4)CIP+Ⅱ组(n=10);(5)p38 MAPK AS-ODNs+CIP+Ⅱ组(n=30);(6)p38 MAPK S-ODNs+CIP+Ⅱ组(n=10)。(5)组中根据p38 MAPK AS-ODNs所用剂量不同分为5 nmol、10 nmol及15 nmol亚组(n=10);p38 MAPK S-ODNs的剂量为15nmol。所有动物均在sham手术或末次脑缺血/再灌注后6 h和2 d取材,Western blot和(或)免疫组织化学法检测p-p38MAPK及GLT-1蛋白的表达。结果 CIP引起p-p38 MAPK适度升高和GLT-1明显升高,并抑制Ⅱ引起的p-p38 MAPK过度升高及GLT-1表达下调;注射p38 MAPK AS-ODNs抑制CIP诱导脑缺血耐受过程中p-p38 MAPK和GLT-1的表达上调,呈剂量依赖性。结论 p38 MAPK AS-ODNs阻断CIP诱导脑缺血耐受过程中GLT-1表达上调。

关键词： p38 MAPK GLT-1 AS-ODNs 脑缺血预处理海马大鼠

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越鞠丸挥发油抗抑郁作用及机制研究

越鞠丸挥发油抗抑郁作用及机制研究

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作者：张碧珂江西中医药大学

学位级别：硕士

目的:越鞠丸由挥发油含量较高的药材组成,但挥发油部分在其抗抑郁作用的研究和应用中长期被忽视。因此,本研究旨在探索越鞠丸挥发油(Yueju volatile oil,YJVO)的抗抑郁作用及其机制,明确其在该方使用中的价值,为越鞠丸合理有效的使用提... 详细信息

目的:越鞠丸由挥发油含量较高的药材组成,但挥发油部分在其抗抑郁作用的研究和应用中长期被忽视。因此,本研究旨在探索越鞠丸挥发油(Yueju volatile oil,YJVO)的抗抑郁作用及其机制,明确其在该方使用中的价值,为越鞠丸合理有效的使用提供科学依据。方法:1.提取越鞠丸及其组成药材的挥发油并对其成分进行分析比较。采用水蒸气蒸馏法提取越鞠丸及其组成药材的挥发油,运用气相色谱-质谱联用(gas chr omatography-mass spectrometry,GC-MS)方法分析各挥发油的化学成分,建立YJVO、川芎挥发油(volatile oil of Ligusticum striatum DC.,LSVO)、苍术挥发油(volatile oil of Atractylodes lancea(Thunb.)DC.,ALVO)、香附挥发油(volatile oil of Cyperus rotundus L.,CRVO)、栀子挥发油(volatile oil o f Gardenia jasminoides J.Ellis,GJVO)的GC-MS检测条件,结合NIST20.L标准质谱库分析,筛选并保留匹配度大于80%的化合物,结合文献数据确定各种挥发油的成分;统计并比较YJVO及越鞠丸单味药材挥发油的组成及含量。2.采用急性毒性实验评估YJVO口服给药的安全性。选用C57BL/6J小鼠进行YJVO急性口服毒性实验,正式实验前进行一次预实验,确定100%致死量和0%致死量的浓度分别为10 m L·kg、1.25 m L·kg。