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Asian Pacific Journal of tropical Biomedicine 2023年第10期13卷 431-442页

作者： Sania Grover Raj Kumar Narang Shamsher Singh I.K.Gujral Punjab technical University JalandharPunjabIndia Department of Pharmaceutics ISF College of Pharmacy(An Autonomous College)Moga-142001PunjabIndia Neuroscience Division Department of PharmacologyISF College of Pharmacy(An Autonomous College)Moga-142001PunjabIndia

Objective:to assess the effect of sericin against pentylenetetrazole(PtZ)kindling epilepsy and its associated ***:Epilepsy was induced with PtZ at the dose of 30 mg/kg *** alternative days for 25 days in *** was administered orally at the doses of 250,500,and 1000 mg/kg for 35 *** behavioral activities were performed using an elevated plus maze,forced swim test,and Morris water maze test.A PtZ challenge test was conducted on day *** day 35,rats were sacrificed to perform oxidative stress,mitochondrial dysfunction,neuroinflammation,neurotransmitters,gaba-t activity,and histopathological ***:Sericin at 500 and 1000 mg/kg significantly reduced behavioral changes and neuroinflammatory cytokines,as well as improved oxidative stress,mitochondrial enzyme complex activity,neurotransmitter level,and gaba-t enzymatic activity(Pthe neuronal survival altered by PtZ kindling in rat ***:Sericin mitigates epilepsy-associated secondary complications possibly by the modulation of mitochondrial enzyme complexes and gaba-t enzymatic activity.

关键词： Pentylenetetrazole Sericin gaba-t Epilepsy Anxiety Cognitive impairment

gaba-t对雌性大鼠初情期和繁殖性能的影响

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GABA-T对雌性大鼠初情期和繁殖性能的影响

作者：司文宇安徽农业大学

学位级别：硕士

目的:本文旨在探讨参与γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,gaba)分解代谢的γ-氨基丁酸转氨酶(γ-aminobutyric acid transaminase,gaba-t)及其基因在不同发育阶段雌性大鼠生殖轴中的表达规律,以及抑制gaba-t对SD雌性大鼠初情期和繁殖... 详细信息

目的:本文旨在探讨参与γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,gaba)分解代谢的γ-氨基丁酸转氨酶(γ-aminobutyric acid transaminase,gaba-t)及其基因在不同发育阶段雌性大鼠生殖轴中的表达规律,以及抑制gaba-t对SD雌性大鼠初情期和繁殖性能的影响,为雌性动物生殖调控提供科学的理论依据。方法:选取不同发育阶段(幼儿期,10 d)、初情期前(21 d和28d)、初情期(33.67±0.49 d)和成年间情期(64.16±0.79 d)的雌性大鼠,采用免疫荧光和Rt-q PCR检测gaba-t及其基因在下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达;培养下丘脑神经元并添加gaba-t抑制剂(vigabatrin),运用Rt-q PCR检测其对生殖相关基因表达的影响;给初情期前(25 d,n=36)和成年间情期(65 d左右,n=32)大鼠侧脑室注射(intracerebroventricular injection,ICV injection)vigabatrin,观察其中24只初情期前大鼠阴门开启时间的变化并在阴门开启时处死,12只初情期前和12只成年间情期大鼠注射vigabatrin 4 h后处死,采集血液分离血清、下丘脑、垂体和左侧卵巢于-80℃保存,用ELISA检测血清激素水平,用Rt-q PCR检测生殖轴生殖相关基因转录水平,对右侧卵巢称重并观察组织学变化;阴道涂片观察剩余20只成年间情期大鼠发情周期和交配时间变化,分析大鼠产仔性能和哺乳性能。结果:(1)在下丘脑中,gaba-t主要分布于弓状核(arcuate nucleus,ARC)、室旁核(paraventricular nucleus,PVN)和室周核(periventricular nucleus,Pe N),且在这三个核团中,初情期时gaba-t荧光强度最高(Pt m RNA转录水平在幼儿期、初情期前(28 d)和初情期极显著降低(Pt m RNA转录水平极显著低于初情期前(21 d)和初情期(Pgaba-t主要分布于腺垂体,且gaba-t荧光强度在初情期最低(Pt m RNA转录水平最低,极显著低于幼儿期、初情期前(21 d)、初情期和成年期(Pt m RNA的转录水平无显著差异(P>0.05),与这两个时期相比,初情期前(21 d)和成年期的Abat m RNA的转录水平极显著降低(Pgaba-t主要分布于卵母细胞和颗粒细胞,且gaba-t荧光信号在成年期最强(Pt m RNA转录水平却最高(Pt m RNA转录水平显著高于初情期前(28 d)(Pt m RNA转录水平无显著差异(P>0.05)。(2)下丘脑神经元添加vigabatrin后,与对照组相比,25μg/m L和50μg/m L组的Abat m RNA和Rfrp-3 m RNA转录水平极显著降低(P0.05)。(3)初情期前(25 d)大鼠侧脑室注射1μg/g和2μg/g vigabatrin均显著推迟大鼠初情期启动时间(Pt m RNA(Pgaba-t和LH(P0.05)。(4)成年间情期大鼠侧脑室注射vigabatrin后发情

