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Design of a highly potent glp-1r and GCGr dual-agonist for recovering hepatic fibrosis

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Acta Pharmaceutica Sinica B 2022年第5期12卷 2443-2461页

作者： Nazi Song Hongjiao Xu Jiahua Liu Qian Zhao Hui Chen Zhibin Yan runling Yang Zhiteng Luo Qi Liu Jianmei Ouyang Shuohan Wu Suijia Luo Shuyin Ye runfeng Lin Xi Sun Junqiu Xie Tian Lan Zhongdao Wu rui Wang Xianxing Jiang School of Pharmaceutical Sciences Guangdong Provincial Key Laboratory of Chiral Molecule and Drug DiscoverySun Yat-sen UniversityGuangzhou 510006China Department of Parasitology of Zhongshan School of Medicine Sun Yat-sen UniversityGuangzhou 510006China Key Laboratory of Tropical Disease Control Ministry of EducationSun Yat-sen UniversityGuangzhou 510006China Provincial Engineering Technology research Center for Biological Vector Control Sun Yat-sen UniversityGuangzhou 510006China research Unit of Peptide Science Chinese Academy of Medical SciencesLanzhou 730000China Key Laboratory of Preclinical Study for New Drugs of Gansu Province School of Basic Medical SciencesLanzhou UniversityLanzhou 730000China Shenzhen Turier Biotech.Co. Ltd.Shenzhen 518118China Guangdong Pharmaceutical University Guangzhou 510006China

Currently, there is still no effective curative treatment for the development of late-stage liver fibrosis. Here, we have illustrated that TB001, a dual glucagon-like peptide-1 receptor/glucagon receptor(glp-1 r/GCGr) agonist with higher affinity towards GCGr, could retard the progression of liver fibrosis in various rodent models, with remarkable potency, selectivity, extended half-life and low toxicity. Four types of liver fibrosis animal models which were induced by CCl_(4), a-naphthyl-isothiocyanate(ANIT), bile duct ligation(BDL) and Schistosoma japonicum were used in our study. We found that TB001 treatment dose-dependently significantly attenuated liver injury and collagen accumulation in these animal models. In addition to decreased levels of extracellular matrix(ECM) accumulation during hepatic injury, activation of hepatic stellate cells was also inhibited via suppression of TGF-β expression as well as downstream Smad signaling pathways particularly in CCl_(4)-and S. japonicum-induced liver fibrosis. Moreover, TB001 attenuated liver fibrosis through blocking downstream activation of proinflammatory nuclear factor kappa B/NF-kappa-B inhibitor alpha(NFκB/IKBa) pathways as well as cJun N-terminal kinase(JNK)-dependent induction of hepatocyte apoptosis. Furthermore, glp-1 r and/or GCGr knock-down results represented GCGr played an important role in ameliorating CCl_(4)-induced hepatic fibrosis. Therefore, TB001 can be used as a promising therapeutic candidate for the treatment of multiple causes of hepatic fibrosis demonstrated by our extensive pre-clinical evaluation of TB001.

关键词： glp-1r GCGr Liver fibrosis Inflammation Apoptosis Candidate peptides

Glucagon peptide-like 1 receptor (glp-1r) expression per se: a new insight into neurodegenerative disease?

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Neural regeneration research 2015年第7期10卷 1055-1057页

作者： Dong-il Kim Soo-hyun Park College of Veterinary Medicine Chonnam National University

Glucagon peptide-like 1（glp-1）and glp-1 receptor（glp-1r）：glp-1 is an incretin hormone secreted from gut L cells.glp-1 exerts its action through binding to its specific receptor,glp-1r,which is a member of the G protein-coupled receptor superfamily.glp-1r is reportedly expressed in various organs,such as the liver,kidney,and peripheral tissues.