在此区间内设置10m L·kg、8 m L·kg、6 m L·kg、4 m L·kg、2 m L·kg剂量组,另设溶剂对照组(0.1%Tween-80)。对小鼠进行单次给药后,观察小鼠的一般状态,统计小鼠的死亡率。用Bliss法计算YJVO口服给药在小鼠中的半数致死量(half letha l dose,LD)。3.在急性口服毒性实验的基础上合理设置给药浓度,探索YJVO的口服抗抑郁作用。选用C57BL/6J小鼠建立慢性不可预知温和应激(chronic unpredicta ble mild stress,CUMS)小鼠抑郁模型,运用行为学测试评价动物的抑郁行为,作为药效评价依据。比较相同剂量下(等同于相等生药量)YJVO、越鞠丸水提物(aqueous extract of Yueju pill,YJAE)、越鞠丸生药(YJW)的抗抑郁作用;设置低(0.15 m L·kg)、中(0.3 m L·kg)、高(0.6 m L·kg)3个剂量组,比较YJVO在不同剂量下的抗抑郁作用,确定YJVO抗抑郁的最佳口服剂量。为了进一步研究YJVO口服给药抗抑郁作用的机制,利用小动物超声成像和激光散斑血流成像技术对实验动物的血流状态进行检测;基于超高效液相色谱串联四极杆线性离子阱质谱(ultra-high performance liquid chromatography ta ndem quadrupole linear-ion-trap mass spectrometry,UHPLC-Qtrap-MS)技术对小鼠海马组织内的神经递质的浓度进行靶向代谢组学分析,包括谷氨酸(Gluta mic acid,Glu)、皮质酮(Corticosterone,Cort)、组胺(Histamine,HA)、组氨酸(Histidine,His)、酪氨酸(Tyrosine,Tyr)、γ-氨基丁酸(γ-aminobut yric acid,GABA)、犬尿氨酸(Kynurenine,Kyn)、多巴胺(Dopamine,D A)、谷氨酰胺(Glutamine,Gln)、色氨酸(Tryptophan,Trp)以及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT);免疫荧光技术用来检测小鼠海马组织内相关蛋白(Akt、ERK1/2、GLT-1)的表达水平。4.通过吸入途径探索YJVO的抗抑郁作用及其机制。选用C57BL/6J小鼠建立CUMS小鼠抑郁模型,设置低(1.5%)、中(3%)、高(6%)3个浓度的给药组,对CUMS模型小鼠进行YJVO雾化吸入治疗,随后采用行为学测试评价动物的抑郁行为,作为药效评价依据。确定YJVO吸入治疗的最佳剂量之后对YJVO通过吸入途径抗抑郁的作用机制进行研究。DPPH自由基清除实验与ABTS自由基清除实验用来检测YJVO的体外抗氧化活性;随后对小鼠海马组织内的氧化应激标志物进行检测:ELISA试剂盒检测4-羟基壬烯醛(4-hydro xynonenal,4-HNE)含量、硫代巴比妥酸反应物(thiobarbituric acid reactive s ubstance,TBARS)法测定丙二醛(malonaldehyde,MDA)的含量,采用DCF H-DA(2,7-Dichlorodih