关键词： gaba-t 初情期繁殖性能生殖激素大鼠

舒郁胶囊对PMS肝气郁证大鼠关键脑区Glu-gaba代谢通路中GAD、gaba-t、GAt-1变化的影响

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舒郁胶囊对PMS肝气郁证大鼠关键脑区Glu-GABA代谢通路中GAD、GABA...

作者：张媛媛山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究经前期综合征(Premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证大鼠模型在接受期(Receptive phases/R)和非接受期(Non-Receptive phases/NR)关键脑区中γ-氨基丁酸转氨酶(gaba transaminase,gaba-t)、谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)、γ-氨基丁酸转运体(gaba transporter,GAt-1)变化和调肝方药舒郁胶囊对其干预作用,探讨舒郁胶囊治疗PMS肝气郁证的作用机制。方法:1.以阴道涂片法筛选动情周期规律的雌性大鼠,据体质量、旷场总路程将大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+舒郁胶囊组(SY组)、模型+氟西汀组(FXt组)。以改进优化的慢性束缚应激法制备PMS肝气郁证大鼠模型,造模时间为两个动情周期。造模及药物干预结束后,采集大鼠体质量,旷场总路程和强迫游泳悬浮不动时间等行为学指标,分别于接受期和非接受期采集外周血以及中枢关键脑区海马、额叶、顶区、下丘脑,存于-70℃待检测。***法分别检测接受期、非接受期各组大鼠外周血清中谷氨酸(glutamate,Glu)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,gaba)的含量。***法分别检测接受期、非接受期各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中GAD、gaba-t的活性。4.实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测接受期、非接受期各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中gaba-t、GAD、GAt-1的mRNA及蛋白表达情况。结果:1、各组大鼠行为学评价:(1)体质量增加量:束缚应激造模结束后,与对照组正常大鼠相比,模型组大鼠体质量增加量显著性降低(Pt组大鼠体质量增加量显著上升(Pt组大鼠旷场总路程显著性升高(Pt组悬浮不动时间降低显著(Pgaba浓度比较:在非接受期下,与对照组正常大鼠相比,模型组大鼠的Glu浓度显著升高(Pt组和SY组的Glu浓度显著降低(Pgaba浓度显著降低(Pt组和SY组的gaba浓度显著升高(Pgaba含量都无显著性差异(P>0.05)。3、接受期和非接受期各组大鼠gaba-t,GAD酶的活性变化情况:接受期和非接受期各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑的gaba-t,GAD酶的活性均无显著性差异(P>0.05)。4、接受期和非接受期各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中的gaba-t、GAD、GAt-1的m RNA及蛋白表达情况:?mRNA表达情况:在接受期下,各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中的gaba-t、GAD、GAt-1的mRNA表达均无显著性差异(P>0.05)。在非接受期下,与正常对照组相比,模型组海马、额叶、下丘脑的gaba-t、GAt-1的mRNA表达显著下降(Pgaba-t、GAt-1表达量上升(Pt组、SY组的海马、额叶、下丘脑中的gaba-t、GAt-1的mRNA表达显著升高(Pgaba-t、GAt-1的m RNA表达下降;海马、额叶、顶区、下丘脑中的GAD65、GAD67的mRNA表达显著降低(Pgaba-t、GAD、GAt-1的蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。在非接受期下,与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠海马、额叶、下丘脑的gaba-t、GAt-1蛋白含量显著性降低(Pgaba-t、GAt-1蛋白含量显著性升高(Pt组、SY组大鼠海马、额叶、下丘脑的gaba-t、GAt-1蛋白含量显著性升高(Pgaba-t、GAt-1蛋白含量降低,而海马、额叶、顶区、下丘脑中的GAD65蛋白含量显著性降低(P<0.05),海马、额叶、下