关键词： glp-1r a new insight into neurodegenerative disease expression per se Glucagon peptide-like 1 receptor

glp-1r激动剂利拉鲁肽缓解氯氮平神经毒性的机制研究

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GLP-1R激动剂利拉鲁肽缓解氯氮平神经毒性的机制研究

作者：汪理伟中南大学

学位级别：硕士

研究背景:氯氮平(CLZ)是治疗难治性精神分裂症的首选药物,但长期使用会加重患者认知功能损害,从而限制其临床使用。课题组前期体外研究发现,CLZ致PC12细胞产生神经毒性并下调孕酮受体膜成分1(PGrMC1)、胰高血糖素样肽-1受体(glp-1r)和... 详细信息

研究背景:氯氮平(CLZ)是治疗难治性精神分裂症的首选药物,但长期使用会加重患者认知功能损害,从而限制其临床使用。课题组前期体外研究发现,CLZ致PC12细胞产生神经毒性并下调孕酮受体膜成分1(PGrMC1)、胰高血糖素样肽-1受体(glp-1r)和线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达。但目前没有特异性能够上调PGrMC1的药物。大量研究报道,glp-1r激动剂利拉鲁肽(LIrA)在多种神经退行性疾病中具有神经保护作用。因此,glp-1r可能是CLZ所致神经毒性及LIrA缓解CLZ所致神经毒性的一个重要作用靶点。研究目的:探究LIrA是否能够缓解CLZ所致神经毒性以及上述过程是否通过调控PGrMC1、glp-1r、Mfn2蛋白及线粒体功能介导。研究方法:本课题分为LIrA缓解CLZ神经毒性验证和机制探究两部分。第一部分探究LIrA是否能缓解CLZ所引起的神经毒性:雄性SD大鼠随机分为空白溶剂组(Con)、CLZ组、LIrA组、exendin9-39(Ex9)组、CLZ+LIrA组、CLZ+LIrA+Ex9组。腹腔注射连续给药3周后,通过旷场、Y迷宫、水迷宫测试评价大鼠焦虑、记忆和认知功能。行为学实验结束后对部分大鼠全脑进行固定,HE染色检测大鼠海马和皮质神经元数目和形态,TUNEL染色检测神经元凋亡,尼氏染色检测神经元神经病理改变。第二部分为LIrA缓解CLZ所致神经毒性的机制研究。取海马和前额叶皮质组织(1)透射电子显微镜观察海马和前额叶皮质中线粒体的微观结构。(2)Western blot检测海马和前额叶皮质中PGrMC1、glp-1r、Mfn2蛋白的表达水平。(3)通过比色法测定海马和前额叶皮质中氧化应激指标丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量。(4)采用气相色谱-三重四极杆质谱联用测定海马和前额叶皮质内三羧酸循环代谢标志物水平。(5)采用比色法测定海马和前额叶皮质中ATP的含量。通过测定以上的指标,探究LIrA缓解CLZ所致神经毒性是否与改善线粒体功能有关。结果:1、行为学实验结果:旷场实验中各组大鼠运动总路程无显著性差异。CLZ组相较于Con组大鼠中心区域活动时间和中心区域活动距离减少,联用LIrA后中心区域活动时间和中心区域活动距离增加,但CLZ+LIrA+Ex9可以逆转联用LIrA对中心区域活动时间的改善作用。Y迷宫中CLZ处理可降低大鼠自发交替百分比,在联用LIrA后自发交替百分比显著改善。水迷宫中各组大鼠游泳速度无明显区别。在空间探索实验中,CLZ相较于Con组其穿越平台次数和在平台所在象限活动时间显著减少,联用LIrA后能显著提高大鼠穿越平台次数和在平台所在象限活动时间,但CLZ+LIrA+Ex9可以逆转联用LIrA对大鼠穿越平台次数的改善作用。2、组化结果:海马和皮质HE染色结果均显示CLZ组、Ex9组、CLZ+LIrA+Ex9组神经元排列较为疏松,可见神经元胞体胞核固缩和噬神经现象,部分细胞质呈空泡状。Con组、LIrA组、CLZ+LIrA组神经元排列整齐紧密、结构清晰。TUNEL染色结果显示CLZ组、Ex9组、CLZ+LIrA+Ex9组海马和皮质中存在绿色荧光,表明有部分神经元凋亡。Con组、LIrA组、CLZ+LIrA组中无绿色荧光。尼氏染色结果显示CLZ组、Ex9组、CLZ+LIrA+Ex9组海马和皮质中尼氏体固缩,尼氏小体数量减少,相比之下Con组、LIrA组、CLZ+LIrA组中尼氏小体排列紧密整齐,结构完整。3、线粒体超微结构:CLZ组、Ex9组、CLZ+LIrA+Ex9组海马和前额叶皮质中线粒体发生明显肿胀,线粒体嵴断裂减少甚至完全消失,部分线粒体形态不规则,CLZ+LIrA组较CLZ组线粒体结构有明显改善,Con组、LIrA组线粒体形态规则,线粒体嵴清晰。4、线粒体功能相关蛋白表达情况:在海马或前额叶皮质中,与Con组相比,CLZ、Ex9显著降低PGrMC1、glp-1r、Mfn2的表达水平,联用LIrA显著逆转由CLZ引起的蛋白水平表达下降,CLZ+LIrA+Ex9组相较于CLZ+LIrA组PGrMC1、glp-1r、Mfn2的表达水平显著下降。5、氧化应激指标:相较于Con组,CLZ组和Ex9组海马和前额叶皮质中MDA水平升高,联用LIrA后MDA水平显著下降。但在海马和前额叶皮质中,各组之间SOD水平无统计学差异。6、三羧酸循环代谢标志物:在海马和前额叶皮质组织中,CLZ、Ex9均能降低乳酸、丙酮酸、柠檬酸、琥珀酸及苹果酸的水平,联用LIrA后,海马和前额叶皮质柠檬酸、琥珀酸及苹果酸的水平升高。相较于CLZ+LIrA组,CLZ+LIrA+Ex9组柠檬酸、琥珀酸及苹果酸的水平降低。7、ATP水平:在海马及前额叶皮质中,与Con组相比,CLZ组、Ex9组ATP水平显著降低,联用LIrA后逆转这一现象,但CLZ+LIrA+Ex9组相较于CLZ+LIrA组ATP水平显著下降