关键词：抑郁症越鞠丸挥发油氧化应激 GLT-1

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浅低温通过上调PI3K/Akt信号通路活性增加神经元-星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧复糖后GLT-1表达

浅低温通过上调PI3K/Akt信号通路活性增加神经元-星形胶质细胞氧...

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作者：高赞河北医科大学

学位级别：硕士

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路作为一条重要通路,在缺血性脑卒中中发挥重要作用。谷氨酸（Glu）是中枢神经系统重要的神经递质,脑缺血时会大量释放,产生兴奋性神经毒性,引起缺血性脑卒中的神经元凋亡,而星形胶质细... 详细信息

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路作为一条重要通路,在缺血性脑卒中中发挥重要作用。谷氨酸（Glu）是中枢神经系统重要的神经递质,脑缺血时会大量释放,产生兴奋性神经毒性,引起缺血性脑卒中的神经元凋亡,而星形胶质细胞膜上的谷氨酸转运体-1（GLT-1）的上调可促进对Glu的摄取,发挥神经保护作用。且一定条件下,PI3K/Akt信号通路可以调节GLT-1表达。研究表明,浅低温条件下,PI3K/Akt信号通路的激活或者GLT-1蛋白表达的增加,均能减轻脑缺血后神经元凋亡以及缺血再灌注损伤,发挥脑保护作用。但此过程中,GLT-1的上调是否受到PI3K/Akt信号通路的调控尚不清楚。因此,本课题旨在研究浅低温是否可以通过上调PI3K/Akt信号通路活性增加神经元-星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧复糖后GLT-1表达。第一部分新生SD原代大鼠神经元-星形胶质细胞共培养及氧糖剥夺/复氧复糖损伤模型的建立目的:建立神经元-星形胶质细胞共培养方法及神经元-星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）损伤模型。方法:取新生24h内SD乳鼠大脑皮层进行原代神经元-星形胶质细胞共培养。其中,星形胶质细胞用含10%FBS的DMEM/F12培养基进行培养,7d左右时进行纯化与传代,待第二代细胞铺满90%左右培养板底后,采用细胞免疫荧光法对其进行纯度鉴定。神经元培养使用Neurobasal+B27无血清培养基,待培养至7-11d左右时,采用细胞免疫荧光法对其进行纯度鉴定。神经元-星形胶质细胞共培养,将纯化后的二代星形胶质细胞传至圆爬片,待长满70%~80%后,无菌条件下移入培养至9-11d左右的神经元培养板,使用Neurobasal+B27无血清培养基共培养1-2d后进行实验。采用三气培养箱,联合无糖DMEM建立神经元-星形胶质细胞OGD/R损伤模型,氧糖剥夺4h,复氧复糖24h。通过光镜下肉眼观察、硫堇染色以及CCK-8试剂盒对OGD/R损伤模型进行评价。结果:1.新生SD原代大鼠皮层神经元多呈梭形,胞核清晰,突起间连接成网状;星形胶质细胞形态典型,多呈星状或纤维细胞样形态,胞核清晰,突起紧密连接。2.神经元纯度90%以上,星形胶质细胞纯度95%以上。3.对照（Ctrl）组神经元细胞膜光滑,结构完整,未见水肿、空洞或肿大,突起交织成网状结构;OGD/R组神经元明显肿胀,细胞结构受损,突起减少或断裂。4.Ctrl组尼氏体数量多而密集,染色深,边缘清晰;OGD/R组尼氏体均数量减少,染色变浅,边缘模糊不清。5.与Ctrl组相比,OGD/R组神经元活性降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.体外培养的新生SD大鼠皮层神经元及星形胶质细胞形态典型,纯度分别为90%和95%以上,能满足进一步实验要求。2.神经元-星形胶质细胞OGD/R损伤模型造模成功。第二部分浅低温通过上调PI3K/Akt信号通路活性增加神经元-星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧复糖后GLT-1表达目的:研究浅低温（33℃）对离体神经元-星形胶质细胞共培养OGD/R后PI3K/Akt信号通路及GLT-1表达的关系。方法:依照“第一部分”方法进行原代神经元-星形胶质细胞共培养。将体外培养的细胞随机分为6组:对照（Ctrl）组、常温氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）组、浅低温氧糖剥夺/复氧复糖（HOGD/R）组、浅低温氧糖剥夺/复氧复糖+LY294002（HOGD/R+LY）组、浅低温氧糖剥夺/复氧复糖+DHK（HOGD/R+DHK）组和浅低温氧糖剥夺/复氧复糖+DMSO（HOGD/R+DM）组。三气培养箱内行氧糖剥夺4h,复氧复糖24h,浅低温处理时间与OGD/R时间一致。通过光镜下肉眼观察、硫堇染色以及CCK-8试剂盒评价各组神经元损伤程度,细胞免疫荧光法及Western Blotting观察和检测p-Akt和GLT-1蛋白的表达,谷氨酸测定试剂盒测定细胞外Glu浓度。结果:1.与Ctrl组相比,其余各组神经元活性显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;与HOGD/R组相比,OGD/R组、HOGD/R+LY组、HOGD/R+DHK组神经元活性显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.与Ctrl组相比,OGD/R组细胞内绿色荧光很弱,p-Akt蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;与HOGD/R组相比,OGD/R组、HOGD/R+LY组细胞内绿色荧光很弱,p-Akt蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.与Ctrl组相比,OGD/R组细胞内红色荧光很弱,GLT-1蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;与HOGD/R组相比,OGD/R组、HOGD/R+LY组细胞内红色荧光很弱,GLT-1蛋白表达显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。4.与Ctrl组相比,其余各组Glu浓度显著升高,差异有统计学意义（P＜0.