关键词：舒郁胶囊 PMS肝气郁证 gaba-t GAD GAt-1

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肝性脑病小鼠gaba—t及其抑制物的研究

重庆医科大学学报 1989年第4期14卷 275-280页

作者：蒋晓秋王征泰重庆医科大学生化教研室

采用修改的^(14)C-gaba法测定小鼠脑、肝、肾组织gaba-t活性,方法灵敏可靠。氨基半乳糖诱发的肝性脑病小鼠肝脏gaba-t活性明显降低。首次报道了小鼠肝匀浆上清液对脑gaba-t有抑制作用,经加热、盐析、Sephadex G-150层析,抑制活性在洗脱... 详细信息

采用修改的^(14)C-gaba法测定小鼠脑、肝、肾组织gaba-t活性,方法灵敏可靠。氨基半乳糖诱发的肝性脑病小鼠肝脏gaba-t活性明显降低。首次报道了小鼠肝匀浆上清液对脑gaba-t有抑制作用,经加热、盐析、Sephadex G-150层析,抑制活性在洗脱前段。提示严重肝损害时肝脏对gaba的分解代谢降低。

关键词：肝性脑病 gaba-t 抑制物

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三种gaba-t测定方法的比较

重庆医科大学学报 1990年第1期15卷 70-73页

作者：李倩王征泰何通川蒋晓秋重庆医科大学生化教研室

γ-氨基丁酸(gaba)是体内主要的抑制性神经递质。它在脑内的含量高,分布广。它还与一些疾病如Huntington’s病,癫痫等发病有关。由于gaba转氨酶(gaba-t,EC2.***.1.19)是gaba分解代谢的限速酶。

关键词： gaba-t 测定转氨酶氨基丁酸

天麻普通粉、破壁粉、冻干粉对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织gaba-t mRNA及蛋白表达的影响

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中国民族民间医药 2019年第16期28卷 19-23页

作者：陈露露柴艺汇田兴中刘春艳谢宇周雯牛建均张丽艳贵州中医药大学贵州贵阳550025 张家口市第五医院河北张家口075000 贵州广济堂药业有限公司贵州贵阳550014

目的:研究天麻普通粉、破壁粉、冻干粉对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织γ-氨基丁酸转氨酶(7-Aminobutyrate transaminase,gaba-t) mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨天麻破壁粉、冻干粉对神经细胞的保护作用机制,并对3种不同加工工艺的天麻... 详细信息

目的:研究天麻普通粉、破壁粉、冻干粉对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织γ-氨基丁酸转氨酶(7-Aminobutyrate transaminase,gaba-t) mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨天麻破壁粉、冻干粉对神经细胞的保护作用机制,并对3种不同加工工艺的天麻的效应差异性进行对比,为合理使用不同加工工艺的天麻提供实验参考。方法:利用戊四唑惊厥模型,将SD大鼠随机分为正常组,模型组,阳性对照组,天麻(普通粉、破壁粉、冻干粉)低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g/kg)。用荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测不同工艺的天麻对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织gaba-t mRNA表达的情况;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同工艺的天麻对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织gaba-t蛋白表达情况。结果:Rt-PCR和WB检测显示,模型组大鼠海马组织gaba-t mRNA和蛋白相对表达量显著升高(Pgaba-t mRNA和蛋白相对表达量(Pgaba-t mRNA及蛋白表达水平有关。

关键词：天麻破壁粉冻干粉抗惊厥 gaba-t

力竭运动前后及恢复期大鼠脑皮质运动区gaba含量及GAD、gaba-t活性的变化

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南京体育学院学报（自然科学版） 2005年第3期4卷 5-8,12页

作者：胡江平张蕴琨南京体育学院运动人体科学系江苏南京210014

目的:观察力竭运动前后及恢复期大鼠脑皮质运动区gaba含量及GAD、gaba-t活性的动态变化。方法:成年雄性SD大鼠进行一次性力竭游泳,用荧光法测定其脑皮质运动区gaba含量及GAD、gaba-t活性。结果:力竭运动前后及恢复期大鼠脑皮质运动区GA... 详细信息

目的:观察力竭运动前后及恢复期大鼠脑皮质运动区gaba含量及GAD、gaba-t活性的动态变化。方法:成年雄性SD大鼠进行一次性力竭游泳,用荧光法测定其脑皮质运动区gaba含量及GAD、gaba-t活性。结果:力竭运动前后及恢复期大鼠脑皮质运动区GA-BA含量、GAD与gaba-t活性出现明显变化。结论:运动性疲劳时gaba可能是脑的机能抑制状态的主导因素之一。力竭运动后GAD、gaba-t活性明显增高,gaba的代谢加快。中枢机能的恢复具有时间延续性。gaba代谢酶的变化可以用来评定运动过程及恢复期中枢机能状态。