关键词：氯氮平利拉鲁肽 glp-1r 神经毒性认知功能线粒体功能

PGrMC1/glp-1r/Mfn2介导的线粒体功能紊乱在氯氮平所致神经毒性中的作用

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PGRMC1/GLP-1R/Mfn2介导的线粒体功能紊乱在氯氮平所致神经毒性中...

作者：陈茜中南大学

学位级别：硕士

研究背景:精神分裂症是一种复杂多样的行为与认知综合征。认知障碍是精神分裂症除了阳性症状与阴性症状以外的第三个核心症状,严重影响患者的病情与生存质量。药物是精神分裂症的主要治疗方式,其中,氯氮平是治疗抵抗性精神分裂症的首选... 详细信息

研究背景:精神分裂症是一种复杂多样的行为与认知综合征。认知障碍是精神分裂症除了阳性症状与阴性症状以外的第三个核心症状,严重影响患者的病情与生存质量。药物是精神分裂症的主要治疗方式,其中,氯氮平是治疗抵抗性精神分裂症的首选药物。然而,课题组前期发现氯氮平可通过下调PGrMC1蛋白导致糖脂代谢异常以及神经毒性副作用。研究表明线粒体对认知功能以及神经元功能的维持起到关键作用,本研究拟从线粒体功能角度出发,进一步探讨氯氮平所致的神经毒性以及PGrMC1蛋白在氯氮平所致神经毒性中的作用。目的:1.探讨氯氮平是否可以调节PGrMC1/glp-1r/Mfn2通路,导致线粒体功能紊乱,从而造成神经毒性。2.探究PGrMC1在氯氮平所造成神经毒性中的关键作用。方法:本课题分为药物-受体结合实验、细胞实验以及动物实验三部分。1.药物-受体结合实验采用表面等离子共振技术探讨氯氮平、奥氮平、利培酮、阿立哌唑、孕酮以及AG205与靶蛋白PGrMC1的相互作用动力学参数。2.细胞实验使用PC12细胞,探讨氯氮平与PGrMC1特异性抑制剂AG205对PC12细胞的神经毒性以及线粒体功能的影响;通过慢病毒过表达与敲低靶蛋白PGrMC1,探讨PGrMC1在氯氮平所致神经毒中发挥的作用。(1)CCK-8法测定不同浓度以及不同时间氯氮平干预下,氯氮平对细胞活力的影响;测定不同浓度氯氮平对PC12细胞线粒体功能包括线粒体超氧化物生成与线粒体膜电位的影响,以及检测不同浓度氯氮平对PGrMC1、glp-1r与Mfn2蛋白的影响,确定后续实验中氯氮平的浓度。(2)CCK-8法测定不同浓度以及不同时间AG205干预下,AG205对细胞活力的影响;测定不同浓度AG205对PC12细胞粒体功能的影响,以及检测PGrMC1、glp-1r与Mfn2蛋白表达的水平。(3)构建过表达与敲低PGrMC1基因的慢病毒载体,通过荧光表达量以及PGrMC1蛋白表达水平验证感染效果并进行后续实验。实验分组为正常对照组(normal control组,nc组),PGrMC1过表达+氯氮平组(PGrMC1 overexpression+clozapine组,oe+clz组),PGrMC1敲低组(PGrMC1 knockdown组,kd组)与空白载体+氯氮平组(clz组),进一步探讨PGrMC1在氯氮平所致PC12细胞线粒体功能紊乱中所发挥的作用。