关键词：神经元-星形胶质细胞共培养浅低温氧糖剥夺/复氧复糖 PI3K/Akt GLT-1

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MiR-30a-5p对PD小鼠模型GLT-1表达的调控效应及机制研究

MiR-30a-5p对PD小鼠模型GLT-1表达的调控效应及机制研究

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作者：孟行军南方医科大学

学位级别：硕士

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是第二大中老年常见的神经退行性疾病,其主要病理特征为中脑黑质多巴胺(Dopamine,DA)能神经元内形成以α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)为主要成分的路易小体(Lewy body,LB),进而导致多巴胺能神经... 详细信息

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是第二大中老年常见的神经退行性疾病,其主要病理特征为中脑黑质多巴胺(Dopamine,DA)能神经元内形成以α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)为主要成分的路易小体(Lewy body,LB),进而导致多巴胺能神经元凋亡变性坏死。从而出现运动缓慢,静止震颤,肢体僵硬,姿态不稳等临床症状。PD的发病机制多种多样,包括年龄因素、环境因素、遗传因素、神经炎症、谷氨酸兴奋性毒性作用等。其中,谷氨酸兴奋性毒性在PD发病机制中的作用是国内外研究的一个热点之一。谷氨酸兴奋性毒性主要是由谷氨酸转运体(Glutamate transporter)的表达以及功能异常引起,谷氨酸转运体表达以及功能异常均可导致星形胶质细胞以及神经元摄取突触间隙谷氨酸减少,特别是表达在星形胶质细胞上的谷氨酸转运体-1(Glutamate transporter-1,GLT-1,也被称为EAAT2))的表达和功能异常,从而导致DA能神经元损伤。因而可以通过提高和改善星形胶质细胞谷氨酸转运体GLT-1的表达以及功能使细胞外谷氨酸浓度维持在正常生理水平,避免DA能神经元遭受高浓度谷氨酸的兴奋性毒性效应。因此,研究针对谷氨酸转运体的调控机制具有重要的意义。近几年来,MicroRNA(miRNA)成为了一个研究的热点,大量研究发现miRNA与神经退行性疾病的发生、发展相关,也有与PD发生发展相关的miRNA的报道,比如miR-133b,miR-7,miR-7116-5p,miR-124,miR-126,miR-155 等,并且有部分miRNA的靶基因已经得到了确证。但到目前为止,除了本实验室的研究之外还未见到针对谷氨酸转运体的miRNAs在PD发生发展中作用的报道。基于谷氨酸转运体在谷氨酸兴奋性毒性和PD发生、发展中的重要作用,那么PD发病中调控谷氨酸转运体GLT-1的miRNA有哪些?其调控效应及机制是什么?对PD发病具有什么意义?调节针对谷氨酸转运体GLT-1的miRNA能否达到缓解或治疗PD的目的?能否成为治疗PD的新靶标?解决这些问题,对PD的防治具有十分重要的临床意义。本研究主要鉴定PD发病中针对谷氨酸转运体GLT-1发挥调控作用的miRNA,阐明其调控机制及在PD发病中的意义,通过干预特定miRNA来提高GLT-1的表达与功能,从而降低谷氨酸的神经毒性效应,缓解PD病情,为临床治疗PD提供新靶标、新途径。我们在前期实验室高通量测序以及生物信息学分析的实验基础上选择miR-30a-5p进行后续研究。在前期实验中,我们课题组利用神经毒素MPTP制备PD小鼠模型,在造模后选择不同时间点分别检测大脑不同区域(大脑皮层、中脑黑质、海马、小脑)miRNAs的表达谱,与正常对照组进行比较,筛选出差异表达的miRNAs,并对差异表达的miRNAs进行生物信息学分析,分析显示GLT-1基因Slc1a2是差异表达的miR-30a-5p的靶基因。我们首先通过细胞实验来研究抑制或过表达miR-30a-5p对GLT-1表达和功能的影响,结果显示在MPP+染毒的星形胶质细胞中抑制miR-30a-5p后GLT-1总蛋白和膜蛋白的表达水平显著增加,GLT-1的转运功能显著改善以及mRNA表达水平显著增加;过表达miR-30a-5p后GLT-1的mRNA表达水平明显降低,总蛋白和膜蛋白的表达水平明显降低,GLT-1的转运功能也明显降低。以上结果表明miR-30a-5p对GLT-1表达和功能都有影响。我们进一步在动物实验中验证了 miR-30a-5p对谷氨酸转运体GLT-1的调控作用。我们首先构建了包含miR-30a-5p抑制序列的绿色荧光蛋白标记的慢病毒,利用大脑立体定位仪将慢病毒定位注射入小鼠的一侧中脑黑质中。Western blotting和qPCR检测的结果显示,与PD组相比注射了慢病毒PD组小鼠中脑组织GLT-1的总蛋白水平、膜蛋白水平及mRNA水平都显著增加,突触体活性明显升高,中脑黑质酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞明显增多,α-Syn明显减少,凋亡细胞亦明显减少。以上实验证实了 miR-30a-5p在PD小鼠模型中对谷氨酸转运体GLT-1具有重要的调控作用。我们的前期实验结果表明,不管是在体内还是体外miR-30a-5p对谷氨酸转运体GLT-1都具有重要的调控作用。因此,下一步我们使用双荧光素酶报告基因实验验证Slc1a2(GLT-1的基因名)是否是miR-30a-5p的靶基因。但遗憾的是,我们得到了阴性的结果,miR-30a-5p与Slc1a2之间没有直接作用,说明Slc1a2不是miR-30a-5p的靶基因,miR-30a-5p可能通过间接通路对GLT-1发挥调控作用。因此,我们对miR-30a-5p调节GLT-1的可能间接通路也进行了研究,首先我们对参与miR-30