关键词：力竭运动脑皮质运动区 gaba GAD gaba-t

雌激素及孕激素对大鼠海马GAD67mRNA和gaba-tmRNA表达水平的影响

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中华医学杂志 1998年第9期78卷 708-709页

作者：王伟阮旭中朱长庚同济医科大学附属同济医院神经内科同济医科大学基础医学院

海马是中枢神经系统内对癫痫最敏感的脑区和两性激素反应区［１］。为了确定雌激素及孕激素与海马内γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）能神经元是否存在相互作用，探讨二者与癫痫之间的关系，明确雌激素和孕激素的作用位点，我们采用来源于鼠脑... 详细信息

海马是中枢神经系统内对癫痫最敏感的脑区和两性激素反应区［１］。为了确定雌激素及孕激素与海马内γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）能神经元是否存在相互作用，探讨二者与癫痫之间的关系，明确雌激素和孕激素的作用位点，我们采用来源于鼠脑的谷氨酸脱羧酶（ｇｌｕｔａｍｉｎａ...

关键词：雌激素孕激素海马 GAD mRNA gaba-t 癫痫

高粱Sbgaba-ts基因的克隆、功能研究及其遗传转化体系的建立

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高粱SbGABA-Ts基因的克隆、功能研究及其遗传转化体系的建立

作者：杨泽伟西南科技大学

学位级别：硕士

生态环境恶化严重影响作物生长发育及产量。作为粮饲能兼用的世界第五大农作物,高粱具有生长迅速、产量高、抗逆性突出等诸多优点,其种质的创新与性状改良对于解决耕地、人口、资源、能源与环境之间矛盾有重要意义。γ-氨基丁酸(γ-amin... 详细信息

生态环境恶化严重影响作物生长发育及产量。作为粮饲能兼用的世界第五大农作物,高粱具有生长迅速、产量高、抗逆性突出等诸多优点,其种质的创新与性状改良对于解决耕地、人口、资源、能源与环境之间矛盾有重要意义。γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,gaba)途径代谢旁路途径位于tCA循环的一个支路,已有研究表明,该途径与呼吸作用、激素合成、多胺代谢、活性氧生成、信号传递等生理过程联系紧密,参与植株的生长发育和胁迫应答调控。高粱中gaba途径的研究尚属空白。本研究首次从高粱中分离了与gaba代谢相关的关键基因γ-氨基丁酸转氨酶(gaba-t)基因,并对其进行了亚细胞定位分析、原核表达和酶活分析、组织发育和胁迫应答表达模式分析,同时对农杆菌介导的高粱幼胚遗传转化体系进行了研究,主要结果如下:1.利用同源序列比对和Rt-PCR技术首次从高粱中分离鉴定出Sbgaba-ts基因,该基因存在两个亚型(登录号分别为:XM02445162、XM02-447046),其氨基酸序列相似性为78.8%;保守结构域分析表明,这两个基因均隶属于乙酰鸟氨酸转氨酶(AAt)超家族;系统发育树分析显示Sbgaba-ts归属于单子叶植物分支,与水稻gaba-t基因亲缘关系较近。2.通过Sbgaba-ts的N端信号肽序列与GFP融合表达,利用烟草叶片瞬时表达系统进行亚细胞定位分析,激光共聚焦显微镜(CLSM)观察可知,Sbgaba-ts均定位于线粒体中,表明Sbgaba-ts主要在线粒体中行使功能。这与Sbgaba-ts亚细胞定位的在线程序预测结果一致。3.去除信号肽的Sbgaba-ts基因的编码区序列,能通过大肠杆菌原核表达系统高效表达,重组蛋白经过纯化和蛋白酶活性测定,结果表明Sbgaba-ts蛋白具有γ-氨基丁酸转氨酶活性,并能以丙酮酸和乙醛酸为氨基酸受体,而未检测出α-酮戊二酸代谢活性。4.通过实时荧光定量PCR检测高粱Sbgaba-ts基因的组织发育表达模式,结果表明,Sbgaba-ts在高粱各组织器官的不同发育阶段均有表达,丰度随组织发育有所变化;持续高盐胁迫下高粱幼苗Sbgaba-ts基因的表达模式表明,Sbgaba-ts的表达受盐胁迫诱导,其丰度的增加一定程度上与积累的gaba含量相适应,表明Sbgaba-ts可能通过促进gaba的分解代谢参与植物的逆境胁迫响应。胁迫下高粱叶片中Sbgaba-ts的表达具有明显的昼夜节律性。5.利用高粱幼胚为受体材料,探究高粱基因型对组培过程的影响,结果表明,基因型在愈伤组织诱导、增殖和分化过程中均扮演了关键角色,绝大多数品种容易发生褐化导致愈伤组织异常生长,而褐化较轻的品种往往在组培过程中表现良好。通过优化高粱遗传转化体系,利用农杆菌介导法,最终成功获得了Sbgaba-ts基因的过表达植株,为进一步验证其功能创造了材料。这些研究结果为深入了解gaba途径调控植物生长发育和胁迫应答的分子机理奠定了基础,为研究高粱抗逆分子机理和抗逆基因工程提供了科学依据,为利用基因工程的方法改良作物的抗逆性创造了条件。