3.动物实验使用雄性成年SD大鼠,实验设置对照组(normal control组,nc组)、PGrMC1过表达+氯氮平给药组(PGrMC1overexpression+clozapine组,oe+clz组)、PGrMC1敲低组(PGrMC1knockdown组,kd组)与空白AAV载体+氯氮平组(clozapine组,clz组)。PGrMC1过表达与敲低工具通过课题组前期验证,采取跨血脑屏障重组腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)方法。空白溶媒与氯氮平通过腹腔注射,连续给药28天,水迷宫实验检测大鼠认知功能。TUNEL染色检测海马组织细胞凋亡情况,Nissl染色检测海马CA1区以及CA3区神经元形态,以及检测海马组织PGrMC1、glp-1r与Mfn2蛋白水平变化。结果:1.表面等离子共振实验结果:(1)根据解离平衡常数KD值的比较,氯氮平、奥氮平、利培酮、阿立哌唑及AG205的KD值均小于孕酮,说明这些药物与PGrMC1的相互作用均强于内源性配体孕酮。(2)根据解离平衡常数KD值的比较,亲和力顺序由大到小依次为:利培酮>AG205>阿立哌唑>氯氮平>奥氮平>孕酮。(3)综合氯氮平、奥氮平、利培酮与阿立哌唑的KD值之倒数与最高有效血药浓度以及亲脂常数三者之乘积,上述四种药物与PGrMC1的相互作用由大到小依次是:氯氮平>阿立哌唑>利培酮>奥氮平。2.细胞实验结果:(1)氯氮平对PC12细胞的损伤作用与剂量和时间有关,随着干预剂量和时间的增加,细胞活力下降;氯氮平干预24h,随着药物浓度的增加,会导致PC12细胞线粒体超氧化物生成增加以及线粒体膜电位下降;20μM以及40μM氯氮平干预24h可以下调PC12细胞PGrMC1与glp-1r蛋白、80μM氯氮平干预24h可以下调PC12细胞PGrMC1、glp-1r与Mfn2蛋白水平。(2)相同干预时间下,随着AG205浓度增加,细胞活力下降,而干预浓度相同,细胞活力随着干预时间增加而降低;AG205干预24h,随着AG205浓度的增加,PC12细胞线粒体超氧化物生成增加以及线粒体膜电位下降;24h AG205干预下,随着其浓度的增加,PGrMC1蛋白表达水平呈现下降趋势、10μM以及20μM AG205干预PC12细胞24h可以下调Mfn2蛋白、40μM以及80μM AG205干预PC12细胞24h,可以下调glp-1r与Mfn2蛋白。(3)慢病毒过表达与敲低靶蛋白PGrMC1

关键词：氯氮平神经毒性 PGrMC1 glp-1r Mfn2 线粒体功能

glp-1类似物利拉鲁肽通过glp-1r依赖和非依赖两种途径减轻急性肾损伤

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GLP-1类似物利拉鲁肽通过GLP-1R依赖和非依赖两种途径减轻急性肾...