关键词：帕金森病谷氨酸转运体谷氨酸兴奋性毒性作用 GLT-1 MiR-30a-5p

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头孢曲松对脑损伤后海马谷氨酸及谷氨酸转运体-1的影响

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中国免疫学杂志 2015年第2期31卷 176-179页

作者：饶莉杨静石哲群唐山市工人医院风湿免疫科唐山063000 唐山市工人医院康复医院唐山063000

目的:观察β-内酰胺抗生素头孢曲松对创伤性脑损伤大鼠海马谷氨酸(Glutamate,Glu)及谷氨酸转运体-1(Glutamate transporter subtype-1,GLT-1)的影响。方法:将60只健康成年SD大鼠随机分三组:假手术组(Sham组)、脑创伤模型组(TBI组)、头... 详细信息

目的:观察β-内酰胺抗生素头孢曲松对创伤性脑损伤大鼠海马谷氨酸(Glutamate,Glu)及谷氨酸转运体-1(Glutamate transporter subtype-1,GLT-1)的影响。方法:将60只健康成年SD大鼠随机分三组:假手术组(Sham组)、脑创伤模型组(TBI组)、头孢曲松组(CTX组),采用改良Feeney法制备大鼠创伤性脑损伤模型,致伤后立即腹腔注射头孢曲松(200mg/kg)。伤后6 h、12 h、24 h及48 h取材,采用干湿比重法测定脑组织含水量;高效液相色谱法检测大鼠海马兴奋性氨基酸Glu水平;免疫组织化学法及Western blot法检测大鼠海马组织GLT-1的分布及表达情况。结果:模型组大鼠较Sham组相比,脑组织含水量明显增加(PGLT-1的蛋白表达量明显下调(PGLT-1的蛋白表达量上调(P<0.05)。结论:β-内酰胺抗生素头孢曲松可以阻断兴奋性神经毒性,减轻脑水肿程度。

关键词：头孢曲松脑损伤脑水肿 Glu GLT-1

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脊髓不同类型C纤维末梢中VGLUT2在头孢曲松钠抗CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏中的变化

脊髓不同类型C纤维末梢中VGLUT2在头孢曲松钠抗CCI大鼠慢性神经病...