关键词： gaba-t gaba途径高粱基因功能遗传转化

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高含量gaba水稻新种质创制

高含量GABA水稻新种质创制

作者：张敏南京农业大学

学位级别：硕士

γ-氨基丁酸(gaba)是一种广泛存在于动植物和微生物中的四碳非蛋白质氨基酸,具有降血压等生理功能。gaba代谢过程中的gaba转氨酶(gaba transaminase,gaba-t)能催化gaba转变形成琥珀酸,导致gaba含量较低。通过基因工程的手段降低gaba-t... 详细信息

γ-氨基丁酸(gaba)是一种广泛存在于动植物和微生物中的四碳非蛋白质氨基酸,具有降血压等生理功能。gaba代谢过程中的gaba转氨酶(gaba transaminase,gaba-t)能催化gaba转变形成琥珀酸,导致gaba含量较低。通过基因工程的手段降低gaba-t的活性,可有效提高稻米中的gaba含量,创制出富含gaba的功能性水稻种质。本研究通过CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建了水稻中gaba转氨酶1(Osgaba-t1),gaba转氨酶2(Osgaba-t2),gaba转氨酶3(Osgaba-t3),gaba转氨酶4(Osgaba-t4)4个基因的敲除载体,通过农杆菌介导转化法,将其转化至高产优质粳稻品种宁粳4号和宁粳7号中。通过对检测为阳性的t7代植株分单株收种,自交繁殖,发现与受体植株相比,敲除株系的gaba含量有一定上升,糙米中gaba含量均高于精米,其中Osgaba-t1-16bp-cr的转基因植株gaba含量上升最明显,其糙米中gaba含量高达60mg/100g,是亲本的6倍左右。其精米中gaba含量达47mg/100g,是亲本的9倍左右。其农艺性状略有变化,抽穗期平均晚两天,株高不同程度变矮等。其中敲除突变体osgaba-t1-16bp-cr和osgaba-t3-cr种子中的直链淀粉含量相较于亲本上升2-3%,osgaba-t2-cr下降2-6%,其中osgaba-t2-cr碱基C插入的转基因家系下降6%,而脂肪含量没有差异。本实验室前人利用RNA干扰(RNA Interference,RNAi)技术,构建了水稻中gaba转氨酶1基因(Osgaba-t1)的干扰载体,通过农杆菌介导法,将其转化至宁粳1号中,本研究即对前人获得的Osgaba-t1-RNAi家系MO1进行了鉴定,同时对以MO1为母本、宁粳7号及其他优良品种为父本杂交配组的后代进行了鉴定。实时荧光定量PCR结果表明MO1中Osgaba-t1的表达显著下调。MO1干扰家系糙米米粉中的gaba含量为180mg/100g,比受体品种增加7倍左右,精米中gaba含量为70mg/100g,比受体品种增加了10倍左右,而其他主要氨基酸含量并没有明显变化。对鉴定出的148个阳性单株的gaba含量进行测定,发现其糙米米粉中gaba含量为110mg/100g,其精米米粉中gaba含量为45mg/100g,同时其农艺性状亦有改善,相较于MO1,其株高增高,分蘖增加,穗粒数增多,千粒重增加,综合农艺性状明显得到改善。本研究利用CRISPR-cas9基因组编辑技术及RNA干扰技术,降低Osgaba-t基因活性,可有效提高稻米中gaba含量,同时其他重要氨基酸的含量没有明显变化,为高含量gaba功能型水稻的培育提供了新种质。

关键词： gaba gaba-t 水稻 RNAi CRISPR-Cas9