作者：许聪华中科技大学

学位级别：硕士

目的:研究利拉鲁肽作为胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物,其对顺铂诱导的急性肾损伤的保护作用,以及其肾保护作用与胰高血糖素样肽-1受体(glp-1r)的关系方法:选取6-8周龄、雄性C57BL/6J小鼠以及glp-1r小鼠(C57为背景),具体为:(1)C57正常... 详细信息

目的:研究利拉鲁肽作为胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物,其对顺铂诱导的急性肾损伤的保护作用,以及其肾保护作用与胰高血糖素样肽-1受体(glp-1r)的关系方法:选取6-8周龄、雄性C57BL/6J小鼠以及glp-1r小鼠(C57为背景),具体为:(1)C57正常对照组;(2)C57顺铂造模组;(3)glp-1r顺铂造模组;(4)C57顺铂造模+利拉鲁肽治疗组;(5)glp-1r顺铂造模+利拉鲁肽治疗组,观察腹腔注射顺铂(15mg/kg)4天后,小鼠肾功能以及肾脏炎性浸润情况。将小鼠分为:(1)C57正常组;(2)C57顺铂造模组;(3)C57顺铂造模+glp-1(9-37)治疗组;(4)glp-1r顺铂造模+glp-1(9-37)治疗组;(5)C57顺铂造模+glp-1(28-37)治疗组;(6)glp-1r顺铂造模+glp-1(28-37)治疗组,同样观察造模四天后,小鼠肾功能以及肾脏炎性浸润情况。体外选取人肾小管上皮细胞(HK-2),具体分组为:(1)正常对照组;(2)顺铂造模组;(3)Si NC+利拉鲁肽治疗组;(4)Si glp-r+利拉鲁肽治疗组;(5)Si NC+glp-1(9-37)治疗组;(6)Si glp-r+glp-1(9-37)治疗组;(7)Si NC+glp-1(28-37)治疗组;(8)Si glp-r+glp-1(28-37)治疗组,用流式细胞术检测刺激24h后细胞的凋亡比例。结果:就C57小鼠而言,顺铂造模组的小鼠肌酐和尿素氮的水平显著增高,而利拉鲁肽治疗能明显降低顺铂引起的小鼠肌酐和尿素氮的升高。而glp-1r小鼠与C57小鼠相比,二者在顺铂造模组中肌酐和尿素氮水平没有明显差异;利拉鲁肽治疗组中glp-1r小鼠肌酐和尿素氮水平高于C57小鼠;而glp-1r小鼠在利拉鲁肽治疗组中的肌酐、尿素氮值低于其在顺铂造模组,这些结果共同说明利拉鲁肽可明显减轻由顺铂导致的小鼠急性肾损伤,而其肾保护作用部分依赖于glp-1r。之后的动物实验中我们发现,无论是C57小鼠还是glp-1r小鼠,glp-1(9-37)和glp-1(28-37)能明显降低顺铂引起的小鼠肌酐和尿素氮水平的增高。这说明利拉鲁肽代谢物glp-1(9-37)和glp-1(28-37)同样具有肾保护作用,且该作用是受体非依赖的的。细胞实验的结果也说明,与利拉鲁肽不同,其代谢物对肾小管上皮细胞的保护是glp-1r非依赖的。相关的机制探究表明,利拉鲁肽与其代谢物均可以抑制由顺铂导致的肾小管上皮细胞中HMGB1的核浆转移和释放,从而减轻由HMGB1引起的肾脏炎性损害。结论:利拉鲁肽作为glp-1类似物,一方面可通过作用于glp-1r减轻由顺铂导致的小鼠急性肾损伤,另一方面其在体内可代谢为glp-1(9-37)及glp-1(28-37)等较小的肽链,这些代谢物也可发挥肾保护作用且不依赖于受体。同时还证明,利拉鲁肽与其代谢物均可以减少顺铂所诱导的肾小管上皮细胞中HMGB1的核浆转移和释放,减轻肾脏炎性损伤。

关键词：利拉鲁肽 glp-1r glp-1(9-37) glp-1(28-37) 急性肾损伤

京尼平苷通过glp-1r/ABCA1信号轴抑制地塞米松诱导的成骨细胞胆固醇蓄积

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京尼平苷通过GLP-1R/ABCA1信号轴抑制地塞米松诱导的成骨细胞胆固...