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作者：房阔河北医科大学

学位级别：硕士

目的:胶质细胞谷氨酸转运体-1（Glial glutamate transporter-1,GLT-1）是维持突触间隙谷氨酸稳态的主要转运体,其肩负着约90%突触间隙内谷氨酸的摄取和清除。研究发现,GLT-1的表达或功能下调,参与包括神经病理性痛在内的多种疼痛及痛... 详细信息

目的:胶质细胞谷氨酸转运体-1（Glial glutamate transporter-1,GLT-1）是维持突触间隙谷氨酸稳态的主要转运体,其肩负着约90%突触间隙内谷氨酸的摄取和清除。研究发现,GLT-1的表达或功能下调,参与包括神经病理性痛在内的多种疼痛及痛觉过敏的形成和维持。Rothstein等报道,β-内酰胺类抗生素,如头孢曲松钠（Ceftriaxone,Cef）等,可特异性地上调GLT-1的表达及其对谷氨酸的摄取。在这一报道的基础上,我们前期的研究发现,Cef可以通过上调大鼠脊髓后角GLT-1的表达,增强其对谷氨酸的摄取而发挥抗CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏的作用,但是其深层次的机制尚有待进一步研究。被GLT-1摄取入星形胶质细胞内的谷氨酸,通过谷氨酸-谷氨酰胺循环,再次回到突触前神经末梢,再通过囊泡型谷氨酸转运体（vesicular glutamate transporter,VGLUT）,被装配入囊泡,并释放至突触间隙。因此,通过谷氨酸-谷氨酰胺循环,VGLUT和GLT-1被密切联系在一起,共同维持突触内谷氨酸的稳态。其中,II型囊泡型谷氨酸转运体,即VGLUT2,在脊髓主要分布在I板层、II板层,以及IV、V的深部,在感觉和伤害性信息的传递和加工中发挥着重要作用。我们前期的研究发现,伴随着热和机械性痛觉过敏的产生,坐骨神经慢性缩窄性损伤（chronic constriction injury of sciatic nerve,CCI）大鼠脊髓后角VGLUT2蛋白的表达显著降低;Cef通过上调GLT-1,进而上调VGLUT2的表达,而发挥抗CCI大鼠慢性神经病理性痛过敏的作用。尽管目前已经有了一些VGLUT2参与疼痛的证据,但其结果不尽相同。如,有研究发现,全身VGLUT2基因半量敲除的杂合子小鼠,在坐骨神经分支选择性损伤（spared nerve injury,SNI）后表现出机械和冷痛觉过敏的减轻,而在CCI模型中仅表现为冷痛觉过敏的减轻。因此,VGLUT2在神经病理性痛中的确切作用,以及Cef上调VGLUT2减轻痛觉过敏的确切机制,还有待进一步探讨。脊髓后角中VGLUT2免疫反应阳性神经末梢的构成复杂:既包括来源于初级传入神经元的神经末梢,又包括来源于脊髓内固有神经元的神经末梢。不同的神经末梢在伤害性信息的传递和痛觉过敏的形成中发挥着不同的作用。一般认为,无髓鞘的C纤维参与痛觉信息的传递。根据神经递质的不同,C纤维又可以分为植物凝聚素B4（isolectin B4,IB4）阳性的非肽能神经纤维和降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）阳性的肽能神经纤维。在神经病理性痛的发生发展过程中,这些与伤害性信息传递直接相关的初级传入神经末梢中VGLUT2的变化,尚不明了。因此,本课题旨在观察Cef治疗后,CCI大鼠脊髓后角不同类型C纤维末梢中VGLUT2的表达变化及其与GLT-1之间的调制关系,以期为阐明Cef抗慢性神经病理性痛过敏的机制、及GLT-1和VGLUT2在神经病理性痛中的作用提供进一步的实验依据。方法:选用健康雄性Sprague-Dawley大鼠108只,体重290±20克,随机分为以下5组:（1）Sham组（n=12）:仅暴露大鼠右侧坐骨神经但不结扎。于术前1 d、术后4 d、7 d观察大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值的变化;于术后7 d取大鼠L4-L6节段脊髓后角,用Western blot检测GLT-1和VGLUT2的表达变化,用免疫荧光双标法检测IB4和VGLUT2、CGRP和VGLUT2的共定位表达变化。（2）CCI组（n=12）:行大鼠右侧坐骨神经CCI手术。于术前1 d、术后4 d、7 d观察大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值的变化;于术后7 d取大鼠L4-L6节段脊髓后角,用Western blot检测GLT-1和VGLUT2的表达变化,用免疫荧光双标法检测IB4和VGLUT2、CGRP和VGLUT2的共定位表达变化。（3）CCI+NS+R-ODNs组（n=28）:行大鼠右侧坐骨神经CCI术,于术后当天开始给大鼠腹腔注射生理盐水（normal saline,NS）,0.72ml/kg,每日一次,连续7 d。于腹腔注射NS的同时,给大鼠椎管内注射GLT-1的无意义寡核苷酸（random oligodeoxynucleotides,R-ODNs）,每次10μl（18 nmol）。根据椎管内注射的次数,分为一次、两次和三次注射三个亚组。椎管内一次注射组（n=8）为第一次腹腔注射后3 d,给大鼠椎管内注射GLT-1 R-ODNs一次;椎管内两次注射组（n=12）为第一次腹腔注射后2 d和5 d时,分别给大鼠椎管内注射GLT-1 R-ODNs一次,共两次;椎管内三次注射组（n=8）为第一次腹腔注射后1 d、3.5 d和6 d时,分