作者：郑宜洲赣南医学院

学位级别：硕士

背景:长期的糖皮质激素使用可导致骨质疏松(Osteoporosis,OP)、血脂异常和高胆固醇血症等临床病症。京尼平苷(Geniposide,GEN)是杜仲的有效活性成分之一。杜仲已经被运用到临床治疗OP,GEN也被指出可能具有降低血脂和胆固醇作用。前期研... 详细信息

背景:长期的糖皮质激素使用可导致骨质疏松(Osteoporosis,OP)、血脂异常和高胆固醇血症等临床病症。京尼平苷(Geniposide,GEN)是杜仲的有效活性成分之一。杜仲已经被运用到临床治疗OP,GEN也被指出可能具有降低血脂和胆固醇作用。前期研究指出,体外GEN可有效逆转地塞米松(Dexamethasone,DEX)对成骨细胞(Osteoblasts,OBs)分化的抑制。然而,GEN对DEX诱导的OBs内胆固醇蓄积的调控仍旧不明确。目的:探索GEN能否通过抑制DEX诱导OBs的胆固醇蓄积,促进细胞分化。方法:1.建立糖皮质激素骨质疏松大鼠模型。选取6～8周的SD大鼠,随机分配为正常组(NC)、模型组(Model)、GEN低剂量组(Model+50 mg/kg GEN)和GEN高剂量组(Model+100 mg/kg GEN),按照5 mg/kg剂量肌肉注射地塞米松磷酸钠,每周2次,同时每日采用灌胃方式给予GEN,剂量分别为50 mg/kg和100mg/kg。饲养16周后,牺牲大鼠,取大鼠股骨进行Micro-CT扫描、HE组织染色和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色。2.体外成骨细胞MC3T3-E1培养在骨分化诱导培养基(Osteogenic induction medium,OIM),采用茜素红S染色法评判OBs的钙沉积情况。3.体外MC3T3-E1细胞培养在OIM中,采用碱性磷酸酶染色法评判OBs的ALP活性。4.体外MC3T3-E1细胞培养在OIM中,胆固醇孵育,采用MTT法检测OBs的活性。5.体外MC3T3-E1细胞培养在OIM中,采用ELISA法检测OBs胞内胆固醇含量。6.体外MC3T3-E1细胞培养在OIM中,Western-blot法检测OBs的OPN、rUNX2、glp-1r、ABCA1和ApoA-I的蛋白表达情况。结果:1.GEN缓解DEX诱导的大鼠OPHE染色表明,相比较NC组,DEX组大鼠骨小梁更细且结构紊乱。此外,Micro-CT扫描显示,DEX促进大鼠骨小梁丢失,降低大鼠骨密度,提高骨小梁参数Tb.Sp和SMI,降低骨小梁参数Tb.Th、Tb.N、BS、BV、BS/TV、BV/TV。然而,低剂量和高剂量的GEN处理明显逆转DEX诱导的骨小梁的损伤。因此GEN缓解DEX对大鼠骨微结构的破坏。2.GEN逆转DEX诱导的OBs分化抑制IHC表明,相比较NC组,DEX组大鼠骨小梁OBs表达更低的OBs分化标志因子蛋白rUNX2和OPN。同时,体外实验表明,DEX的处理抑制OBs的矿化和ALP活性,以及抑制rUNX2和OPN的蛋白表达。然而,在体内外实验中,低剂量和高剂量的GEN处理都逆转DEX对OBs的rUNX2和OPN蛋白表达的抑制。因此,GEN改善DEX对OBs分化的抑制。3.GEN逆转DEX诱导的OBs胆固醇蓄积MTT实验表明,梯度浓度的胆固醇抑制OBs的活力。同时,胆固醇的处理提高OBs胞内胆固醇含量以及抑制细胞rUNX2和OPN的蛋白表达。此外,DEX诱导OBs胞内胆固醇蓄积,但是GEN的处理缓解DEX促进细胞胆固醇蓄积。因此,GEN可能通过降低OBs胞内胆固醇蓄积而促进细胞分化。4.GEN通过上调ABCA1蛋白水平而缓解DEX诱导的OBs的胆固醇蓄积IHC表明,相比较NC组,DEX组大鼠的OBs具有更高的ABCA1蛋白水平,低剂量和高剂量GEN的处理进一步提高大鼠OBs的ABCA1蛋白水平。此外,体外实验也指出,DEX的处理提高OBs的ABCA1和ApoA-I蛋白水平,GEN进一步促进这两者的提升。另外,添加ABCA1功能抑制剂DIDS处理细胞后,研究发现OBs胞内胆固醇含量明显提高,细胞的ABCA1和ApoA-I的蛋白水平明显降低,OBs的矿化和ALP活性下降,rUNX2和OPN的蛋白表达被抑制。因此,GEN通过提高OBs的ABCA1蛋白水平而缓解DEX诱导的胞内胆固醇蓄积,改善OBs分化。5.GEN通过激活glp-1r表达而促进ABCA1介导的OBs胆固醇代谢IHC表明,相比较NC组,DEX组大鼠的骨小梁OBs表达更低的glp-1r蛋白。体外实验也表明,DEX的处理抑制OBs的glp-1r表达。此外,在添加glp-1r抑制剂艾塞那肽(Exendin 9-39,EX)处理OBs后,研究发现OBs的glp-1r蛋白水平明显降低,胞内胆固醇含量显著提高,细胞ABCA1的蛋白表达被抑制,OBs的矿化和ALP活性下降,OBs的rUNX2和OPN的蛋白表达下降。因此,GEN通过激活OBs的glp-1r表达,进而促进细胞ABCA1的表达,抑制胞内胆固醇蓄积,促进OBs的分化。结论:综上所述,GEN通过激活OBs的glp-1r/ABCA1信号轴而抑制DEX诱导的OBs胞内胆固醇蓄积,促进OBs分化,改善OP。

关键词：糖皮质激素骨质疏松京尼平苷 glp-1r ABCA1

glp-1r基因敲除的THP-1细胞系建立及其功能研究

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GLP-1R基因敲除的THP-1细胞系建立及其功能研究

作者：王文文湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:巨噬细胞具有高度异质性和可塑性。在不同系统中不同的疾病或同一疾病的不同阶段,巨噬细胞可以发生表型变化,从而履行不同的功能。随着研究的深入,胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,glp-1)在调控巨噬细胞迁移及表型分化... 详细信息

背景:巨噬细胞具有高度异质性和可塑性。在不同系统中不同的疾病或同一疾病的不同阶段,巨噬细胞可以发生表型变化,从而履行不同的功能。随着研究的深入,胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,glp-1)在调控巨噬细胞迁移及表型分化等方面发挥着一定作用。目的:通过Cas9慢病毒介导的方法构建glp-1r基因稳定敲除THP-1细胞系,探究glp-1r表达对巨噬细胞迁移、极化的影响。方法:通过构建对glp-1r基因的特异性打靶慢病毒载体,建立glp-1r-/-THP-1细胞系,使用嘌呤霉素进行筛选,克隆后通过基因测序和蛋白印迹实验(Westem blot,WB)进行鉴定。根据构建结果对不同细胞分类:野生型组(WT组):THP-1细胞;glp-1r-/-组(KO组):glp-1r-/-THP-1细胞。分别用佛波酯(PMA)、干扰素γ(INF-γ)+脂多糖(LPS)、白介素4(IL-4)刺激WT组、KO组,进一步构建WT组、KO组MO、M1、M2型巨噬细胞模型。流式检测细胞表面分子CD14、CD80、CD206 的表达;qrT-PCr检测 CD68、IL-6、TNF-α、iNOS、IFN-γ、IL-10、CD206、CD163、Arg-1 mrNA的表达。Transwenll和划痕实验检测glp-1r对巨噬细胞的迁移情况;结果:(1)基因测序及WB结果证实,glp-1r-/--THP-1细胞系构建成功:(2)流式细胞术结果显示:M0型巨噬细胞高表达CD14+,M1型高表达CD14+CD80+;M2型高表达CD14+CD206+;(3)qrT-PCr结果显示:与WT组相比,用PMA诱导得到WT M0的CD68 m rNA表达显著上调(PrNA表达显著上调(PrNA表达明显升高,M2型巨噬细胞标志物mrNA表达显著降低。(4)glp-1r能够影响巨噬细胞的迁移;结论:本研究通过Cas9慢病毒成功构建了一株glp-1r基因敲除的THP-1细胞系,并通过对不同细胞系的诱导分化研究得出glp-1r基因缺乏可诱导巨噬细胞分泌促炎因子,向M1型巨噬细胞极化。glp-1r可促使巨噬细胞分泌抗炎因子,向M2型巨噬细胞极化。