关键词：头孢曲松钠神经病理性痛 GLT-1 VGLUT2 C纤维大鼠

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rhEPO对缺糖缺氧大鼠星形胶质细胞GLT-1和GLAST表达的影响

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动物医学进展 2016年第10期37卷 81-84页

作者：庞一强杨静吴刚汪静姜树原包头市第四医院内蒙古包头014030 包头医学院基础医学与法医学院内蒙古包头014060 包头医学院中心实验室内蒙古包头014060

为了研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对缺糖缺氧(OGD)培养大鼠星形胶质细胞GLT-1和GLAST表达的影响,将缺糖缺氧培养星形胶质细胞分成不同浓度rhEPO处理组:0、20、100U/mL,不同浓度rhEPO与星形胶质细胞在缺氧缺糖条件下培养6h,用RT-PCR... 详细信息

为了研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对缺糖缺氧(OGD)培养大鼠星形胶质细胞GLT-1和GLAST表达的影响,将缺糖缺氧培养星形胶质细胞分成不同浓度rhEPO处理组:0、20、100U/mL,不同浓度rhEPO与星形胶质细胞在缺氧缺糖条件下培养6h,用RT-PCR测定GLT-1和GLAST的mRNA表达变化,免疫印迹技术测定GLT-1和GLAST蛋白的表达变化。20、100U/mL rhEPO星形胶质细胞GLT-1的mRNA和蛋白质水平较OGD对照组明显升高(P0.05)。GLT-1水平可能与rhEPO对缺糖缺氧培养大鼠星形胶质细胞的保护作用有关。

关键词：重组人促红细胞生成素星形胶质细胞 GLT-1 GLAST 缺糖缺氧

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利鲁唑对可卡因成瘾及消退过程的影响

利鲁唑对可卡因成瘾及消退过程的影响

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作者：张海波陕西师范大学

学位级别：硕士

药物成瘾是一种慢性,复发性精神障碍。可卡因是在古柯叶中提取到的一种生物碱,具有很强的成瘾性。目前针对可卡因（Cocaine）成瘾机制的研究逐步由多巴胺系统转移至前额叶皮层与伏隔核脑区中的谷氨酸系统。利鲁唑（2-Amino-6-Trifluorom... 详细信息