关键词： CrISPr/Cas9 glp-1r THP-1 基因敲除极化

葛根素激活glp?1r通路改善高脂诱导的HFD小鼠高血糖水平（英文）

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南京中医药大学学报 2017年第6期33卷 587-590页

作者：王春俊鞠霖杰温小花王佳黎舒娈安徽中医药大学药学院安徽合肥230031 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室江苏南京210028

目的探讨葛根素对高脂诱导的HFD小鼠高血糖水平的影响以及glp-1r通路在葛根素降糖功效中的作用。方法以高脂诱导的HFD(High-fat-diet)糖尿病小鼠模型为对象,采用glp-1受体拮抗剂Exendin 9-39(Ex 9-39)用以阻断glp-1r通路的激活,通过动... 详细信息

目的探讨葛根素对高脂诱导的HFD小鼠高血糖水平的影响以及glp-1r通路在葛根素降糖功效中的作用。方法以高脂诱导的HFD(High-fat-diet)糖尿病小鼠模型为对象,采用glp-1受体拮抗剂Exendin 9-39(Ex 9-39)用以阻断glp-1r通路的激活,通过动物体内实验进一步评价glp-1r通路在葛根素降糖功效中的作用。结果葛根素能够有效降低HFD小鼠血糖水平并改善HFD小鼠口服葡萄糖耐受能力,而Ex 9-39显著抑制葛根素的降糖作用,并且葛根素促进小鼠胰岛素分泌的作用也被Ex 9-39所阻断。通过小鼠胰腺组织切片免疫荧光染色检测观察到,葛根素能够增加HFD小鼠胰岛β细胞中ki67的表达,提示其能够促进胰岛β细胞增殖,当Ex 9-39阻断glp-1r通路激活时,葛根素的作用被抑制。结论本研究首次在糖尿病小鼠模型中,证实葛根素降糖及改善胰岛β细胞生存的作用依赖于glp-1r通路的激活,为今后葛根降糖的潜在开发应用奠定实验基础。

关键词： Exendin 9-39 glp-1r 葛根素 2型糖尿病

摩腹对2 型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和胰腺glp-1r 的影响

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时珍国医国药 2021年第4期32卷 998-1000页

作者：孔心甜谢舟煜徐景崧徐忻卞向宇吴云川南京中医药大学针灸推拿学院·养生康复学院江苏南京210023

目的研究摩腹对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和胰腺glp-1r蛋白表达的影响。方法高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素造模方法建立2型糖尿病大鼠模型。从40只SD大鼠中随机抽取6只作为空白组,其余34只采用高糖高脂饲料喂养4周后按25mg/kg的... 详细信息

目的研究摩腹对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和胰腺glp-1r蛋白表达的影响。方法高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素造模方法建立2型糖尿病大鼠模型。从40只SD大鼠中随机抽取6只作为空白组,其余34只采用高糖高脂饲料喂养4周后按25mg/kg的剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病(T2DM)模型,将造模成功大鼠随机分为摩腹组、模型组和阳性药物组。以神阙为中心,以神阙至天枢的距离为半径,对摩腹组大鼠进行顺时针摩腹,每次干预20min,每日1次,每周5次,持续8周。干预结束后,检测各组大鼠血糖水平、血清胰岛素和胰腺glp-1r表达,并计算胰岛素抵抗指数和观察胰岛形态。结果摩腹组空腹血糖、口服葡萄糖耐量的曲线下面积(OGTT-AUC)、血清胰岛素及胰岛素抵抗指数均显著低于模型组但高于空白组(P0.05)。摩腹组胰腺glp-1r蛋白相对表达量显著高于模型组(Pglp-1r表达,减轻胰岛结构损伤,改善胰岛素抵抗,从而降低血糖。

关键词：摩腹 2型糖尿病胰岛素抵抗 glp-1r