药物成瘾是一种慢性,复发性精神障碍。可卡因是在古柯叶中提取到的一种生物碱,具有很强的成瘾性。目前针对可卡因（Cocaine）成瘾机制的研究逐步由多巴胺系统转移至前额叶皮层与伏隔核脑区中的谷氨酸系统。利鲁唑（2-Amino-6-Trifluoromethoxybenzothiazole,Riluzole）是由美国 FAD（Food and Drug Administration）批准治疗肌肉萎缩性脊索硬化症（Amyotrophic Lateral Sclerosis,ALS）的一种药物,其主要功能是激活谷氨酸转运体,将突触间多余的谷氨酸转移至胶质细胞中,稳定谷氨酸内稳态。谷氨酸内稳态在可卡因成瘾中具有极为重要的作用,GLT-1（Glutamate Transporter 1,GLT-1）与谷胱反向转运体（Cystine/Glutamate reverse transporter,Xc-）中 xCT 蛋白分别是谷氨酸系统内重要的转运体与蛋白组成部分。目前,研究者对于可卡因成瘾过程中GLT-1与xCT蛋白表达是否发生变化,仍存在争议。另外,可以增强谷氨酸转运体功能的利鲁唑能否影响可卡因成瘾也存在疑问。本课题利用慢性可卡因诱导的小鼠条件位置偏爱模型,观察利鲁唑对可卡因成瘾过程与消退过程的影响,以及两种调控谷氨酸内稳态的蛋白GLT-1,xCT的表达变化。主要研究内容与结果如下:（1）建立可卡因成瘾诱导的小鼠条件位置偏爱模型。取体重20-30 g雄性C57/BL6J小鼠,共分为三组:对照组（注射生理盐水）,10 mg/kg可卡因组和20 mg/kg可卡因组。所有小鼠放入条件位置偏爱箱一侧前注射对应溶剂或可卡因,第二天全部注射生理盐水放入对侧箱中,总共训练三个循环,之后通过测量每只小鼠在条件位置偏爱箱给药箱时间占比。最终结果表明相比对照组,两个浓度的可卡因均诱导了条件位置偏爱,且10 mg/kg与20 mg/kg可卡因两组组间无统计学差异,故在后续的研究中,可卡因使用10 mg/kg浓度。（2）研究利鲁唑对可卡因成瘾过程的影响。将小鼠分为三组（溶剂组、4 mg/kg利鲁唑组和8 mg/kg利鲁唑组）,在小鼠每次注射10 mg/kg可卡因前半小时,对三组小鼠分别注射利鲁唑溶剂,4 mg/kg利鲁唑与8 mg/kg利鲁唑,三轮训练后测量偏爱箱时间占比。结果发现8 mg/kg组在经过三轮训练后,可卡因成瘾不能诱导的条件位置偏爱现象,而其他两组小鼠,条件位置偏爱现象依然存在。说明利鲁唑浓度依赖的抑制了慢性可卡因诱导的条件位置偏爱。（3）研究利鲁唑对可卡因成瘾后消退过程的作用。将已建立可卡因成瘾诱导的条件位置偏爱模型小鼠分为三组（溶剂组、4 mg/kg利鲁唑组和8 mg/kg利鲁唑组）,每天分别注射利鲁唑溶剂、4 mg/kg利鲁唑与8 mg/kg利鲁唑,半小时后测量小鼠在给药箱时间占比,确定小鼠是否存在条件位置偏爱。结果显示8mg/kg组的条件位置偏爱于第六日消失,第八日与第九日连续两天与其他两组产生统计学差异。说明利鲁唑浓度依赖的促进了可卡因成瘾的消退过程。（4）研究可卡因成瘾以及给予利鲁唑干预后小鼠前额叶皮层与伏隔核内GLT-1蛋白与xCT蛋白表达量的变化。利用Western blot法测定未成瘾组,成瘾组,与利鲁唑干预组前额叶皮层与伏隔核GLT-1蛋白与xCT蛋白表达量的变化,发现与未成瘾组相比,成瘾组伏隔核GLT-1,与xCT蛋白表达量均下调,而前额叶皮层内只有xCT蛋白表达量下调,GLT-1蛋白表达量无显著变化;与成瘾组相比,经8mg/kg利鲁唑干预组伏隔核GLT-1蛋白表达量升高。成瘾组与利鲁唑干预组相比伏隔核xCT蛋白,前额叶皮层GLT-1,xCT蛋白均无显著变化。根据本研究的结果可以猜测:可卡因成瘾可能与GLT-1和xCT蛋白表达的下降有关,而利鲁唑可能通过增加伏隔核内GLT-1蛋白的表达促进可卡因成瘾的消退过程。这一发现可能为研究可卡因成瘾机制,治疗可卡因成瘾提供新的思路。

关键词：可卡因利鲁唑谷氨酸内稳态 GLT-1 xCT 条件位置偏爱

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